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依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注后半胱天冬酶-3的影响
目的:本试验通过观察依达拉奉对半胱天冬酶-3表达的影响,探讨它的保护作用及作用机制.方法:Wistar雌、雄性大鼠共42只,随机分为假手术组、盐水对照组及依达拉奉用约组,对照组及用药组再进一步分为6 h、24 h、48h.用免疫组化方法检测Caspase-3的蛋白表达的变化.结果:假于术组儿乎无Caspase-3蛋白的表达,盐水组Caspase-3蛋白表达6 h开始升高,于24 h达到高峰并维持到48 h.用药组Caspase-3蛋白表达较盐水组减少,P＜0.01.结论:依达拉奉可减少大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3蛋白的表达,达到脑保护作用.
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大鼠高血压性脑出血血肿量对Caspase-3表达的影响
目的 观察大鼠高血压性脑出血后血肿周围组织Caspase-3的表达,分析其表达与血肿量及出血时间的关系.方法 取成年SD大鼠100只,随机分为对照组、脑出血1组、脑出血2组,采用双侧肾动脉前支部分热凝,立体定位仪下自体血脑内注入法建立大鼠高血压性脑出血模型.用免疫组化方法观察Caspase-3的表达.结果 大鼠高血压性脑出血后6 h Caspase-3开始表达,24 h达高峰,血肿量大的脑出血组(脑出血2组)相应时间点Caspase-3的表达较血肿量小的脑出血组(脑出血1组)明显增高(P<0.05).结论 高血压性脑出血后Caspase-3的表达随血肿量的增加表达也增加,从而加重了脑出血后血肿周围脑组织的凋亡.
关键词： 颅内出血 高血压性 血肿 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 大鼠 -
JAK/STAT通路对缺血再灌注心肌NF-κB和Caspase-3表达的影响
目的:研究Janus激酶/信号转导和转录激活子(janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)通路对缺血再灌注损伤所致大鼠心肌组织NF-κB和Caspase-3表达的影响.方法:采用离体工作心脏灌注模型, 大鼠随机分为正常对照组、缺血再灌注组、JAK抑制剂-AG490治疗组、STAT抑制剂-RMP治疗组.采用TUNEL 法检测心肌细胞凋亡,Western印迹法测定心肌NF-κB活性,酶标法测Caspase-3活性.结果:AG490及RMP治疗组大鼠心肌细胞凋亡指数明显低于I/R组,高于对照组.与正常对照组相比, 心肌组织NF-κB和Caspase-3活性在缺血再灌注后有显著性增加(P<0.01).AG490及RMP处理后,NF-κB和Caspase-3活性与缺血再灌注组相比有明显下降(P<0.01);NF-κB活性增加时Caspase-3含量也相应升高,反之亦相同,两者呈一定程度的正相关.结论:抑制JAK/STAT通路的活化有助于减轻缺血再灌注所致心肌细胞凋亡的发生.
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白藜芦醇抑制白血病K562细胞增殖机制的探讨
目的:探讨白藜芦醇(RES)抑制白血病K562细胞增殖的机制及非折叠蛋白应答(UPR)对其机制的影响.方法:选取不同浓度的RES干预K562细胞,并且用RES(100μmol/L)干预K562细胞不同时段；利用MTT法检测细胞存活率；利用流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞凋亡率；利用蛋白质印迹法检测凋亡早期蛋白及UPR靶点蛋白表达水平；利用实时定量PCR法检测GRP78和CHOP mRNA的表达.结果:RES导致K562细胞细胞存活率明显减少,并呈剂量依赖方式；RES的生长抑制作用主要是阻断细胞周期中的G1期,G2/M期的变化较小；RES处理的K562细胞没有显著的细胞凋亡.RES可提高GRP78 mRNA的表达水平,呈剂量及时效依赖方式,RES对CHOP mRNA水平也有诱导作用,但只有在RES浓度较大时(50 μmol/L)或作用时间较长时(8 h)才开始上调,并且上调幅度较小.蛋白质印迹分析证实RES提高UPR靶点(GRP78、GRP94、磷酸化eIF2a和剪接作用XBP-1)的蛋白表达水平.结论:RES优先诱导UPR存活分支,表明UPR参与RES抑制白血病K562细胞增殖的机制.
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半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马的表达
目的:探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马中的表达情况及其与神经元凋亡之间的关系.方法:选取成年雄性Wistar大鼠88只,随机分为脑淋巴引流阻断组40只、假手术组40只及正常对照组8只.脑淋巴引流阻断组和假手术组分为术后1,3,5,7,14 d 5个时间点,每个时间点8只.脑淋巴引流阻断组建立淋巴滞留性脑病动物模型,在损伤后各时间点取颞顶皮质、海马区脑组织.假手术组只分离和暴露淋巴结,但不结扎淋巴管,亦不摘除淋巴结.用半定量反转录-聚合酶链反应方法观察淋巴滞留性脑病大鼠损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA的表达情况.结果:88只大鼠均进入结果分析.①在颞顶皮质,Caspase3 mRNA在淋巴阻塞后3 d内表达上调,以第1天表达高,淋巴阻塞后3 d内Caspase 3 mRNA表达比假手术组及对照组高,且有统计学意义(F=29.892,p=0.001＜0.01).淋巴阻塞3 d后表达接近正常对照及假手术组.对照组与假手术组之间差异无统计学意义.②在海马,Caspase3 mRNA较颞顶皮质表达上调更明显,以第1天表达高,淋巴阻塞后5 d内Caspase-3 mRNA表达比假手术组及对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),5 d后表达接近正常对照及假手术组.结论:在淋巴滞留性脑病大鼠模型中神经元凋亡的发生可能与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的激活有关.
关键词： 脑水肿/病理学 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 细胞凋亡 大鼠 -
双后肢腰椎退行性变大鼠椎间盘半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达
目的:观察双后肢腰椎退行性变大鼠模型中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3的表达变化.方法:实验于2005-05/2006-03在上海中医药大学动物中心实验室完成.将20只雄性SD大鼠单纯随机分为正常组和模型组2组,各10只.模型组大鼠离断双肩关节,模拟直立行走,正常组不干预.3个月后,拉颈处死动物,取腰椎L3-4和L4-5椎间盘,使用电镜观察腰椎间盘细胞微观形态;免疫组化法检测关节软骨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达,阳性表达为棕黄色,主要存在于细胞浆内,用平均灰度值和平均吸光度对阳性信号进行量化(灰度值越小表达信号越强,平均吸光度则反之);反转录-聚合酶链反应法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3 mRNA的表达强度.结果:20只大鼠均进入实验结果分析,无脱失.①正常组未见有明显凋亡细胞,而模型组椎间盘出现明显凋亡.②半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达:模型组明显高于正常组(平均灰度值:134.67±11.12,178.10±1.08,P＜0.01;平均吸光度:0.282±0.034,0.155±0.005,P＜0.01).③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA表达:模型组明显高于正常组(2.642±0.365,0.172±0.028,P＜0.01).结论:双后肢腰椎退行性变大鼠模型中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达增高,细胞凋亡增多.
关键词： 椎间盘 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 细胞凋亡 -
补肾通络方对大鼠膝关节炎软骨中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3的调节
目的:观察补肾通络方对骨性关节炎大鼠模型膝关节软骨半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3表达的调节作用.方法:实验于2005-05/2006-03在上海中医药大学动物中心实验室完成.将30只雄性清洁级SD大鼠抽签随机分为正常对照组、骨关节炎模型组、补肾通络方组,每组10只.造模方法:氯胺酮经腹腔注射,麻醉后纵行切开右膝部内侧皮肤,切断内侧副韧带,打开关节腔,切除内侧半月板,切断前后交叉韧带,缝合皮肤.干预方法:正常对照组随意放养,不做处理.补肾通络方药物组成:杜仲、山萸肉、熟地黄、秦艽、寄生、独活等,由上海中医药大学脊柱病研究所提供.自造模第2周开始灌药,2次/d,连续4周.骨性关节病模型组自造模第2周开始灌服等量生理盐水.干预4周后,拉颈处死动物.电镜观察细胞微观形态,免疫组化法检测关节软骨半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3蛋白表达,阳性表达为棕黄色,主要存在于细胞浆内.用平均灰度值和平均吸光度对阳性信号进行量化.RT-PCR法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3 mRNA的表达强度.结果:30只大鼠均进入结果分析,无脱失.①半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3表达:骨性关节病模型组明显高于正常对照组,差异非常显著(平均灰度值:142.07±4.04,195.65±2.7l,P＜0.01;平均吸光度:0.25±0.01,0.12±0.01,P＜0.01);补肾通络方组与骨性关节病模型组相比,差异非常显著[平均灰度值:167.62±2.70,142.07±4.04,P＜0.01;平均吸光度:0.18±0.01,0.12±0.01,P＜0.01].②半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3 mRNA表达:骨性关节病模型组明显高于正常对照组,差异非常显著(3.16±0.26,0.19±0.03,P＜0.01);补肾通络方组与骨性关节病模型组相比,差异非常显著(0.41±0.05,3.16±0.26,P＜0.01).结论:补肾通络方能够下调膝骨性关节炎半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3的表达.
关键词： 骨关节炎 膝/外科学 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 细胞凋亡 -
乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡的影响
目的:观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后导致的细胞凋亡的影响.方法:实验于2005-09/2006-05在华中科技大学协和医院麻醉学实验室完成.纳入SD大鼠81只,先以"随机数字表法"分为糖尿病组(链尿佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导,45只大鼠诱导成功36只,成模率80%)和正常对照组(36只).以穿线结扎左冠脉制备心肌缺血再灌注模型,两组大鼠再分别随机分为假手术组、缺血再灌注组和乙酰半胱氨酸治疗组,每组12只.乙酰半胱氨酸给药组:100mg/kg(用蒸馏水配成50 g/L的溶液)灌胃,2次/d,连续1周,手术前1 h再腹腔注射乙酰半胱氨酸150 mg/kg;其他各组给予等量的蒸馏水.反转录-聚合酶链反应和免疫蛋白印迹分析法检测心肌半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA和蛋白的表达.原位末端标记法检测心肌凋亡细胞并计算凋亡指数.同时检测丙二醛含量和肌酸激酶同工酶活性.结果:去除诱导糖尿病模型失败的9只大鼠,终有72只大鼠进入结果分析.①糖尿病与正常假手术组之间相比,丙二醛、肌酸激酶同工酶、凋亡指数、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA和蛋白的表达水平差异无显著性意义(P＞0.05).②缺血再灌注后,糖尿病和正常乙酰半胱氨酸治疗组丙二醛、肌酸激酶同工酶、凋亡指数、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA和蛋白的表达水平均低于各自对应的缺血再灌注组(P＜0.01),高于各自假手术组(P＜0.01).③上述参数糖尿病缺血再灌注组高于正常缺血再灌注组(P＜0.01),糖尿病乙酰半胱氨酸干预组高于正常乙酰半胱氨酸干预组(P＜0.01).结论:乙酰半胱氨酸可抑制缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA和蛋白的表达,减少缺血再灌注引起的糖尿病和非糖尿病大鼠心肌细胞凋亡,对缺血再灌注心肌有保护作用,但糖尿病组的疗效低于正常组.
关键词： 心肌再灌注损伤 乙酰半胱氨酸 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 凋亡 -
三氟乙醚致大鼠反复惊厥后海马caspase-3、FasL的动态表达
目的 研究幼年大鼠反复惊厥后海马组织caspase-3、FasL表达的变化.方法 72只20日龄健康Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为2组:正常对照组、惊厥组.通过三氟乙醚反复吸入(1次/d,连续6 d),制作幼年大鼠惊厥动物模型.用免疫组化(SP)法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7 d海马组织中caspase-3和FasL蛋白的表达,RT-PCR方法检测各时相点海马组织中caspase-3 mRNA的表达.结果 反复惊厥结束后1、3、7 d海马组织caspase-3、FasL的表达和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 caspase-3、FasL参与了幼年期惊厥性脑损伤的病理过程.
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自由脂肪酸依赖CASPASE3诱导人肝肿瘤细胞株HepG2凋亡
目的 利用体外脂肪变性的模型,探讨不同自由脂肪酸(FFA)的细胞毒性和诱导细胞凋亡的机制.方法 分别采用DAPI核染剂和借助半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)荧光分析试剂盒检测人肝肿瘤细胞株HepG2在不同脂肪酸在不同时间后(12 h、24 h、48 h)TG和细胞凋亡率和Cagpage3活性的变化,以及Z-VAD-FMK在不同时间对棕榈酸(PA)诱导的细胞凋亡和Caspagc3的活性的抑制作用.结果 亚油酸(LA)组、油酸(OA)组在各时间段的TG的积累高于PA组,但凋亡率和Cagpage3活性均低于PA组,并呈时间依赖性.加入Z-VAD-FMK后PA导致的凋亡率和Cmpage3活性均显著性降低.结论 棕榈酸以Caspage3蛋白酶依赖的方式诱导脂凋亡.油酸和亚油酸通过形成甘油三酯,防止肝细胞脂凋亡.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 脂肪酸类/药理学 肝肿瘤/代谢 细胞凋亡 -
内镜治疗急性梗阻性化脓性胆管炎对Caspase3活性、PMN凋亡及呼吸爆发的影响
目的 研究内镜治疗急性梗阻性化脓性胆管炎(AOSC)对外周血caspase3活性、中性粒细胞(PMN)凋亡率及呼吸爆发的影响.方法 检测并比较50名正常健康人,90例AOSC内镜治疗组及38例手术治疗组患者在治疗前、后外周血caspase3活性,PMN凋亡率、呼吸爆发及住院时间变化.结果 AOSC患者治疗前与正常对照者比较:外周血caspase3活性、PMN凋亡率及呼吸爆发差异均有统计学意义(P<0.01).在治疗后第5天,内镜治疗组及手术治疗组外周血caspase3活性,PMN凋亡率及呼吸爆发均较治疗前明显改善(P<0.01),且内镜治疗组基本恢复正常(P>0.05),住院时间明显短于手术治疗组(P<0.01).结论 AOSC患者外周血存在caspase3活性降低、PMN凋亡延迟及呼吸爆发增强,内镜治疗AOSC能较快提高外周血caspase3活性,促进PMN凋亡及减轻呼吸爆发,减少患者住院时间.
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c-FLIP在膀胱移行细胞癌中的表达及其对预后的影响
目的:研究膀胱癌中c-FLIP的表达与肿瘤分期、分级和类型的关系以及这些因素与病人预后的关系,从而为膀胱移行细胞癌侵袭性和预后的判断提供科学理论依据.方法:收集56例临床资料完整石蜡包埋的肿瘤标本,用免疫组化方法测定c-FLIP的袁达,采用SPSS12.0软件包分析其表达与肿瘤组织学性状的关系以及对病人预后的影响.结果:c-FLIP的阳性表达在56个病例中分别为:64%(36/56);其阳性表达在肿瘤高分期组中显著高于低分期组(P＜0.05),而在不同的分级和不同的肿瘤类型组间阳性表达无显著性差异(P＞0.05);生存分析发现c-FLIP对生存影响具有显著性意义(P＜0.05).结论:c-FLIP对评价膀胱癌的侵袭性和预后是一个重要的独立因素.检测膀胱移行细胞癌组织中的c-FLIP的表达可作为估计病情发展、判断患者预后的重要指标.
关键词： 膀胱肿瘤/诊断 抑制蛋白/代谢 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 预后 -
次硫酸氢钠甲醛对小鼠大脑Caspase-3、NOS-1表达的影响
目的:研究摄入次硫酸氢钠甲醛后小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1表达的变化,以探讨次硫酸氢钠甲醛对大脑的影响.方法:健康雄性昆明小鼠,随机分为10d组、30d组,每组再分为对照组和0.4‰、0.8‰、1‰三个剂量实验组.10d后处死10d组小鼠;30d后处死30d组小鼠,取出大脑,采用Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察.结果:10d实验组小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1阳性表达同对照组比较表达明显增强,不同剂量间未见显著性差异.30d实验组小鼠大脑皮层中Caspase一3阳性表达和对照组相比无显著性变化,不同剂量间未见明显差异;30d实验组小鼠大脑皮层中NOS-1阳性表达同对照组相比明显降低,不同剂量间未见显著性差异.结论:次硫酸氢钠甲醛喂食后,可引起小鼠大脑皮层中caspase-3、NOS-1表达增高,提示次硫酸氢钠甲醛促使大脑皮层中神经元凋亡增加,长期摄入可使神经元濒临死亡.
