198 葡萄中的原花青素抑制活化中性粒细胞呼吸爆发和溶酶体酶释放

437针刺对于中性白细胞呼吸爆发的作用:对照单盲研究

半边风苯丙素类成分及抑制中性粒细胞呼吸爆发活性研究

目的:继续对半边风的化学成分进行研究,并对包括前期研究的9个苯丙素类化合物进行生物活性评价,为半边风在畲族医药中的临床应用提供初步的药理学依据.方法:利用各种柱色谱对半边风根95％乙醇提取物正丁醇部位的化学成分进行分离纯化,根据化合物的理化性质及光谱数据鉴定其结构.采用化学发光法评价9个苯丙素类成分对大鼠中性粒细胞(PMN)呼吸爆发的抑制活性.结果:分离了4个苯丙素类化合物,分别鉴定为芥子醛葡萄糖苷(1)、丁香苷(2)、松柏醛葡萄糖苷(3)、淫羊藿苷E5(4).在药理活性研究中,有6个苯丙素化合物对大鼠PMN呼吸爆发表现出不同的活性,其活性大小依次为东莨菪素＞右旋松脂素＞右旋丁香树脂酚＞松柏醛＞ β-hydroxypropiovanillon＞维生素C(Vc)＞淫羊藿苷E5,而芥子醛葡萄糖苷、丁香苷和松柏醛葡萄糖苷则对PMN呼吸爆发没有抑制作用.结论:化合物3为首次从该属植物中分离得到.半边风中的苯丙素类化学成分具较强的抗PMN呼吸爆发作用,酚羟基可能是苯丙索类化合物抑制大鼠PMN呼吸爆发的重要基团.

黄连生物碱对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞的影响

该文主要研究4种黄连生物碱对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,初步探讨其调节机制.MTT法检测黄连生物碱对巨噬细胞活力的影响;采用中性红实验和NBT法分别测定生物碱对巨噬细胞吞噬和呼吸爆发活性的影响;通过实时荧光定量PCR检测黄连生物碱处理后巨噬细胞呼吸爆发相关基因的表达量;用荧光分光光度计检测生物碱对巨噬细胞膜蛋白构象的影响.结果显示,4种黄连生物碱对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能都有不同程度的提高,小檗碱效果好;小檗碱、黄连碱和巴马汀对佛波酯(PMA)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发活性具有正向调节的作用,并且能够在一定程度上增加巨噬细胞中PKC,p40phox或p47phoxmRNA的表达量,而表小檗碱对呼吸爆发没有显著性影响;黄连生物碱能够改变巨噬细胞膜蛋白的构象,其中小檗碱作用强.结果表明黄连生物碱可能通过改变巨噬细胞膜蛋白构象从而激活巨噬细胞,增强其吞噬和呼吸爆发功能,而且,生物碱对巨噬细胞呼吸爆发的调节机制还可能与相关基因PKC,p40phox和p47phox mRNA的表达有关.

中性粒细胞呼吸爆发的产生机制及其炎症效应

中性粒细胞的呼吸爆发功能在宿主防御及炎症反应中起着重要的作用.该反应起始于吞噬小体表面的NADPH氧化酶的活化,它将O2还原成O-2,随后O-2经歧化作用转变成H2O2.在有Cl-的情况下,髓过氧化物酶可以催化H2O2生成HOCl.HOCl是高效的杀菌剂,通过与邻近的巯基、氨基反应发挥其杀伤毒性.呼吸爆发在清除微生物的同时也会对机体正常组织造成损伤,许多疾病的发生均与活性氧的代谢有关.

大鼠内毒素血症时外周血及肺泡内中性粒细胞死亡方式及呼吸爆发

本研究观察大鼠内毒素血症时肺组织中及外周血多形核中性粒细胞(PMN)凋亡、坏死及功能改变的差异.采用Wistar大鼠20只,腹腔注射LPS(O55B5,5 mg/kg)造成内毒素血症,给予LPS后2,4,8,12小时(每组5只动物)取血及支气管肺泡灌洗,密度梯度法分离PMN,用流式细胞仪测定凋亡和坏死比例以及呼吸爆发功能的改变,同时采用5只大鼠作为正常对照.结果显示,内毒素血症时外周血和支气管肺泡灌洗液中PMN凋亡细胞比例相似.但与对照相比,外周血PMN坏死比例明显增加,呼吸爆发能力明显受抑,而支气管肺泡灌洗液PMN坏死比例显著减少,呼吸爆发能力显著增强.结论:在内毒素血症时,扣押于肺组织中的PMN在凋亡和坏死上表现出与外周血PMN不同的改变,其结果是组织中PMN存活增加,并持续处于活化状态,这与PMN造成组织损伤有关.

S1P/S1PR信号通路对中性粒细胞功能的影响

本研究旨在检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)对fMLP活化的中性粒细胞的引发作用,检测粒细胞活化后发生呼吸爆发的产物,并探究S1P引发作用的信号通路.流式细胞术检测新鲜分离的中性粒细胞的状态；高铁细胞色素C还原法间接计算超氧阴离子(O2-)释放量；二氢罗丹明123流式细胞术检测粒细胞的呼吸爆发程度；免疫印迹法检测PI3K-Akt信号通路相关蛋白的表达.结果表明,S1P预处理后fMLP活化的粒细胞所释放的O2-量明显增高；S1P引发的fMLP活化组中,罗丹明123的平均荧光强度明显高于fMLP单独处理组；PI3K及Akt蛋白参与了粒细胞呼吸爆发的信号传递.结论:S1P是一种新的粒细胞引发试剂,较高浓度S1P( 10-6μmol/L)能够引发fMLP活化的中性粒细胞发生呼吸爆发；该信号通路可能为S1P与粒细胞上的S1P受体作用,活化下游的PI3K,再通过Akt传递信号,终活化NADPH氧化酶,发生呼吸爆发.

跨膜型与分泌型TNF对中性粒细胞功能的影响

目的比较跨膜型和分泌型TNF-α对中性粒细胞生物学功能影响的异同，以探讨两型TNF在炎症中的作用。方法通过吞噬、呼吸爆发、原位杂交等方法研究跨膜型和分泌型TNF-α对中性粒细胞生物学功能的影响。结果分泌型TNF-α可促进中性粒细胞吞噬(P<0.001)、呼吸爆发功能(P<0.05)及IL-1β mRNA水平的表达，对中性粒细胞产生NO无明显影响；跨膜型TNF-α对中性粒细胞吞噬、呼吸爆发功能无明显影响，对IL-1β mRNA水平的表达仅有微弱的促进作用，但可明显促进中性粒细胞产生NO。结论分泌型TNF-α对中性粒细胞有明显的激活作用，而跨膜型TNF-α则可能对其功能具有调节作用。

CNI-1493对重症急性胰腺炎大鼠外周血多形核粒细胞功能的影响

目的探讨p38MAPK信号传导通路阻断剂(CNI-1493)对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis SAP)时外周血多形核粒细胞(polymorphonuclear, PMN)功能影响.方法以胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立SD大鼠SAP模型,将54只SD大鼠随机分为3组:假手术组(SO, n=18);SAP组(SAP n=18);CNI-1493治疗组(CNI, n=18),术后3 h、6 h、12 h取血,用密度梯度法分离PMN,用流式细胞仪测定呼吸爆发功能,并测定PMN释放髓过氧化物酶(MPO)的变化情况.结果 SAP组PMN呼吸爆发亢进,MPO释放明显增加,在各时间点上CNI-1493都能抑制PMN的功能亢进,减少MPO的释放.结论 CNI-1493可以明显抑制SAP时PMN的病理性功能亢进,是治疗SAP的重要机制之一,提示可能具有临床应用的前景.

肠缺血/再灌注损伤时中性粒细胞呼吸爆发活性的变化

目的:研究肠缺血/再灌注(I/R)时中性粒细胞(PMN)呼吸爆发活性的变化.方法:30只成年雄性Wistar大鼠,按照随机数字表法分为假手术,缺血45 min,缺血45 min再灌注60min、120min、360min等5组.阻断肠系膜上动脉血流45min后复流,复制I/R模型:假手术组只进行同样的手术操作但不阻断肠系膜上动脉血流.在各时间点分别取门静脉血测定白细胞计数,并分离PMN进行化学发光(CL)测定.结果:肠I/R损伤过程中,缺血组与假手术组比较,PMN的CL峰值无明显差异(P＞0.05),再灌注组PMN的CL峰值均明显升高(P＜0.01).肠缺血组白细胞数量较假手术组降低,再灌注后开始回升,再灌注360 min时白细胞计数高.PMN化学发光峰值变化和血白细胞计数的变化趋势呈显著正相关(r=0.748,P＜0.05).结论:肠I/R损伤可激活循环中的PMN,使血中的PMN数量增加,PMN的呼吸爆发化学发光活性明显升高,可能是引起全身炎症反应和器官损害的因素之一.

极低出生体重儿中性粒细胞呼吸爆发功能的研究

目的 探讨极低出生体重儿中性粒细胞呼吸爆发功能. 方法 以2012年7月1日至2012年12月31日收住复旦大学儿科医院的22例极低出生体重儿(very low birth weight infant,VLBWI)为VLBWI组,根据有无新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS),分为NRDS组和无NRDS组,各11例.以同期在上海市闵行区妇幼保健院出生的20例正常足月新生儿为对照.所有新生儿均排除早发型败血症.VLBWI组入院时留取桡动脉血1.5 ml,足月儿组出生时留取脐带血1.5 ml.对早产儿和足月儿进行中性粒细胞呼吸爆发功能检测,使用佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激中性粒细胞活化后,将二氢若丹明123(dihydrorhodamine-1,2,3,DHR)氧化为发出黄绿色荧光的若丹明123,用流式细胞仪检测荧光强度以评价中性粒细胞呼吸爆发功能.使用荧光标记的细胞色素b558单克隆抗体(7D5)标记,用流式细胞仪检测中性粒细胞gp91Phox的表达.采用Mann-Whitney U检验进行统计学分析.结果 无刺激时,VLBWI组发生呼吸爆发的中性粒细胞比例为(49.10±20.19)％,高于足月儿组的(18.73±6.81)％(Z=-4.911,P=0.000).PMA刺激后VLBWI组发生呼吸爆发的中性粒细胞比例为(96.58±3.44)％,高于足月儿组的(99.20±0.62)％,差异有统计学意义(Z=-3.186,P=0.001).VLBWI组中性粒细胞刺激指数为171.40±103.35,低于足月儿组的306.30±138.47,差异有统计学意义(Z=-3.413,P=0.001).VLBWI组中性粒细胞表达gp91Phox荧光强度几何均数为21.66±19.87,而足月儿组为19.60±8.03,2组差异无统计学意义(Z=-0.934,P=0.350).VLBWI组表达gp91Phox的中性粒细胞比例为(56.11±29.40)％,低于足月儿组的(80.14±14.87)％,差异有统计学意义(Z=-2.374,P=0.018).无刺激时,NRDS组发生呼吸爆发的中性粒细胞比例为(63.40±16.45)％,高于无NRDS组的(34.80±11.65)％,差异有统计学意义(Z=-3.382,P=0.001).NRDS组中性粒细胞刺激指数为129.46±75.36,低于无NRDS组的213.35±113.49,差异有统计学意义(Z=-2.331,P=0.020). 结论 VLBWI及足月儿出生时无刺激时发生呼吸爆发的中性粒细胞比例较高,VLBWI更为明显,极低出生体重儿和足月儿出生时中性粒细胞均表达蛋白gp91Phox.NRDS患儿中性粒细胞呼吸爆发功能及gp91Phox表达与无NRDS患儿比较,有降低趋势.

慢性肉芽肿病的实验室诊断

目的 总结功能、蛋白、基因诊断技术在慢性肉芽肿病(CGD)精准诊断中的价值.方法 回顾性分析2008年1月至2015年12月复旦大学附属儿科医院基因诊断明确的138例CGD患儿临床及实验室检查资料,总结流式细胞仪-二氢若丹明分析(DHR分析)检测的呼吸爆发功能刺激指数(SI),检测gp91蛋白表达情况,5个致病基因(CYBB、CYBA、NCF1、NCF2、NCF4)基因检测结果,并分析刺激指数、gp91蛋白、基因检测结果之间的相互关系.结果 138例基因诊断明确的CGD患儿中CYBB基因突变123例(89.1％)、CYBA基因突变4例(2.9％)、NCF1基因突变5例(3.6％)、NCF2基因突变6例(4.4％)、NCF4基因突变0例.SI范围为:0.8 ～60.5,第25、50、75百分位分别为1.7、2.7、4.7.112例CGD患儿检测gp91表达结果,其中100例不表达gp91,2例部分表达gp91,10例正常表达gp91.发现的未曾报道的突变位点包括:CYBB基因的c.76-77delTT、c.343-344delCA、c.481A ＞T、c.1152G＞C、c.1613G＞A,NCF2基因的c.137T＞G.CYBB突变CGD患儿中,gp91正常表达患儿SI高于gp91不表达者(14.6比2.5,t=44.21,P=0.004),NCF1基因突变者SI高于CYBB基因突变者(17.7比2.5,t=60.8,P=0.003).结论 流式细胞仪-DHR分析、gp91蛋白的流式检测方法为CGD的重要诊断方法,可指导进一步的基因检测.不同的基因突变及突变类型可影响呼吸爆发功能及gp91的蛋白水平.使用从功能、蛋白到基因水平的诊断技术可以精准有效诊断CGD.

辅助腹腔复苏对休克大鼠肠系膜淋巴活性的影响

目的 探讨辅助腹腔复苏(IR)对失血性休克(HS)大鼠肠系膜淋巴活性的影响.方法采用股动脉放血法制作Hs大鼠模型,在HS或假休克(SS)后60min行传统方法(CR)或CR联合辅助腹腔复苏(CR+IR).实验大鼠分为6组:①SS组(n=4),②SS+CR组(n=4),③SS+CR+IR组(n=4),④HS组(n=4),⑤HS+CR组(n=5),⑥HS+CR+IR组(n=5).所有HS大鼠的平均动脉压(MAP)控制在40mmHg,SS大鼠仅行动脉插管不放血,CR处理时静脉给予乳酸林格液(80ml/kg),IR处理时在CR的基础上同时腹腔注射腹膜透析液20ml/只.复苏后2h剖腹收集肠系膜淋巴液,测定与淋巴液共培养后的中性粒细胞呼吸爆发活性.实验结束时处死大鼠,取回肠组织,光镜下观察肠黏膜绒毛形态,评价肠黏膜损伤程度.结果 HS组肠系膜淋巴活性显著高于SS组.与CR处理比较,CR+IR能显著抑制休克肠系膜淋巴介导的中性粒细胞的呼吸爆发作用(P<0.05),降低休克淋巴的活性水平.HS组肠黏膜绒毛顶端损伤增多,与SS组比较差异显著(P<0.01);与CR处理相比,CR+IR能明显减轻肠黏膜绒毛的损伤(P<0.01).结论 在CR基础上进行IR能有效保护肠道屏障的完整性,降低休克后肠系膜淋巴活性.

缺血再灌注中中性粒细胞的呼吸爆发与组织氧化损伤关系研究现状

1955年Sewell发现,结扎狗冠状动脉一段时间后,恢复血流,实验动物因严重室颤而死;1967年,Bulkley与Hutchins发现冠状动脉搭桥后的病人常发生心肌细胞反常性坏死;1981年Greenberg证实,猫小肠缺血3小时后再恢复血流,粘膜损伤严重.

五味子酚对大鼠中性粒细胞呼吸爆发的影响

目的研究五味子酚对大鼠中性粒细胞呼吸爆发时自由基生成和溶酶体酶释放的影响.方法分别用紫外分光法、荧光分光法和同位素法测定该细胞自由基生成、溶酶体酶释放、胞浆钙离子和环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果五味子酚能抑制中性粒细胞超氧阴离子、过氧化氢、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)以及一氧化氮的生成,减少溶菌酶和β-葡糖醛酸苷酶的释放,而且,还能拮抗FMLP引起的细胞胞浆钙离子的增加,进一步增强FMLP引起的胞浆cAMP的增加.结论五味子酚可能通过降低细胞内钙离子浓度和/或升高胞浆cAMP的含量而抑制中性粒细胞呼吸爆发所导致的上述变化.

稀土离子(La3+,Ce3+,Y3+,Tb3+)对大鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发的影响

目的:研究稀土离子对巨噬细胞功能的影响.方法:采用亚硝酸盐分光光度法及电子自旋捕获法检测稀土离子存在下大鼠巨噬细胞呼吸爆发时产生的氧自由基.O2-及.OH的变化.结果:在实验浓度范围内(10-7～10-4 mol.L-1),La3+、Y3+、Tb3+均表现为抑制呼吸爆发的作用,La3+的作用尤为明显.Ce3+在浓度低于10-5 mol.L-1时也表现为抑制作用,但在浓度高于10-5 mol.L-1时作用相反.结论:稀土离子在较低浓度时都能抑制活性氧自由基的生成.较高浓度时,作用相反.

海藻多糖锌配合物的组成及其对THP-1细胞耗氧的影响

目的 通过海藻多糖(SP)与锌离子(Ⅱ)络合成一种新型的海藻多糖锌(SPZC),在比较SP和SPZC二者理化性质、结构组成基础上,对锌离子的多糖螯合物在单核细胞THP-1细胞耗氧的影响做了初步的研究.方法:用苯酚法法测定SP和SPZC的总多糖含量、Hodgson法测定二者的硫酸根含量和Folin酚试剂法等化学法测定二者主要作用成分,气相色谱(GC)分析了二者所含的主要单糖及摩尔比,红外光谱(IR)分析多糖二者的主要成分基团等.用ESR自旋捕捉法检测了二者对细胞的呼吸爆发作用(respiratory burst,RB)下耗氧量的影响,以及利用活性氧(reactiveoxygen species,ROS)的荧光探针(2,7-二氢二氯荧光素,DCFH-DA)分析了PMA激活THP-1细胞后ROS产生的变化.结果 SP络合上锌离子成为SPZC后也具有很好的稳定性,二者之间的主要成分含量变化明显,多糖含量、蛋白质含量、硫酸根离子下降明显;而SPZC中Zn(Ⅱ)的含量为15％.通过GC分析,表明锌离子的配位反应,使得SP的单糖组成也有改变;IR图谱可以发现SP结合上锌离子后,图谱上的特征性峰发生位移、钝化或消失,而代之有SPZC核的类型峰.RB结果,提示在细胞受到激发的短暂时间内,SPZC比SP更能维持细胞的RB在一个更高水平;而同样细胞激发后的较长时间内,ROS产生的荧光染色,相较SP对ROS产生有一定的淬灭作用,而SPZC则能触发ROS产生更多.结论 SP同锌离子(Ⅱ)络合产生的SPZC,增加了新的有机锌来源;同时,SPZC对比SP,其抗氧化性能有所减弱.

二联苯碘合并谷氨酰胺干预对过度训练引起的中性粒细胞功能的调控及机制研究

目的:利用二联苯碘(DPI)合并谷氨酰胺(Gln)补充的干预手段,对过度训练引起的运动性免疫抑制的防护方法进行探讨及机制分析.方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为安静组(C)、过度训练组(E)和DPI干预组(D)、Gln补充组(G)及DPI合并Gln补充组(DG),过度训练后进行血浆细胞因子、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的ELISA测定及NADPH氧化酶化学发光法测定；流式细胞技术进行中性粒细胞呼吸爆发和吞噬功能的测定；Western blot半定量测定gp91phox和p47phox的蛋白表达.结果:同对照组比较,过度训练后G组除NO显著上升外其余指标变化与E组同步,但与E组比较,DG组中的NO、CINC浓度则显著降低(P＜0.05)；D组、G组的呼吸爆发与吞噬功能有上调的趋势,DG组显著性上升(P＜0.01)；过度训练后E组gp91pox和p47phox的表达均显著上调(P＜0.01),除DG组的gp91phox的蛋白表达显著下调(P＜0.05)外,其余各组均无显著变化；同E组比较,D组、G组及DG组的gp91kphox、p47Phox蛋白表达均显著下调(P＜0.05).结论:过度训练时血浆炎性因子、趋化分子、黏附蛋白的表达上调是激活中性粒NADPH氧化酶介导产生ROS的过氧化损伤的潜在因素.DPI合并Gln补充可有效地逆转过度训练引起的中性粒细胞的功能水平.

胸部撞击伤时游离Ca2+浓度与中性粒细胞凋亡及肺损伤的关系

目的: 动态观察兔胸部撞击伤时中性粒细胞(PMN)凋亡的发生以及与肺损伤之间的关系. 方法:制备兔胸部撞击伤模型,分离纯化肺灌洗液中的PMN,应用流式细胞术测定PMN凋亡、坏死、存活细胞比例及呼吸爆发功能的变化,并且观察与乳酸脱氢酶(LDH) 和胞浆游离Ca2+变化之间的关系.结果:肺灌洗液中PMN的凋亡延迟持续至12小时,在伤后各时间点活细胞增多;而肺灌洗液PMN呼吸爆发从伤后2小时即显著增强,8小时达到峰值;同时肺灌洗液LDH的升高在伤后4～24小时显著高于正常对照组;伤后PMN胞浆游离Ca2+有短暂升高.结论:胸部撞击伤时,PMN在肺组织中大量扣押,且正常的凋亡途径发生障碍,造成PMN持续处于激活状态及毒性内容物的持续释放,与肺组织损伤有密切关系,并且P MN凋亡延迟可能与胞浆游离Ca2+的短暂升高有关.

078(+)-3-O-丙酰基和(-)-3-O-戊酰基取代可增强(+)-儿茶素对人多形核白细胞呼吸爆发的抑制作用