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游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1的表达和酪氨酸磷酸化的影响
目的:探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢.方法:分离培养Wistar大鼠骨骼肌细胞.软脂酸(0.25 mmol*L-1)或油酸(0.125 mmol*L-1)与骨骼肌细胞共同孵育6、12、24 h,提取蛋白后用Western杂交方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物1(IRS-1)的蛋白水平,同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和IRS-1的酪氨酸磷酸化程度.结果:(1)软脂酸或油酸作用后骨骼肌细胞的胰岛素受体蛋白质表达量无改变.(2)骨骼肌细胞与软脂酸或油酸共同孵育12和24 h后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低.(3)骨骼肌细胞在软脂酸或油酸作用后各个时间点的IRS-1蛋白质量均明显降低.(4)骨骼肌细胞经软脂酸或油酸作用后IRS-1的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低.结论:游离脂肪酸可能通过抑制骨骼肌细胞的IRS-1蛋白质表达和胰岛素受体的酪氨酸磷酸化以及IRS-1的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导,引起骨骼肌胰岛素抵抗.
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自由脂肪酸依赖CASPASE3诱导人肝肿瘤细胞株HepG2凋亡
目的 利用体外脂肪变性的模型,探讨不同自由脂肪酸(FFA)的细胞毒性和诱导细胞凋亡的机制.方法 分别采用DAPI核染剂和借助半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)荧光分析试剂盒检测人肝肿瘤细胞株HepG2在不同脂肪酸在不同时间后(12 h、24 h、48 h)TG和细胞凋亡率和Cagpage3活性的变化,以及Z-VAD-FMK在不同时间对棕榈酸(PA)诱导的细胞凋亡和Caspagc3的活性的抑制作用.结果 亚油酸(LA)组、油酸(OA)组在各时间段的TG的积累高于PA组,但凋亡率和Cagpage3活性均低于PA组,并呈时间依赖性.加入Z-VAD-FMK后PA导致的凋亡率和Cmpage3活性均显著性降低.结论 棕榈酸以Caspage3蛋白酶依赖的方式诱导脂凋亡.油酸和亚油酸通过形成甘油三酯,防止肝细胞脂凋亡.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶/代谢 脂肪酸类/药理学 肝肿瘤/代谢 细胞凋亡
