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愈障汤对慢性再生障碍性贫血患者骨髓CD34细胞体外增殖的影响
目的:观察愈障汤对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓CD34细胞体外增殖的影响,探讨其作用机制.方法:采用单克隆抗体-免疫磁株分离系统(MACS)分离纯化CAA患者骨髓CD34细胞,并进行细胞培养.采用氚标-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法和液体闪烁技术,检测愈障汤对骨髓CD34细胞的增殖作用.结果:愈障汤组骨髓CD34细胞呈浓度依赖性增殖.其放射活性(cpm)与其它各浓度组比较差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论:愈障汤在体外有促进CAA患者骨髓CD34细胞增殖的作用.其治疗CAA的机制可能是通过增殖与抑凋亡的双向调节作用来实现的.
关键词： 贫血 再生障碍性/中医药疗法 细胞分裂/药物作用 @ 愈障汤 -
巴戟天对人体及小鼠淋巴细胞增殖的影响
目的:探讨巴戟天体外免疫调节的作用机制.方法:用体外细胞培养法观察巴戟天对丝裂原诱导的健康老人的淋巴细胞增殖及对丝裂原诱导的小鼠淋巴细胞增殖的影响及小鼠巨噬细胞产生肿瘤坏死因子(TNF)的影响.结果:巴戟天可促进刀豆蛋白A(ConA)活化的人体淋巴细胞的增殖;可促进ConA和细菌多糖(LPS)活化的小鼠淋巴细胞的增殖;并提高小鼠巨噬细胞产生TNF的水平.结论:研究结果为巴戟天做为免疫调节剂提供了细胞水平的实验依据.
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中药复方博癌丸对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的诱导作用.方法:采用细胞药理学和血清药理学方法,对比观察(阴性无药血清对照、阳性药5-氟尿嘧啶血清对照)搏癌丸诱导HepG2细胞的增殖及凋亡.(1)MTT法观察4个搏癌丸药物血清浓度对HepG2细胞增殖的抑制作用,从中筛选出搏癌丸的有效药物浓度.(2)电镜及流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡.结果:(1)10%、5%、2.5%搏癌丸药物血清3个有效浓度均对HepG2细胞增殖有显著抑制作用(P＜0.01),增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性(P＜0.01).(2)10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,HepG2细胞核明显缩小,浆比减少,核仁减少、浓缩甚至消失,核内异染色质明显增多,核膜完整,可见早、中、晚期细胞凋亡,出现凋亡小体.(3)10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,流式细胞仪检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%(P<0.05).结论:搏癌丸能在一定程度上抑制HepG2细胞的增殖和诱导HepG2细胞凋亡.
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抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响
目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.
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参葵汤对卵巢癌患者新鲜实体瘤细胞及细胞株Tyk-nu细胞增殖的影响
目的:研究参葵汤对卵巢癌细胞增殖的影响.方法:应用中药血清药理学方法制备含参葵汤大鼠血清,应用氚(3H)掺入法观测含药血清对卵巢癌新鲜实体瘤细胞增殖的影响,应用流式细胞仪、细胞活力测定、细胞生长曲线测定、细胞集落形成率测定的方法检测了含药血清对卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞增殖的影响.结果:3H掺入法检测结果显示,含药血清可抑制卵巢癌新鲜实体瘤细胞的增殖,抑制率随含药血清浓度的增高而增高;流式细胞仪、细胞活力、细胞生长曲线、细胞集落形成率测定结果显示,含药血清可抑制卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞增殖,抑制率随含药血清浓度的增高而增高.结论:含参葵汤大鼠血清可抑制卵巢癌新鲜实体瘤细胞及卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞的增殖.
关键词： 卵巢肿瘤/中医药疗法 细胞分裂/药物作用 @ 参葵汤 -
苦参碱抑制HepG2增殖时Ca2+等生化指标的变化
目的:研究苦参碱抑制HepG2细胞增殖时相关生化指标的变化,有助于认识苦参碱抗肿瘤的机制.方法: 一定浓度苦参碱处理HepG2细胞,Fluo-3/AM荧光染色,荧光显微镜观察细胞内Ca2+浓度变化;免疫细胞化学和放免法检测AFP、PCNA、cAMP、cGMP的改变;亲和层析法分离肝癌GGT(HSGGT),酶动力法检测HSGGT和GGT酶活性.结果:苦参碱抑制HepG2细胞增殖时,胞内Ca2+浓度升高;反应细胞生长抑制的指标-cAMP升高,cAMP/cGMP比值升高.反应细胞增殖的生化指标-AFP、PCNA、cGMP、GGT、HSGGT量均降低.结论:苦参碱抑制HepG2细胞增殖时,相关生化指标均发生了改变,这可能与苦参碱抗肿瘤的机制有关.
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L-精氨酸在实验性大鼠结肠癌形成过程中的作用
二甲基联肼(DMH)可引起啮齿类动物的结肠粘膜隐窝细胞增殖和癌变.DMH引起的大鼠结肠癌分布特点与人相似,是研究人结肠癌的理想动物模型[1-4].L-精氨酸在一些致癌物引起肿瘤模型及移植肿瘤模型中可抑制肿瘤的发生[5].在实验性大鼠结肠癌模型中,已确定结肠癌的形成可分为始发阶段和促发阶段,L-精氨酸在始发和促发阶段可能起着不周的作用[6,7].我们采用溴脱氧脲嘧啶(Brdurd)免疫组化技术[8-10]测定DMH引起Wistar大鼠结肠隐窝细胞增殖程度,并观察结肠肿瘤形成情况,探讨L-精氨酸在大鼠结肠癌形成中的作用.
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肝症口服液含药血清对TGFα诱导SMMC-7721细胞增殖和ERK蛋白的影响
目的观察肝症口服液含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞增殖和信号传导因子ERK影响.方法采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,应用MTT比色法观察中药鼠血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.用免疫组化方法检测中药血清对信号传导因子ERK蛋白表达影响.结果中药血清作用24 h对SMMC-7721细胞抑制率达25%,P＜0.05;作用48 h抑制率达30%,P＜0.001;中药血清作用24 h对1μg·L-1 TGFα诱导的SMMC-7721细胞增殖抑制率为12.3%,P＞0.05;作用48 h抑制率为16%,P＜0.05;中药血清作用24 h对5μg·L-1TGFα诱导的SMMC-7721细胞增殖抑制率为8.9%,P＞0.05,作用48 h抑制率为17.2%,P＜0.001.中药血清对TGFα诱导的肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抑制效应呈时间依赖性.中药血清能抑制ERK蛋白在细胞核中的表达.结论肝症口服液含药血清能够抑制TGFα诱导的人肝癌细胞增殖,阻断TGFα在细胞内的信号传导.
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舒林酸抑制人胃腺癌细胞增殖及诱导凋亡
目的在体外对舒林酸抗人胃腺癌细胞增殖和凋亡诱导作用及其机制进行初步研究.方法采用人胃腺癌细胞株MKN45,MKN28作为研究对象.体外药物敏感试验(MTT)检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应;分别用Hoechst33258细胞核荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察舒林酸诱导的细胞凋亡改变;应用Western斑点免疫印迹法观察经舒林酸2mmol·L-1和4mmol·L-1作用24 h后细胞内环氧化酶-2(COX-2)和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化.结果舒林酸对人胃腺癌细胞MKN45,MKN28的杀伤率随着剂量的增大和作用时间的延长而增加,舒林酸对不同类型的细胞杀伤率不同.舒林酸能够诱导人胃腺癌细胞MKN45,MKN28产生凋亡,凋亡诱导作用的强弱同样具有时间和剂量依赖性,而且对不同类型胃癌细胞的凋亡诱导效应有显著差异.经舒林酸2 mmol·L-1和4 mmol·L-1作用24 h后,MKN45细胞内COX-2和Bcl-2蛋白比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少,而MKN28细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达未出现明显变化.结论舒林酸在体外对人胃腺癌细胞株MKN45和MKN28有良好的增殖抑制作用,诱导凋亡是其抑制胃癌细胞增殖的重要作用机制.舒林酸对人胃腺癌细胞的抑制和凋亡诱导作用与其抑制细胞内环氧化酶-2,并进而抑制Bcl-2的表达有关,并可能与胃癌细胞的分化状态有关.
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盐酸洛拉曲克在荷S180肉瘤小鼠组织中的分布及对体外培养肝癌细胞株的作用
目的:研究盐酸洛拉曲克(nolatrexed dihydrochloride,NLTX)在体外对正常人胚肝细胞Fb和人HepG2、QSG7703肝癌细胞株以及小鼠S180肉瘤细胞株的抗增殖作用;探讨其在荷S180肉瘤小鼠组织中的分布情况.方法:四氮唑盐(MTT)法测定NLTX在体外对细胞的抗增殖作用,高效液相色谱法测定在荷S180肉瘤小鼠血液、肝脏和肉瘤组织中NLTX的浓度.结果:NLTX在体外对HepG2、QSG7703以及S180肿瘤细胞株的半数抑制浓度分别为2.17、0.61及0.72 μg/mL,对正常人胚肝细胞Fb则为82.60 μg/mL;以100 mg/kg剂量单次灌胃给药后,NLTX在小鼠血、肝及肉瘤组织中可达到的高浓度分别为(18.24±5.68)、(40.12±16.81)和(16.08±7.64) μg/mL.结论:NLTX在体外有显著的抗细胞增殖作用,对肿瘤细胞的作用强度高于正常细胞,对肿瘤细胞的抑制作用有选择性;该化合物在小鼠组织中可以达到有效的治疗浓度.
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康莱特对大肠癌HT-29细胞株体外生长抑制作用的研究
目的 通过观察康莱特(Kanglaite,KLT)对大肠癌HT-29细胞株体外生长的抑制率、细胞周期及端粒酶活性影响,探讨其对大肠癌HT-29细胞株体外生长的抑制机制.方法 (1)用MTT法检测康莱特在不同浓度及不同作用时间对大肠癌HT-29细胞株体外生长的抑制率.(2)碘化丙啶(PI)染色后用流式细胞术检测康莱特作用前后HT-29细胞周期分布.(3)用TRAP-PCR-ELISA法检测康莱特作用前后HT-29细胞的端粒酶活性.结果 在40、80 μl/ml康莱特作用下HT-29细胞体外增殖及端粒酶活性明显受抑制,G2+M期百分比明显增高.细胞生长抑制率在72小时时分别为9.5%与37.1%,在120小时时分别为25.5%与48.0%.端粒酶活性在72小时时分别为1.127±0.043与1.046±0.035;120小时时分别为1.075±0.047与1.008±0.057,均低于空白对照组(P＜0.05).G2+M期百分比72小时时分别为23.9%与45.2%,空白对照组为7.2%(P＜0.05).结论 (1)康莱特使体外生长的大肠癌HT-29细胞株阻滞于细胞周期的G2+M时相.(2)康莱特抑制HT-29细胞株端粒酶活性.(3)抑制作用呈时间和剂量依赖性.
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吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响
目的观察吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡,及其对cyclin E蛋白的影响.方法采用MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌HepG2细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对HepG2细胞周期分布的影响,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对HepG2细胞周期调控蛋白cyclin E的影响.结果吲哚美辛可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡,改变细胞周期分布,使G0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,同时还可使cyclin E蛋白表达下降.上述作用具有剂量和时间依赖性(P<0.05).结论吲哚美辛可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,从而抑制细胞增殖.
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可溶性AZURIN分子重组子构建对人骨肉瘤U2OS细胞的杀伤和诱导凋亡
目的:研究可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用.方法:用PCR方法由假单胞菌染色体DNA扩增AZURIN基因片段,将其融合插入原核表达载体pQE30中,并在M15大肠杆菌表达可溶性的AZURIN蛋白.该蛋白经纯化和复性后,诱导人骨肉瘤U2OS细胞,通过MTT法、Hoechest 33258荧光染色法及倒置显微镜观察凋亡细胞;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位变化和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡.结果:AZURIN的蛋白纯度达99.1%以上.用50～200 mg/L的蛋白诱导人骨肉瘤U2OS细胞12 h以上细胞的生长和增殖被显著抑制,并且观察到典型的凋亡细胞、凋亡小体、凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化,线粒体跨膜电位随着AZURIN作用的时间和浓度的增加而逐渐降低,对照组和50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN组细胞线粒体跨膜电位分别降低(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).细胞的凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系,作用48 h时凋亡率达峰值(35.8±3.78)%.结论:利用大肠杆菌制备的小分子蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用,线粒体途径可能是AZURIN诱导细胞凋亡的机制之一.
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17β-雌二醇对神经干细胞分裂分化作用的观察
目的探讨雌激素对神经干细胞分裂分化的作用.方法大鼠神经干细胞培养模型加入剂量为10 mg/L 17β-雌二醇和10 mmol/L BrdU,分别在培养4、12 h取出细胞,进行免疫细胞化学标记.结果培养4 h,雌二醇组单位面积细胞总数和BrdU标记细胞与对照组比较差别无显著性(P=0.259, P=0.067),培养12 h,雌二醇组细胞BrdU胞核着色变浅,胞浆有着色,有40%的细胞可见明显突起,单位面积的细胞总数较对照组无显著性改变(P=0.06), BrdU标记细胞数目减少(P=0.003), 提示分裂细胞减少.另一方面,培养12 h时的雌二醇处理组BrdU免疫荧光阳性细胞的光密度(OD)显著高于对照组(P<0.01).结论 17β-雌二醇可以抑制大鼠神经干细胞分裂,促进神经干细胞分化.
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非诺贝特对内皮细胞增殖及单核细胞受体α分泌的影响
[目的]观察非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞增殖(HU-VECs)及单核细胞过氧化物酶增殖体激活型受体α(PPARa)分泌的影响.[方法]体外培样HUVECs株,第4～9代用于实验.实验分3组:①空白对照组;②ox-LDL组(100 mg/L);③非诺贝特组:先将非诺贝特10、50、100 μmol/L分别作用于内皮细胞6h,然后加OX-LDL(100 mg/L)作用于细胞24 h.采用细胞酶联免疫吸附法分析检测细胞培养上清液PPARa含量;采用四唑盐比色法检测各孔的吸收度(OD),以评价增殖效果.[结果]与空白对照组比较,100 mg/L ox-LDL抑制内皮细胞增殖(P＜0.01),非诺贝特呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的内皮细胞增殖(P＜0.01).100 mg/L ox-LDL促进PPARQ分泌.10、50、100 ttmol/L非诺贝特能明显抑制ox-LDL诱导的HUVECs分泌PPARa(P＜0.01),押制效应呈浓度依赖性.[结论]非诺贝特呈剂量依籁性押制ox-LDL诱导的人HUVECs分泌PPARc,,促进内皮细胞增殖,保护内皮功能,从而发挥贝特类调脂外抗动脉粥样硬化作用.
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卡维地洛抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的实验研究
[目的]探讨卡维地洛对的实验性大鼠(Wistar)心脏成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响.[方法]以12周龄Wistar健康大鼠为研究对象.采用胰酶消化法培养CFs,采用改良的MTT比色法观察CFs的增殖状况,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定CFs的DNA合成功能,3H-脯氨酸(3H-Proline)掺入法测定胶原合成.[结果]CFs MTT吸光值随卡维地洛浓度增加和作用时间?长而减N,并呈S度和时?依赖性0.01~10.00 ?mol/L卡维0洛分别r预72 h时, Wistar大 CFs 3H-TdR及3H-Proline掺入率均较空白对照组明显减低(分别P<0.05,P<0.01).随着卡维地洛干预浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,呈浓度依赖性.[结论]卡维地洛可显著抑制CFs的DNA合成及细胞增殖,并进一步抑制胶原沉积及逆转左室肥厚.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 细胞分裂/药物作用 胶原/生物合成 卡唑类/药理学 大鼠 -
消旋羟蛋氨酸钙对人肾系膜细胞增殖影响及其机制研究
[目的]体外观察消旋羟蛋氨酸钙对人肾系膜细胞(HMC)的影响.[方法]10 mM消旋羟蛋氨酸钙对HMC体外干预,检测干预后转化生长因子-β1(TGF-β1) 和乳酸脱氢酶(LDH)的变化,并采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期.[结果]10 mM消旋羟蛋氨酸钙干预HMC,实验组与对照组相比,TGF-β1含量增加;细胞LDH表达水平没有改变;同时细胞出现增殖抑制.细胞流式分析发现,实验组干预后出现了细胞周期G1期阻滞并观测到了细胞凋亡.[结论]10 mM的消旋羟蛋氨酸钙可以诱导TGF-β1的表达增加;同时诱导细胞周期G1阻滞并伴随细胞凋亡.
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β-榄香烯术前区域动脉灌注对乳腺癌组织的抑制作用及其对细胞凋亡和增殖的影响
目的:观察中药莪术有效提取物β-榄香烯术前区域动脉灌注对乳腺癌组织的抑制作用及其对细胞凋亡和增殖的影响.方法:临床观察给药后肿块的改变并应用末端转移酶介导的脱氧核苷酸末端标记法(TUNEL 法)和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化检测方法,观察术前β-榄香烯治疗组 14 例和一期手术组 17 例乳腺癌标本的凋亡指数、增殖指数和分裂指数的差异.结果:β-榄香烯治疗组凋亡指数(7.97±1.50)明显高于一期手术对照组(2.26±0.49),两组比较差异有显著性 (P＜0.01);β -榄香烯治疗组增殖细胞核抗原指数(44.54±9.99)与对照组(42.80±6.78)比差异无显著性(P＞0.05);治疗组的分裂指数(3.92±1.44)与对照组(3.88±1.08)比,差异无显著性(P＞0.05).14 例术前β-榄香烯治疗组等级相关分析凋亡指数与肿块缩小程度呈正相关(r=-0.729).结论:给乳腺癌患者术前区域动脉灌注β-榄香烯可缩小乳腺癌局部肿块其机理可能与诱导乳腺癌细胞凋亡有关.
