首页 > 文献资料
-
重组肝细胞再生增强因子丹参及若参对大鼠纤维细胞的作用
目的 观察重组肝再生增强因子(rALR)、丹参及苦参对大鼠纤维细胞增殖及细胞外基质(ECM)合成的影响.方法利用DNA重组技术构建大鼠肝再生增强因子原核表达质粒PGEX2T-alr,转导XL-1,IPTG诱导肝再生增强因子蛋白表达,用SDS/PAGE纯化获得rALR.利用胶原酶灌注梯密度离心分离肝星状细胞,用有限稀释法建立大鼠肝星状细胞株IG12.于体外观察了rALR、丹参及苦参对IG12及大鼠成纤维细胞株WFB增殖及ECM合成的影响.结果用酸性磷酸酶法测定细胞增殖表明rALR、丹参及苦参均可显著抑制IG12的增殖(培养48h,GST组A:2.207±0.234,苦参组A:1.797±0.158,丹参组A:1.808±0.176,rALR组A:1.779±0.294),丹参及苦参可显著抑制WFB的增殖而rALR对WFB的增殖无明显影响(培养72h,GST组A:0.940±0.030,苦参组A:0.797±0.036,丹参组A:0.821±0.052,rALR组A:0.897±0.050).rALR、丹参及苦参可不同程度地抑制IG12、WFB合成细胞外基质,但以rALR的抑制作用较好.结论原核细胞产生的rALR具有生物学活性,rALR、丹参及苦参对IG12及WFB的增殖及ECM合成具有不同程度的抑制作用,佳的联合用药方式有待进一步研究.
-
DNA去甲基化引起人二倍体成纤维细胞端区缩短并加速衰老进程
目的:研究DNA甲基化水平变化对细胞衰老进程和端区长度的影响.方法:从细胞形态和Southern印迹杂交测定端区长度两方面观察5-氮胞苷处理对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老进程的影响.结果:5-氮胞苷处理使老年细胞衰老表型更为突出,其端区长度缩短较年轻细胞亦为显著(约为对照细胞的96%).结论:甲基化水平降低及其导致的端区缩短的共同作用可能在细胞衰老过程中发挥着重要的作用.
关键词： DNA 甲基化 端粒/药物作用 细胞衰老/药物作用 成纤维细胞/药物作用 -
丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1抑制血管紧张素Ⅱ刺激的血管成纤维细胞活化
目的:观察丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的血管成纤维细胞增殖及胶原合成和分泌的影响.方法:用磷酸钙共沉淀的方法向血管成纤维细胞转染MKP-1的基因;测定培养的血管成纤维细胞内丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性、3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)及3H-脯氨酸参入.结果:10-7mol*L-1 AngⅡ刺激培养的血管成纤维细胞后其MAPK活性及3H-TdR参入较对照组增加293%(P<0.01)及190%(P<0.01);胶原的合成和分泌较对照组分别增加146%(P<0.01)和502%(P<0.01).而转染了MKP-1野生型基因的细胞与未转染时相比,AngⅡ诱导的MAPK活性和3H-TdR参入分别低65%(P<0.01)和67%(P<0.01);参入细胞内及介质中的3 H-脯氨酸分别低65%(P<0.05)和80%(P<0.01).转染MKP-1突变型及MKP-1空载体基因的细胞对于AngⅡ的上述各种刺激作用均无明显抑制.结论:MKP-1具有抑制AngⅡ刺激的血管成纤维细胞MAPK激活、成纤维细胞增殖及胶原合成和分泌的作用,提示MKP-1可能参与了AngⅡ刺激的血管重塑的调节.
关键词： 丝裂素活化蛋白磷酸酶 成纤维细胞/药物作用 胶原/代谢 血管紧张素Ⅱ -
辛伐他汀对大鼠肺成纤维细胞功能及其抑制通路的影响
背景:他汀类药物可以通过阻断甲羟戊酸的合成,抑制某些膜联结蛋白的翻译后修饰,从而阻断某些细胞内信号传导通路,抑制多种细胞的增殖.目的:探讨辛伐他汀对肺成纤维细胞的增殖、胶原合成及基质金属蛋白酶2分泌的影响.设计:完全随机设计,对照实验.单位:中国协和医科大学阜外心血管病医院器官移植研究室.材料:实验于2004-06/2004-10在中国协和医科大学北京协和医院心内科实验室完成.培养的新生SD大鼠的肺盛纤维细胞,根据培养液中加入的干预药物浓度不同而分为辛伐他汀0,1,5,10,50μmol/L及辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组.方法:用消化法培养新生SD大鼠的肺成纤维细胞,给予不同浓度的辛伐他汀干预.四氮唑蓝比色法检测细胞增殖,细胞免疫组化法测定细胞胶原的合成,酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液基质金属蛋白酶2的含量.主要观察指标:不同浓度辛伐他汀及辛伐他汀加甲羟戊酸干预后肺成纤维细胞增殖和胶原合成能力,以及基质金属蛋白酶2分泌量.结果:①辛伐他汀5,10,50 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显低于辛伐他汀0 μmol/L组(0.520±0.010,0.334±0.011,0.260±0.012,0.111±0.011;0.508±0.011,0.324±0.014,0.232±0.015,0.083±0.015;0.445±0.017,0.305±0.015,0.216±0.015,0.068±0.012;0.561±0.013,0.361±0.012,0.289±0.012,0.140±0.013,t=3.359～8.111,P＜0.05～0.01).②辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显高于辛伐他汀50 μmol/L组(0.567±0.015,0.354±0.014,0.283±0.012,0.138±0.011,t=4.715～10.950,P＜0.01).结论:辛伐他汀能抑制肺成纤维细胞增殖和胶原合成,并可减少基质金属蛋白酶2的分泌,抑制肺成纤维细胞黏附迁移功能,并可通过影响甲羟戊酸通路而具有抗细胞增殖作用.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 肺/细胞学 斯伐他汀/药理学 -
蝮蛇抗栓酶对人翼状胬肉成纤维细胞增殖效果的影响
目的:研究国产蝮蛇抗栓酶(ahylysantinfarctase,AF)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPF)增殖效果的影响.方法:采用切除的翼状胬肉组织进行体外成纤维细胞培养,将传代的第4～第6代人翼状胬肉成纤维细胞与不同浓度的蝮蛇抗栓酶(0.1 U/ml～0.00256 U/ml)分别处理48 h,并设对照组,通过噻唑兰比色法(MTT法),在酶联免疫测定仪上测570 nm处吸光值,计算出在不同浓度AF条件下的净增抑制率.结果:AF在0.04 U/ml以上使细胞增殖率显著下降;当AF浓度为0.1 U/ml时,其细胞增殖抑制率达91.74%左右,镜下很少见到正常活性细胞.AF在0.00256 U/ml以上使部分细胞生长受影响.其50%抑制率浓度(ID50)为0.016 U/ml.结论:AF对HPF增生有抑制作用,并且其抑制作用呈剂量依赖型,但在高浓度(≥0.1 U/ml)时可能存在细胞毒性作用.
关键词： 蝮蛇抗栓酶/药效学 翼状胬肉 成纤维细胞/药物作用 培养 -
重组人干扰素α-2b对腭裂术后瘢痕成纤维细胞影响的实验研究
目的 探讨重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)对体外培养的腭裂术后裸露骨面瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响.方法 制作兔腭裂术后裸露骨面瘢痕动物模型,利用体外细胞培养技术,通过MTT法、3H-TDR渗入法、流式细胞术等方法观察、分析rhIFNα-2b对腭裂术后瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,数据采用方差分析及q检验处理.结果 与对照组比较,实验组加入rhIFNα-2b后,腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性及被明显抑制,G1期细胞百分数明显增高.结论 rhIFNα-2b对腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性具有明显抑制作用,说明在防治腭裂术后裸露骨面瘢痕的形成中有一定的应用价值.
关键词： 腭裂 瘢痕 成纤维细胞/药物作用 干扰素α-2b/药理学 -
地塞米松对特发性眼眶炎性假瘤体外培养成纤维细胞增生的抑制及其机制
背景 特发性眼眶炎性假瘤(IOIP)是一种常见的眼眶疾病,病因和发病机制尚未完全阐明,以糖皮质激素为主的治疗效果欠佳. 目的 观察地塞米松对IOIP组织体外培养成纤维细胞的作用,探讨糖皮质激素在IOIP治疗中可能的作用机制.方法 收集2011年11月至2012年1月在北京同仁医院眼科中心切取的6例6眼IOIP组织(IOIP组)和3例因泪腺脱垂行泪腺复位术患者的眶部结缔组织(对照组),采用组织块培养法对2种组织进行体外培养以获取眼眶成纤维细胞,对培养的细胞进行组织形态学观察,采用免疫组织化学法检测培养细胞表面生物标志物的表达;采用WST-8法观察2个组培养的成纤维细胞的增生情况,并绘制生长曲线.将培养的细胞接种至96孔板,将不同浓度地塞米松(0、1×10-3、1×10-4、1×10-5和1×10-6mol/L)加入培养板分别作用24、48和72 h,采用WST-8法观察地塞米松对细胞增生的影响;采用ELISA法检测各组成纤维细胞中ICAM-1的相对表达量.结果 IOIP组织和正常眼眶体外培养的成纤维细胞均呈长梭形,两端有较长突起;免疫细胞化学染色可见2种组织中培养的细胞中vimentin呈阳性表达,而desmin、S-100、细胞角蛋白(CK)均呈阴性表达.与正常眼眶组织培养的成纤维细胞相比,IOIP组织培养的细胞生长速度较快.随着地塞米松浓度的增加,成纤维细胞的增生值(A值)逐渐下降,0、1 × 10-3、1 ×10-4、1×10-5和1×10-6mol/L地塞米松组成纤维细胞增生值的总体比较差异有统计学意义(F浓度=36.27,P=0.00),随着地塞米松作用时间的延长,成纤维细胞增生值逐渐下降,总体比较差异有统计学意义(F时间=3.69,P=0.00).无地塞米松培养组培养24、48和72 h,成纤维细胞中比较ICAM-1表达量分别为0.298±0.008、0.312±0.003和0.319±0.011,表现为逐渐升高的趋势,而不同浓度地塞米松作用后随着时间延长ICAM-1表达量均逐渐降低,总体比较差异有统计学意义(F时同=3.11,P=0.00),随着地塞米松浓度的增加,ICAM-1表达量均逐渐下降,总体比较差异有统计学意义(F浓度=75.17,P=0.00). 结论 IOIP的发生和发展可能与眼眶成纤维细胞中ICAM-1表达增强有关,地塞米松可能通过下调细胞中ICAM-1的表达而抑制眼眶成纤维细胞的增生,从而发挥抗炎和治疗作用.
-
纤维连接蛋白诱导人胚肺成纤维细胞增殖信号转导机制探讨
[目的]探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚肺成纤维细胞(HFL1)增殖的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路.[方法]用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.采用不同浓度FN刺激HFL1并观察不同浓度下细胞 ERK信号转导通路阻断剂PD98059对FN诱导HFL1增殖作用的影响;并用蛋白免疫印记法(Western Blot)观察FN浓度为50 ng/mL时,PD98059对HFL1中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响.[结果]FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50 ng/mL时作用显著;ERK抑制剂 PD98059可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖.[结论]FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过ERK信号转导途径实现.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 肺/细胞学 连接蛋白类 信号传递 -
卡维地洛抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的实验研究
[目的]探讨卡维地洛对的实验性大鼠(Wistar)心脏成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响.[方法]以12周龄Wistar健康大鼠为研究对象.采用胰酶消化法培养CFs,采用改良的MTT比色法观察CFs的增殖状况,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定CFs的DNA合成功能,3H-脯氨酸(3H-Proline)掺入法测定胶原合成.[结果]CFs MTT吸光值随卡维地洛浓度增加和作用时间?长而减N,并呈S度和时?依赖性0.01~10.00 ?mol/L卡维0洛分别r预72 h时, Wistar大 CFs 3H-TdR及3H-Proline掺入率均较空白对照组明显减低(分别P<0.05,P<0.01).随着卡维地洛干预浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,呈浓度依赖性.[结论]卡维地洛可显著抑制CFs的DNA合成及细胞增殖,并进一步抑制胶原沉积及逆转左室肥厚.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 细胞分裂/药物作用 胶原/生物合成 卡唑类/药理学 大鼠 -
卡维地洛对自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响
目的 研究卡维地洛对自发性高血压大鼠(SHR)和实验性大鼠(Wistar)心脏成纤维细胞(CFs)一氧化氮(NO)含量目的影响,探讨卡维地洛抑制CFs增殖目的作用机制.方法 以12周龄SHR10只为对象,培养CFs,分为空白对照组和卡维地洛干预组;另以Wistar健康大鼠10只目的CFs为正常对照组.采用消化法培养CFs,用硝酸还原酶法检测不同浓度卡维地洛干预下CFs培养液中目的NO含量,用改良目的MTT比色法观察CFs目的增殖状况.结果 ①在基础状态下培养72 h,SHR空白对照组目的NO含量明显低于正常大鼠空白对照组(P<0.01);SHR空白对照组目的OD值明显高于正常大鼠空白对照组(P<0.05).②卡维地洛以浓度依赖目的方式促进CFs目的NO含量增加.③卡维地洛以浓度依赖目的方式抑制CFs目的OD值.④在不同浓度卡维地洛干预下,SHR CFs目的OD值随NO含量目的增高而减低,二者呈显著负相关( r=-0.949,P<0.01).结论 卡维地洛能促进CFs目的NO合成,直接影响了CFs目的增殖,进一步抑制高血压目的左室重构.
关键词： 丙醇胺类/药理学 成纤维细胞/药物作用 卡唑类/药理学 -
芦荟大黄素诱导硬皮病成纤维细胞凋亡的研究
目的 探讨芦荟大黄素对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞凋亡的影响.方法 以不同浓度的芦荟大黄素处理体外培养的成纤维细胞,用TUNEL法和荧光显微镜观察法测定芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的诱导.结果 芦荟大黄素对患者皮肤成纤维细胞的凋亡具有显著的诱导作用,该作用在一定范围内随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强.结论 芦荟大黄素可诱导硬皮病患者皮肤成纤维细胞的凋亡,从而抑制其增殖,减少其胶原蛋白的合成.
关键词： 芦荟大黄素/药理学 硬皮病 系统性/中药疗法 成纤维细胞/药物作用 细胞凋亡 -
柿叶黄酮对晚期氧化蛋白产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响
目的:观察柿叶黄酮对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养NIH-3T3细胞,应用柿叶黄酮与晚期氧化蛋白产物共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态.结果:各组的细胞增殖率分别为对照组(1.789±0.299);AOPP 100 μg/ml组(2.064±0.141);AOPP 50 μg/ml组(2.149±0.218);AOPP 10 μg/ml组(2.108±0.165),AOPP 1 μg/ml组(2.124±0.131);AOPP 100 ng/ml组(2.087±0.125);柿叶黄酮50 μg/ml组(1.714±0.179);AOPP 50 μg/ml联用柿叶黄酮50 μg/ml组(1.807±0.105).统计分析显示低至100 ng/ml的AOPP仍能明显刺激成纤维细胞的增殖(P＜0.05).柿叶黄酮单独作用对成纤维细胞增殖率无影响(P＞0.05);柿叶黄酮对AOPP诱导的成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).结论:柿叶黄酮能明显抑制由晚期氧化蛋白产物刺激的血管外膜成纤维细胞增殖.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 柿 黄酮 晚期氧化蛋白产物 细胞增殖 -
rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响
目的观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响.方法体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态.应用流式细胞仪测定细胞周期.结果 TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用.rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响.在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖.rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于Go/G1期.结论rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 白细胞介素-10 肿瘤坏死因子 细胞增殖 -
柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响
目的观察柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响.方法体外培养成纤维细胞,应用柿叶黄酮与晚期糖基化终产物共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态.结果各组的细胞增殖率分别为对照组(0.840±0.061);细胞增殖率分别为(1.330±0.055)、(1.210±0.119)和(0.792±0.060)、柿叶黄酮50μg/ml组(0.829±0.056);AGEs 50μg/ml联用柿叶黄酮50μg/ml组(0.947±0.072).统计分析显示低至10μg/ml的AGEs仍能明显刺激成纤维细胞的增殖(P＜0.05),并呈现剂量依赖性(P＜0.05).柿叶黄酮单独作用对成纤维细胞细胞增殖率无影响(P＞0.05);柿叶黄酮对AGEs诱导的成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).结论柿叶黄酮能明显抑制由晚期糖基化终产物刺激的血管外膜成纤维细胞增殖,
关键词： 成纤维细胞/药物作用 柿 黄酮 晚期糖基化终产物 细胞增殖 -
积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用
【目的】 探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。【方法 】 采用光镜、电镜、3H-TdR、3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合 成和胶原蛋白的合成。【结果】 积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构, 而且能抑制 成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。【结论】 积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作 用，其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。
-
尿激酶对大鼠肺成纤维细胞凋亡的影响
目的：探讨尿激酶（Urokinase ，UK）对大鼠肺成纤维细胞凋亡的影响。方法：5只SD雄性大鼠气管内灌注博莱霉素造肺纤维化模型，将模型组肺成纤维细胞与不同浓度的尿激酶培养24～96h ，流式细胞术测定细胞凋亡。结果：尿激酶以时间和浓度依赖的方式抑制肺成纤维细胞生长，流式细胞术检测到凋亡小体。结论：尿激酶能抑制肺成纤维细胞增殖，与凋亡有关。
关键词： 成纤维细胞/药物作用 肺 细胞凋亡 博莱霉素/化学诱导 尿激酶/治疗应用模型 动物 大鼠
