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丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1抑制血管紧张素Ⅱ刺激的血管成纤维细胞活化
目的:观察丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的血管成纤维细胞增殖及胶原合成和分泌的影响.方法:用磷酸钙共沉淀的方法向血管成纤维细胞转染MKP-1的基因;测定培养的血管成纤维细胞内丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性、3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)及3H-脯氨酸参入.结果:10-7mol*L-1 AngⅡ刺激培养的血管成纤维细胞后其MAPK活性及3H-TdR参入较对照组增加293%(P<0.01)及190%(P<0.01);胶原的合成和分泌较对照组分别增加146%(P<0.01)和502%(P<0.01).而转染了MKP-1野生型基因的细胞与未转染时相比,AngⅡ诱导的MAPK活性和3H-TdR参入分别低65%(P<0.01)和67%(P<0.01);参入细胞内及介质中的3 H-脯氨酸分别低65%(P<0.05)和80%(P<0.01).转染MKP-1突变型及MKP-1空载体基因的细胞对于AngⅡ的上述各种刺激作用均无明显抑制.结论:MKP-1具有抑制AngⅡ刺激的血管成纤维细胞MAPK激活、成纤维细胞增殖及胶原合成和分泌的作用,提示MKP-1可能参与了AngⅡ刺激的血管重塑的调节.
关键词： 丝裂素活化蛋白磷酸酶 成纤维细胞/药物作用 胶原/代谢 血管紧张素Ⅱ -
牛磺酸对实验性大鼠肝纤维化的预防作用
目的:研究牛磺酸对大鼠实验性肝纤维化的影响.方法:连续静脉注射牛血清白蛋白以制备大鼠肝纤维化模型,用比色法测定羟脯氨酸的含量,用直接红对石蜡切片中的胶原进行特异染色.结果:肝纤维化模型组中,肝的羟脯氨酸含量及肌成纤维细胞数量明显高于空白对照组,肝切片中胶原的沉积亦明显多于空白对照组.给予25 mg/kg的牛磺酸可明显降低肝的羟脯氨酸含量及肌成纤维细胞数量,肝切片中胶原的沉积亦明显减轻.结论:牛磺酸对大鼠实验性肝纤维化具有保护作用.
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依那普利对大鼠激光心肌血管重建术孔道转归的影响
目的:通过对激光心肌血管重建术(transmyocardial laser revascularization, TMR)后孔道修复中胶原变化的研究,明确依那普利对孔道转归的影响.方法:大鼠经TMR手术后给予依那普利(15 mg*kg-1*d-1)治疗8周后处死,观察胶原纤维病理形态学的变化及测定左室心肌羟脯氨酸(hydroxyproline, HYP)的含量.结果:动物经依那普利治疗,孔道残腔明显增大,孔道区胶原纤维厚度减少43.7%(P＜0.05),左室心肌间质胶原的面积较对照组减少32.7%(P＜0.05),左室HYP含量较对照组减少16.4%(P＜0.05).结论:依那普利能够减少TMR后胶原的沉积,促进孔道开放.
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低血清培养对瘢痕成纤维细胞PCNA、p16、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的影响
近年报道瘢痕皮下组织氧分压只是正常组织的27%,低氧分压是由于缺氧造成胶原蛋白沉积导致的血管阻塞而加重缺氧和缺血现象使瘢痕疙瘩局部处于低氧、低血供、低营养状态[1,2]. 本实验旨在研究低营养状态下瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的增殖及生物合成功能.1 材料与方法低血清成纤维细胞培养方法:将体外培养5代以内的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞(fibroblast,FB)各6例分别置于含0.5%(体积分数)胎牛血清的DMEM培养液(低血清培养)中培养7 d,取材.以含10% (体积分数)胎牛血清的DMEM培养液为对照组.增殖细胞核内抗原(proliferating cell nuclear antigen, PC NA) 、p16、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的检测方法:以上各组标本经100 g*L-1多聚甲醛(pH 7.2～ 7.5)固定10 min后,利用免疫组织化学方法(SP法,试剂盒由北京中山生物技术有限公司购置)检测增殖细胞核内抗原PCNA、p16、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的含量.
关键词： 瘢痕疙瘩/病理生理学 成纤维细胞/代谢 胶原/代谢 -
加减益气聪明汤及单味黄芪药物血清对成纤维细胞胶原合成速率的影响
本实验观察了加减益气聪明汤和单味黄芪鼠血清对体外培养成纤维细胞胶原合成速率的影响.结果表明与青年鼠血清比较,老年鼠血清可明显增高成纤维细胞胶原合成速率;而加减益气聪明汤鼠血清和单味黄芪鼠血清均可显著降低成纤维细胞胶原合成速率.提示补气方药可以通过抑制胶原蛋白的合成,改善结缔组织增生和血管硬化,增加血管弹性,提高供血量,从而使衰老机体的动脉硬化症状得到改善.
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准分子激光原位角膜磨镶术联合快速角膜交联术矫正薄角膜近视合并散光的早期疗效
背景 准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)术后发生的医源性角膜扩张严重威胁患者的术后视力和角膜生物力学强度,LASIK联合角膜交联术(LASIK-CXL)有望提高手术的安全性,降低术后角膜扩张的风险,但其手术效果及安全性有待验证. 目的 探讨LASIK-CXL矫正薄角膜近视合并散光眼的临床应用价值及其安全性.方法 采用前瞻性队列研究设计,纳入2014年1月至2015年1月在北京同仁医院眼科拟接受LASIK的薄角膜近视合并散光患者64例128眼,患者分为LASIK组(37例74眼)和LASIK-CXL组(27例54眼),2个组基线特征匹配.所有术眼均采用飞秒激光制瓣,并用准分子激光进行角膜消融,LASIK-CXL组患者在LASIK术后立即用质量分数0.1％核黄素滴至角膜基质床持续90 s,平衡盐溶液(BSS)行瓣下冲洗后用紫外线交联加固仪照射进行角膜交联.2个组患者分别于术后1周及1、3、6个月进行随访,对2个组术眼视力、屈光度、角膜地形图参数、眼前节OCT(AS-OCT)检查结果及角膜生物力学参数进行比较.结果 LASIK组和LASIK-CXL组术前等效球镜度(SE)分别为(-6.49±2.41)D和(-6.97±2.41)D,术后6个月时分别降低至(-0.68 ±0.88)D和(-0.75±0.94)D;2个组术前裸眼视力(UDVA)(LogMAR)分别为1.18±0.28和1.05±0.38,术后6个月时分别提高至-0.06±0.09和-0.03±0.18;术前AveK值分别为(44.37±1.46)D和(44.47±1.50)D,术后6个月时分别减少至(39.30±2.06)D和(38.66±1.80)D;术前表面规则指数(SRI)分别为0.25±0.21和0.24±0.22,术后6个月时分别增加为0.29±0.24和0.28±0.24,术前表面不对称指数(SAI)分别为0.36±0.16和0.39±0.15,术后6个月时分别增至0.57±0.31和0.75±0.37,且LASIK-CXL组术后SAI值明显大于LASIK组,差异有统计学意义(F=10.22,P=0.002).LASIK组和LASIK-CXL组术前角膜阻力因子(CRF)值分别为(8.44±1.44)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和(8.63±1.35) mmHg,术后6个月分别下降至(5.74±1.31) mmHg和(6.25±1.24) mmHg,且LASIK-CXL组CRF值明显高于LASIK组,差异有统计学意义(F=8.650,P=0.004);LASIK组和LASIK-CXL组术前角膜滞后量(CH)分别为(8.78±1.51) mmHg和(8.69±1.62) mmHg,术后6个月分别降至(7.23±1.08) mmHg和(6.50±1.32) mmHg,LASIK-CXL组术后CH值明显低于LASIK组,差异有统计学意义(F=5.860,P=0.017).AS-OCT检查显示术后1个月LASIK-CXL组角膜基质出现高密度反光带者45眼,占81.82％,而LASIK组术眼未出现角膜基质高密度反光带. 结论 LASIK-CXL矫正薄角膜近视合并散光眼是有效的和安全的,其改善术眼术后视力的效果与LASIK接近,但在增加角膜硬度方面明显优于LASIK手术.
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MicroRNA-9通过下调TGFBR2表达抑制肝星状细胞增殖和胶原合成
目的 探讨MicroRNA-9 (miR-9)对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响并研究其相关机制.方法 设计合成miR-9特异性模拟物(miR-9 mimics),将其转入肝星状细胞中,培养48 h后收集细胞,采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)验证miR-9 mimics转染细胞中miR-9的变化水平、Western blot检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况;通过qRT-PCR和Western blot检测转染miR-9 mimics后其潜在靶点转化生长因子-β1受体2(TGFBR2)的表达水平.结果 与对照组相比,转染miR-9 mimics后,检测肝星状细胞中miR-9表达量明显升高(P＜0.05).过表达miR-9后Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白分别降低约(44±2)％和(50±3)％(P＜0.05),细胞增殖活性降低约(48±4)％(P＜0.01),TGFBR2的表达水平降低(P＜0.05).结论 过表达miR-9可抑制肝星状细胞胶原合成和细胞增殖,此机制可能是通过下调TGFBR2的表达来实现.
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特异性miRNA-200b抑制剂对肝星状细胞生物学特性的影响
目的 观察特异性miRNA-200b抑制剂对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 设计并合成miR-200b抑制剂,利用脂质体将miRNA-200b抑制剂转入肝星状细胞中,培养48 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用qRT-PCR探针的方法检测miR-200b的表达水平、Westernblotting检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中Ⅲ型前胶原和透明质酸含量.结果 与阴性对照组相比,miRNA-200b抑制剂转染48 h后HSC-T6细胞miR-200b组表达下调82％;α-SMA蛋白表达降低(19±3)％(P＜0.05);细胞增殖活性降低(33±5)％(P＜0.01);培养上清中Ⅲ型前胶原和透明质酸含量分别降低(35±4)％和(31±2)％(均P ＜0.01).结论 miRNA-200b抑制剂下调HSC-T6细胞中miR-200b表达,抑制肝星状细胞增殖与活化,减少细胞外基质的合成和分泌.
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脂多糖对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响
目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响,以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用.方法 取正常皮肤行成纤维细胞培养后,分为1个对照组及6个实验组.实验组分别与终浓度为0.005、0.010、0.050、0.100、0.500和1.000 μg/ml大肠杆菌LPS(E.coli 055∶B5)培养,对照组DMEM培养.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达,并以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞做对照.结果 与对照组比较,LPS刺激浓度在0.005～0.1μg/ml时,促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达(0.323±0.041,0.303±0.063,0.391 ±0.071,0.344±0.086,0.488±0.059,0.401 ±0.087,0.616±0.107,0.434±0.084,0.823±0.092,0.542±0.082),抑制胶原酶mRNA表达(0.598 ±0.068,0.556 ±0.049,0.441 ±0.043,0.372±0.083,0.260±0.027),且呈一定的剂量依赖性；当LPS刺激浓度为0.5μg/ml,上述作用下降(0.451±0.063,0.374±0.072,0.360±0.062)；而当LPS刺激浓度到达1.0 μg/ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达(0.162 ±0.025,0.171 ±0.061),促进胶原酶mRNA表达(0.444±0.114).LPS刺激浓度在0.1 μg/ml时,成纤维细胞(0.823±0.092,0.542±0.082,0.260±0.027)Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达与同一个体增生性瘢痕组织成纤维细胞(0.829±0.049,0.569±0.038,0.277 ±0.059)近似.结论 LPS对人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA的表达,其直接调节可能是参与增生性瘢痕形成的重要机制.
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丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道壁胶原沉积及MMP-9表达的影响
目的:观察丙酸氟替卡松对哮喘小鼠模型气道壁胶原、基质金属蛋白-9(MMP-9)含量的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为哮喘组(A组)、正常对照组(B组)、丙酸氟替卡松治疗组(C 组)3组,每组动物10只.制备小鼠肺组织病理切片,HE染色观察各组气道结构改变情况,天狼猩红染色,采用医学图像分析软件测定气道Ⅰ、Ⅲ型胶原的面积,肺组织石蜡切片行MMP-9免疫组化染色后计算机图像分析测定其灰度值.结果:光镜下可见A组小支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、基底膜增厚、平滑肌增厚,而C组上述改变较A组明显减轻.A组支气管壁Ⅰ型、Ⅲ型胶原较B组增多(P<0.05),而丙酸氟替卡松干预后C组较A组显著降低(P<0.05);A组MMP-9灰度值较B组明显降低(P<0.05),丙酸氟替卡松干预后的C组MMP-9灰度值较A组显著增高(P<0.05).结论:吸入丙酸氟替卡松可以减少气道壁Ⅰ型、Ⅲ型胶原的沉积和MMP-9的表达,对胶原沉积的抑制可能是通过抑制MMP-9表达而实现.
