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中药血清药理学方法初探
目的:本文就中药血清药理学方法中血清供体动物的选择、给药方案及采血时间、含药血清的灭活与保存、血清的添加量和对照组的设立等几个常见问题加以讨论,为中药血清药理学方法提供理论依据.方法:综述相关文献,对中药血清药理学的实验条件进行理论研究.结果与讨论:中药血清药理学应与现代医药理论相结合,才能推动中药药理学的规范化.
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药食植物提取物影响肺癌细胞YTMLC-90生长的血清药理学研究
目的在营养领域内建立血清药理学方法,为评价药食植物的防癌效果提供一种新技术;同时观察药食植物提取物(HFE)对肺癌细胞生长和增殖的作用,为预防癌症提供有效可行的营养措施.方法用正交设计探讨建立血清药理学方法的适宜条件;用MTT、群体倍增时间和集落形成实验研究含HFE动物血清对肺癌细胞生长和增殖的作用.结果针对HFE,在对小鼠每天灌胃2次、共连续灌胃3天、体外实验含药血清浓度10%的实验条件下,为建立血清药理学方法的较好条件.各浓度(0.5、1.0和2.0 g/ml)的HFE对肺癌细胞的生长和增殖均有一定的抑制作用;高浓度组(HFE 2.0g/ml)灌胃3日和低浓度组(HFE0.5g/ml)灌胃10目的抑制作用尤为明显,且二者作用无显著差异.结论用血清药理学方法能更直接深入地观察受试物的抑癌作用.药食植物对防癌抗癌有较好的效果,在长期防癌过程中有较好的实用价值.
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珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化的研究
目的:观察珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化作用.方法:采用HL-60细胞株体外培养,MTT法观察不同作用时间的直接细胞毒作用;细胞涂片观察细胞形态学改变;试剂盒检测酸性磷酸酶(ACP)含量.结果:珠子参血清和珠子参煎液均有明显的细胞毒作用,72 h时抑制率分别为31.27%、34.23%,与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用后,达72.9%、75.22%.作用72 h后ACP活性高于对照组,分别为13.6107、16.0122(U/gprot.min)(P＜0.01),细胞形态学观察以中幼粒及晚幼粒为主,分别占36.8%、75.8%,向成熟细胞方向分化.结论:珠子参在体外对HL-60细胞株有细胞毒作用,且能提高5-FU的敏感性而与化疗药物起协同作用;珠子参有诱导HL-60细胞分化的功能.
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化痰散结方对人肺癌细胞Fas和FasL表达的影响
目的观察化痰散结方含药血清,对人肺癌SPC-A1细胞Fas和FasL的表达的影响.方法通过血清药理学方法,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清,与人肺癌细胞SPC-A1共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜和荧光显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察,应用SABC法检测SPC-A1细胞Fas和FasL的表达.结果人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增加;荧光镜下可见细胞核破碎、裂解为大小不等的凋亡小体;SABC法显示,化痰散结方含药血清可上调SPC-A1细胞Fas(P＜0.01),而且可下调SPC-A1细胞FasL的表达(P＜0.05).结论化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡,其机制可能与上调SPC-A1细胞Fas和下调其FasL有关.
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中药及其复方血清药理学研究的方法学分析与评价
中药及其复方药理学研究逐渐采用了血清药理学的方法,这成为一种新思路越来越被重视.本文就血清药理学在相关研究中的背景、方法学探讨、优势与问题等情况进行了综述,并对其独特的价值及其在中药和复方药理研究当中的应用前景做了展望.
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补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响
目的 研究体外添加补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响.方法 将弱精子症患者精子与补肾活血方含药血清共培养,应用精子运动CASA分析观察补肾活血方对精子运动能力的影响.结果 与含药血清共培养后,运动精子率,前向性运动精子率、平均路径运动速度、曲线运动速度、精子头部侧摆幅度和鞭毛摆动频率均显著提高.结论 体外添加补肾活血方含药血清能提高精子运动能力.
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大黄用于抗氧化的日服用次数研究
目的 采用大黄含药血清体外抗氧化效应动力学结合大黄蒽醌类成分的整合药代动力学的方法研究大黄的日服用次数.方法 将24只大鼠随机分为3组,每组8只,每天分别灌服大黄提取物3.6 g/kg,1次/天、1.8 g/kg,2次/天和1.2 g/kg,3次/天,分别于第一次给药前(0小时)及给药后5、10、15、30分钟,1、2、4、6、8、10、12、24小时眼眶后静脉取血,用于测定大鼠血中大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚五种蒽醌类成分的含量和对超氧阴离子的抑制率.计算上述成分在大鼠体内的药动学参数,利用各成分曲线下面积(AUC0-∞)百分率作为自定义权重系数,得到其整合药代动力学曲线,再与抗氧化效应动力学进行相关性分析,以此来制定大黄用于抗氧化时合理的日服用次数.结果 大黄蒽醌类成分整合药代动力学与含药血清体外抗氧化效应动力学具有良好的相关性.每日给药2次组整合药代动力学AUC及抗氧化效应动力学AUC均明显高于每日给药1次和3次组.结论 大黄用于抗氧化时以每日服用两次为宜.
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关于中药血清药理学方法的再思考
血清的形成与凝血及其相关过程(纤溶与补体系统活化)的蛋白酶级联反应以及血小板和白细胞活化有关,这些过程直接影响血标本的组成,并可能也影响中药成分;但这些过程可用抗凝剂而加以避免.因此,血浆的组成较血清能更好地反映生理、病理状况和吸收进入循环血中药物变化.根据已有报道,药物浓度与反应物质在血浆与血清中可能存在差异,故倡导在中药半体内实验中采用血浆药理学方法.由于不同抗凝剂的作用机制各异,究竟哪一抗凝剂适用于哪类半体内实验,需要进一步开展研究.我们建议在大多数中药半体内实验中,可以采取含药血浆与含药血清平行观察,除非事先对该试验的干扰已有充分了解.
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血清药理学研究概要
中药复方复杂多样,在研究其药理机制过程中暴露出许多问题,在此基础上产生了中药血清药理学.血清药理学是指用含有药物成分的血清施加于体外实验反应体系的一种半体内实验方法,目前正趋于成熟,并广泛应用于对中药复方药理作用和作用机理的研究.中国血清药理学起步晚,缺乏经验,中药血清药理学作为一种新的药理实验方法,在药理机制研究中的应用有待规范化.本文就中药血清药理学的一般方法、研究应用现状、优势和不足,结合笔者在实验中的经验做一概述.
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血清药理学、血清化学和中药药代动力学
目的:通过对血清药理学、血清化学和中药药代动力学的讨论,探讨三者之间的关系,为现代中药研究提供思路.方法:综述分析相关文献,并结合我们的研究心得,对上述三者的关系进行理论研究.结果与结论:血清药理学与血清药物化学的紧密结合,将有助于中药药代动力学的研究和中药药效物质基础的阐明.
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扶正消瘤颗粒抗卵巢癌作用的体外实验研究
目的:阐述扶正消瘤颗粒(CM)在体外的抗肿瘤作用.方法:制备含药血清,作用于体外培养的肿瘤细胞系SKOV-3,分为空白组(control)、CM组、顺铂组(DDP)和CM+DDP组,采用MTT法检测其量效关系和时效关系,用TUNEL、透射电镜和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡的发生,用Westerblot检测PCNA、bcl-2和bax的表达.结果:MMT显示本方有一定量效关系和时效关系,浓度愈大,作用时间愈长,效果愈明显;TUNEL和透射电镜及FCM均提示了细胞凋亡的发生,而Westernblot的结果则显示了细胞凋亡的发生与bcl-2/bax比率的下调有关,使细胞增殖受到抑制.结论:扶正消瘤颗粒在体外有一定的抗肿瘤作用,并有增效之功.
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补阳还五汤含药血浆和含药血清对氧剥夺大鼠脑微血管内皮细胞分泌NO、vWF、6-keto-PGF1α的影响及与体内实验的比较研究
目的:比较补阳还五汤含药血清和含药血浆对缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)分泌NO、vWF、6-keto-PGF1α的水平与体内实验真实值的接近程度,为半体内实验选择含药血浆还是含药血清提供参考依据.方法:以氧剥夺BMECs模型为研究对象,观察补阳还五汤含药血浆和含药血清对BMECs条件培养液中一氧化氮(NO)、血管性假血友病因子(vWF)、6-酮-前列腺素1 α (6-keto-PGF1 α)含量的影响,并与补阳还五汤干预的中动脉阻塞模型大鼠血浆上述指标水平进行比较.结果:结果发现:与空白血浆组合空白血清组比较,补阳还五汤含药血浆和含药血清均能明显降低氧剥夺BMECs条件培养液中vWF的含量,升高NO、6-keto-PGF1 α水平,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);含药血浆组vWF、6-keto-PGF1α水平与体内实验的相关系数r分别为0.928和0.933,明显高于含药血清组(r=0.715、0.770,P＜0.05),而含药血浆组和含药血清组NO含量与体内实验相关系数分别为0.702、0.759,两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论:运用半体内实验研究补阳还五汤对脑血管内皮细胞的作用,血浆药理学方法比血清药理学方法可靠.
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疾病模型血清药理学及其在骨代谢研究中的若干问题
中药单体及复方研究一直是国内外关注的焦点,Amaga等自1984年建立血清药理方法以来,这种方法被不断地用于体外药理实验中,为中药复方药理研究提供了一条新的途径[1].载药血清方法有着中药体外药理学实验普遍采用的中药提取物直接添加法显著的方法学上的优势,特别是疾病模型血清药理学的提出和建立,已经成为研究中药单体及复方的常用方法.本文就疾病模型血清药理学的若干问题以及血清药理学在骨代谢中研究现状作一综述.
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黄连解毒汤抗氧化作用的血清药理学研究
目的:研究黄连解毒汤及其单味药对细胞氧化损伤保护作用的药效动力学,并对其血清药理学方法进行探讨.方法:采用血清药理学方法,研究黄连、黄芩、黄连解毒汤含药血清对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤保护作用的时间-效应关系;并研究黄连、黄芩、黄连解毒汤提取物和小檗碱、黄芩苷纯品对氧化损伤保护作用的剂量-效应关系.结果:各药的含药血清对细胞氧化损伤都有明显的保护作用,其中以黄连解毒汤作用强,黄芩和黄芩苷次之,黄连弱;在试验浓度范围内,黄连解毒汤和黄芩提取物对模型细胞有剂量依赖性保护作用,而黄连没有保护作用;在0.15～10 μg·mL-1浓度范围内,黄芩苷对细胞模型有保护作用,且呈剂量依赖性.0.15～10 ng·mL-1浓度范围内,小檗碱没有明显的保护作用.结论:黄连解毒汤体内抗氧化作用强于各单味药;黄芩苷可能是黄芩及其含药血清中的抗氧化成份之一,而小檗碱与含药血清的抗氧化作用无关;黄连解毒汤及其单味药含药血清对细胞氧化应激模型的保护作用呈时间和剂量依赖性.
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射干提取物含药血清对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响
目的:研究射干提取物含药血清对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响.方法:取豚鼠气管,在Kreb's液中制备气管平滑肌螺旋条,于恒温浴槽装置中,加入组胺(His)使其收缩,观察加入射干提取物含药血清后3,5,10 min的解痉率.结果:射干提取物含药血清对组胺引起的气管平滑肌收缩反应有一定拈抗作用,其中剂量(0.46 g?kg-1)3,5,10 min解痉率分别为44.29％,45.27％和48.30％；高剂量(0.92 g?kg-1)3,5 min解痉率分别为31.17％和31.83％,与空白对照组比较有显著性差异(P ＜0.05或P＜0.01),药物与标本接触5 min效果好.结论:射干提取物含药血清对His引起的气管平滑肌收缩反应具有一定的拮抗作用.
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补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1/Jagged1信号通路的影响
目的:通过体外细胞实验研究补肾抑瘤汤对前列腺癌细胞增殖的干预作用及其机制.方法:首先按照血清药理学方法, 给予SD大鼠连续灌胃用药7 d, 取血制备空白血清和补肾抑瘤汤含药血清;然后以人前列腺癌细胞PC-3为模型研究补肾抑瘤汤含药血清对前列腺癌细胞增殖及Notch1/Jagged1信号通路的影响, 噻唑蓝 (MTT) 比色法检测补肾抑瘤汤含药血清 (2.5％, 5％, 10％, 15％) 处理PC-3细胞后不同时间点 (12, 24, 36 h) 的细胞增殖情况, 分别应用逆转录-聚合酶链式反应 (RTPCR) 及蛋白免疫印迹法 (Western blot) 分析补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1, Jagged1 mRNA和蛋白表达的影响.结果:与空白组比较, 经补肾抑瘤汤含药血清处理12, 24, 36 h后, PC-3细胞增殖受到了不同程度的抑制, 其中以36 h的抑制作用为显著 (P＜0.01);补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1, Jagged1 mRNA和蛋白表达均有抑制作用, 尤其是补肾抑瘤汤10％, 15％含药血清组抑制效果明显 (P＜0.05, P＜0.01) .结论:补肾抑瘤汤含药血清能明显抑制PC-3细胞增殖, 作用可能与调控Notch1/Jagged1表达有一定相关性.
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降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响
目的:探讨降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响.方法:以浓度分别为5×10-5,5×10-6,5×10-7,5×10-8,5×10-9mol·L-1的胰岛素孵育HepG2细胞24 h,建立并筛选佳HepG2胰岛素抵抗模型,分别以20％大鼠空白血清及5 μmol· L-罗格列酮为对照,采用细胞培养、糖原染色、葡萄糖摄取分析等方法检测20％降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗相应指标的变化.结果:以5×10-7 mol· L-1的胰岛素成功建立HepG2胰岛素抵抗模型.与胰岛素抵抗模型组相比,降脂平肝汤含药血清组及罗格列酮组在基础状态下和胰岛素刺激状态下细胞的葡萄糖摄取以及糖原含量均明显增加,细胞糖原颗粒显著增多,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:降脂平肝汤含药血清能减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗.
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蜂胶左金丸含药血清抗幽门螺杆菌的实验研究
目的:应用中药血清药理学研究方法研究蜂胶左金丸含药血清抗Hp的作用.方法:经灌胃给药后,采集分离大鼠血清,采用打孔琼脂扩散法,对3种不同处理(新鲜未灭活、新鲜灭活、冰冻后血清)后含药大鼠血清进行体外抑菌试验.结果:用不同剂量3种不同处理的含蜂胶左金丸血清对幽门螺旋菌(HP)有明显抑制作用,且呈一定的量效关系;新鲜未灭活含药血清抑制Hp作用较新鲜灭活血清强;冰冻后血清抗菌作用降低.结论:在含药血清体外抑菌实验中,抗菌效果以使用新鲜未灭活血清为好,灭活及冰冻3周的血清的抗菌效果会降低.
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补中益气丸对IEC-6细胞损伤模型NLRP3炎性体及相关细胞因子的影响
目的:探讨补中益气丸含药血清对炎症刺激引起的大鼠小肠隐窝上皮细胞(ICE-6)损伤模型中NOD样受体-3(NLRP3)炎性体复合物及相关细胞因子的影响.方法:根据中药复方血清药理学实验方法,以IEC-6细胞为研究对象,设立胎牛血清组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、空白组、模型组,补中益气丸组、柳氮磺吡啶组.先用10％2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)大鼠模型血清或者TNF-α(质量浓度100 μg· L-1)刺激IEC-6细胞24 h,然后加入10％药物血清继续培养24 h后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)方法检测IEC-6细胞活率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定NLRP3炎性体的相关蛋白表达量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的含量.结果:与空白组比较,TNF-α组及模型组均可引起IEC-6细胞增殖率显著下降(P＜0.01),细胞内NLRP3炎性体的相关蛋白表达显著增高(P＜0.01),细胞因子IL-1β,IL-18含量显著增高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组细胞增殖率显著增加(P＜0.01),NLRP3炎性体复合物蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),IL-1β,IL-18分泌显著降低(P＜0.01).结论:补中益气丸含药血清可通过调节肠上皮细胞NLRP3炎性体复合物蛋白及细胞因子分泌,减轻炎症刺激引起的肠上皮细胞损伤.
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芎姜复方不同部位宫缩效应的时-效研究
目的:分析芎姜复方不同提取部位缩宫效应的时-效关系.方法:运用血清药理学方法,按照离体子宫实验法测定正常小鼠离体子宫肌活动力.结果:该方的水提部位、水提醇沉部位及醇提部位的灌胃给药血清有促进宫缩的作用,而挥发油部位则有抑制宫缩的趋势,且各部位的药峰时间均不同.结论:同一处方的不同提取部位具有不同的药效和时效性,其产生的效应是成分多样化、作用多重性的综合体现.
