首页 > 文献资料
-
豨桐丸对大鼠痛风性关节炎的影响及机制
目的:观察豨桐丸对尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎的影响及其药理机制.方法:分别给予大鼠豨桐丸(200,400,800 mg· kg-)及秋水仙碱(4 mg·kg-1)灌胃用药7d.第5天大鼠踝关节腔注射尿酸钠晶体诱导痛风性关节炎模型.检测大鼠足肿胀和步态评分,苏木素-伊红(HE)染色法检测关节组织学评分,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞形成,免疫组化法分析关节组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析NLRP3炎性体表达.结果:注射尿酸钠晶体导致了大鼠明显的足肿胀,并使步态评分和组织学评分均明显增高,关节组织中的破骨细胞数量及TNF-α,IL-1β,IL-6和NLRP3炎性体表达也都明显增加((P＜0.05,P＜0.01).给予400,800 mg·kg-1豨桐丸治疗后,大鼠足肿胀显著减轻,步态评分和组织学评分均显著减少,同时关节组织中的破骨细胞数量及TNF-α,IL-1β,IL-6和NLRP3炎性体表达也都显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:豨桐丸可抑制尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎的发展,其机制与抑制炎性介质的表达密切相关.
-
补中益气丸对IEC-6细胞损伤模型NLRP3炎性体及相关细胞因子的影响
目的:探讨补中益气丸含药血清对炎症刺激引起的大鼠小肠隐窝上皮细胞(ICE-6)损伤模型中NOD样受体-3(NLRP3)炎性体复合物及相关细胞因子的影响.方法:根据中药复方血清药理学实验方法,以IEC-6细胞为研究对象,设立胎牛血清组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、空白组、模型组,补中益气丸组、柳氮磺吡啶组.先用10％2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)大鼠模型血清或者TNF-α(质量浓度100 μg· L-1)刺激IEC-6细胞24 h,然后加入10％药物血清继续培养24 h后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)方法检测IEC-6细胞活率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定NLRP3炎性体的相关蛋白表达量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的含量.结果:与空白组比较,TNF-α组及模型组均可引起IEC-6细胞增殖率显著下降(P＜0.01),细胞内NLRP3炎性体的相关蛋白表达显著增高(P＜0.01),细胞因子IL-1β,IL-18含量显著增高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组细胞增殖率显著增加(P＜0.01),NLRP3炎性体复合物蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),IL-1β,IL-18分泌显著降低(P＜0.01).结论:补中益气丸含药血清可通过调节肠上皮细胞NLRP3炎性体复合物蛋白及细胞因子分泌,减轻炎症刺激引起的肠上皮细胞损伤.
-
基于NLRP3炎性体探究黄芪桂枝五物汤对IgA肾病小鼠肾脏保护机制
目的:基于NL RP3炎性体探究黄芪桂枝五物汤对IgA肾病小鼠肾脏保护机制.方法:雄性BA L B/c小鼠80只根据体质量大小随机分为:正常对照组、模型组、黄芪桂枝五物汤组(8g/k g)、缬沙坦组(12mg/ kg),采用BSA+葡萄球菌肠毒素B(SEB)法构建IgA肾病小鼠模型,4周治疗后处死.检测小鼠24h尿蛋白定量(24hUTP)、血生化,观察肾脏组织病理改变和IgA的沉积情况,免疫组化法观察NLRP3在肾脏的表达,Western blot法检测NLRP3、白细胞介素(IL)-1β、IL-18在肾脏的表达.结果:第15周模型组体质量、血清ALB下降(P＜0.05),24hUTP、血清Scr、UA升高(P＜0.05),肾脏NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达增加(P＜0.05),肾小球系膜区IgA呈颗粒状或团块状沉积.第15周黄芪桂枝五物汤组体质量上升(P＜0.05)、血清A LB升高,24hUTP下降(P＜0.05),肾脏组织NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达减少(P＜0.05).结论:黄芪桂枝五物汤对IgA肾病小鼠肾脏具有保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎性体激活,减少IL-1β、IL-18炎性因子释放,抑制炎性反应有关.
-
基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响
目的:基于NLRP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins 3 inflammasome)信号通路观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期探明其抗炎作用机制.方法:大鼠30只按体质量随机分为5组各6只,GD高、中、低剂量组(4、8、16 g·kg-1)、秋水仙碱阳性对照组(3×10-4g·kg-1)均灌胃给药,正常组给予等容积蒸馏水,每天1次,连续给药7d,后1次灌胃1h后所有大鼠乙醚麻醉取血清备用.SD雄性大鼠20只,参照文献方法提取分离大鼠巨噬细胞接种培养12h.细胞试验分为2个实验组(不加受体抑制剂,加NALP3受体抑制剂),每个实验组均含6个组,正常对照组加入正常大鼠血清,模型对照组、高、中、低剂量组、秋水仙碱组全部滴加200μg·L-的尿酸钠混悬液造模,同时滴加含药血清置于CO2细胞培养箱中孵育2h取出.酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定炎性因子白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-a,TNF-α)的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-KB(nuclear factor-kappa B,NF-KB)活性;Western免疫印迹(WesternBlot)检测凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、半胱天冬酶-12(Csapase-12)信号衔接蛋白表达水平;逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RTPCR)观测NLRP3炎性体mRNA的表达.结果:细胞造模12h后与正常组比较,实验模型组大鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-KB、ASC、NALP3 mRNA表达水平明显升高,Csapase-12表达水平明显降低;与模型组比较,给药各组IL-1β、IL-6、TNF-α、NALP3 mRNA及GD中、高剂量组NF-KB、ASC表达均明显降低,GD高剂量组Csapase-12表达明显升高,而秋水仙碱组Csapase-12表达无明显增加.结论:GD抗炎作用机制可能与降低巨噬细胞NLRP3、ASC表达、抑制IL-1β分化成熟及NF-KB活化、降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关.与秋水仙碱不同的是,GD能够增加Capase-12表达,负反馈抑制NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达,提示GD治疗GA新的抗炎机制.在加入NALP3受体抑制剂下,GD仍能降低模型大鼠巨噬细胞中TNF-α、NF-KB表达,提示GD可以通过另外信号通路发挥抗炎作用.
-
芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体的影响
目的 探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体蛋白表达及IL-1β分泌的影响.方法 实验分为健康对照组、MP模型组、罗红霉素治疗组(50 mg/kg体重)及芩百清肺浓缩丸治疗组(3.3 g/kg体重),每组32只.滴鼻法建立MP感染模型,连续给予相应的药物14 d,健康对照组及模型组给予等容量蒸馏水.分别于给药后7、14、28 d,抽取肺泡灌洗液,ELISA检测IL-1β含量;留取肺组织,Western blot检测NLRP3炎性体相关蛋白表达.结果 MP模型组小鼠造模后7、14 d肺组织NLRP3、ASC、Caspase1蛋白相对表达量分别为0.93±0.07、0.72±0.02、0.65±0.03;0.41±0.04、0.47±0.02、0.43±0.02,与健康对照组0.30±0.02、0.29±0.02、0.31±0.03;0.27±0.03、0.23±0.02、0.34±0.02比较差异有统计学意义(P＜0.01);芩百清肺浓缩丸治疗组给药后7d、14 d NL-RP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量分别为0.56土0.07、0.52±0.04、0.44±0.02;0.32±0.02、0.33±0.02、0.35±0.02,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).MP模型组小鼠给药后7、14 d肺泡灌洗液IL-1β分别为(69.98±8.97)pg/ml、(49.55土7.60)pg/ml,与健康对照组(37.39±4.28) pg/ml和(36.61±4.31)pg/ml比较,差异有统计学意义(P＜0.01);芩百清肺浓缩丸治疗组给药后7、14 d IL-1p分别为(59.70±8.16)pg/ml和(41.39±3.67)pg/ml与模型组比较差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 芩百清肺浓缩丸治疗可下调MP感染小鼠肺组织NLRP3炎性体蛋白的表达及IL-1β分泌.
-
肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及下游分子的表达
目的 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)感染RAW264.7细胞早期NLRP3炎性体及前炎性细胞因子的表达. 方法 将RAW264.7细胞随机分为5组,正常组用常规方法培养,不感染Mp;4个实验组RAW264.7细胞均用Mp感染4h,感染复数(细胞∶Mp)分别为1∶20、1∶40、1∶80、1∶100,采用FQ-PCR法检测细胞NL-RP3、ASC、caspase-1 mRNA表达和IL-1β、IL-18水平. 结果 Mp感染复数1∶20、1∶40、1∶80、1∶100组NL-RP3、ASC、caspase-1 mRNA表达量分别为2.i0±0.62、2.14±0.66、2.66±0.69、3.29±0.64和3.91±0.83、4.21±0.95、4.25±0.86、4.30±0.99和1.65±0.48、1.65±0.36、1.94±0.51、2.00±0.57,与正常对照组0.98±0.08、1.00±0.08、0.99±0.09比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);感染复数1∶100组IL-1β为200.00士9.25 pg/ml,与对照组159.92±5.89 pg/ml比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 Mp感染可诱导RAW264.7细胞NLRP3炎性体活化.NLRP3炎性体可能参与了Mp的早期感染.
-
白藜芦醇对HSC-T6细胞NLRP3炎性体活化的影响
目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6细胞内Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体活化的影响,探讨Res抗肝纤维化的作用机制,为Res的临床应用提供理论依据,方法 体外培养大鼠HSC系HSC-T6,细胞用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入Res(4、8、16μmol/L)或乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)孵育24 h.随后加入过氧化氢(0.2 mmol/L)孵育4h制作氧化应激模型.采用MTT法检测细胞增殖水平.ELISA法检测细胞培养上清液中的I型胶原(collagentype 1,COL-1)、转化生长因子(transforming growth factor p1,TGF-β1)、白介素-13(interleukin-1β ,IL-1β)、IL-18、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的含量.荧光酶标仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species ,ROS)含量.Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin, α-SMA). NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein, ASC)、 caspasel的表达,结果 与对照组比较,Res在浓度范围4-64 μmol／L对HSC-T6细胞均有显著的抑制效应(P＜0.01).与对照组比较,氧化应激模型组细胞增殖率,细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、IL-18含量,细胞内ROS产量及a-SMA、NLRP3、caspasel-p10蛋白表达均呈显著增高趋势(P＜0.01);细胞上清液中SOD含量呈明显下降趋势(P＜0.01).与模型组比较,Res低、中、高剂量及阳性对照药NAC均可显著抑制HSC-T6细胞增殖率,减少细胞上清液COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、IL-18含量,细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、ASC、caspasel-pl0蛋白表达(P＜0.01);显著提高细胞上清液中SOD的含量(P＜0.01).结论 Res能够通过调节ROS-NLRP3炎性体通路抑制HSC-T6细胞的增殖与活化.
-
NLRP3炎性体与心血管疾病关系的研究进展
炎性体是细胞内在凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱天冬氨酸酶(caspase-1)等蛋白质参与下形成的,能够识别病原相关分子模式(PAMPs)及缺血缺氧等危险相关分子模式(DAMPs)的一种蛋白质复合体.研究发现,其在慢性炎症的发生发展过程中可能发挥着核心的作用.在心血管系统中,其活化后促进细胞裂解及IL-1β、IL-18等分泌,进而发挥促心力衰竭、促动脉粥样硬化(As)及促心肌缺血再灌注损伤(MI/R)等作用.其中,NLRP3炎性体是目前结构和功能为明确的炎性体,是炎性体相关研究的热点,在心血管疾病中的作用越来越受到关注.
-
线粒体相关的NLRP3炎性体激活
炎性体自发现以来,其在炎症反应中的作用就备受关注.NRLP3炎性体是目前研究多的炎性体,其激活不仅启动免疫反应防御微生物感染,而且还参与包括急性肺损伤在内多种疾病的发生和发展.大量研究表明,线粒体代谢、线粒体自噬和凋亡、线粒体DNA释放等都与NRLP3炎性体的调节相关,可见线粒体在NLRP3炎性体的激活中发挥着重要作用.现就线粒体相关的NLRP3炎性体激活进行综述.
-
NOD样受体蛋白3炎性体在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在大鼠正常脑组织中的表达及在脑缺血-再灌注损伤中的作用.方法 先取健康成年雄性SD大鼠40只,按随机数字表法随机分为假手术组,再灌注12、24、48 h组,每组10只.采用大脑中动脉栓塞法构建脑缺血(2 h)模型.免疫荧光双染色法检测正常脑组织NLRP3炎性体的表达分布,Western blot法、实时定量PCR法检测NLRP3炎性体mRNA、蛋白质的表达.再选取40只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术对照组、再灌注对照组、假手术加药组、再灌注加药组,每组10只.两加药组于术前30 min经腹腔注射500 mg/kg格列苯脲,两对照组给予等量生理盐水,建模成功后24h,对各组行颅脑MRI检查和伊文思蓝染色,观察脑组织的损伤及血-脑屏障通透性的改变.结果 健康大鼠脑组织中,NLRP3炎性体仅表达于小胶质细胞和血管内皮细胞,神经元和星形胶质细胞中未见表达.再灌注后12、24、48 h,NLRP3的mRNA和蛋白表达均明显高于假手术组(P＜0.01),且在24h达高峰.颅脑MRI显示,再灌注加药组损伤面积明显小于再灌注对照组[(21.7±4.2)％对比(36.0±4.7)％,P＜0.01].伊文思蓝染色显示,再灌注加药组伊文思蓝含量低于再灌注对照组[(18.7±3.8)μg/g对比(32.1±5.1)μg/g,P＜0.05].结论 NLRP3炎性体仅表达于大鼠脑组织的小胶质细胞及微血管内皮细胞中,其可能通过损伤血-脑屏障参与脑缺血-再灌注损伤.
-
NLRP3炎性体在2型糖尿病合并糖尿病足患者中的作用
目的 探讨NLRP3炎性体在2型糖尿病合并糖尿病足患者中的作用.方法 自2016年6月-2017年6月,前瞻性收集丽水市第二人民医院收治的2型糖尿病合并糖尿病足患者100例作为观察组,同期收集2型糖尿病患者50例(无糖尿病足)作为对照组.观察2组患者NLRP3炎性体表达情况.另外收集观察组患者主要临床特征,分析NLRP3炎性体与2型糖尿病足患者临床特征的相关性.结果 与对照组比较,观察组患者NLRP3炎性小体mRNA相对表达量显著增高(4.12±0.88 vs.2.73 ±0.92,P＜0.001);NLRP3炎性小体蛋白质相对表达量显著增高(12.48±2.81 vs.9.89±2.65,P＜0.001).糖尿病严重程度分级为0～1、2～3和4～5级的患者NL-RP3炎性小体mRNA相对表达量分别为3.27 ±0.78、3.87±0.83、4.83±0.92,差异有统计意义(P =0.002);NL-RP3炎性小体蛋白质相对表达量分别为9.65±2.12、11.32±2.54、15.49±2.98,差异有统计学意义(P＜0.001).Pearson线性相关性分析显示NLRP3炎性小体mRNA相对表达量、NLRP3炎性小体蛋白质相对表达量均与糖尿病足严重程度评分、糖化血红蛋白浓度成正相关(P＜0.05).结论 2型糖尿病合并糖尿病足患者NLRP3炎性体激活,与糖尿病足的发生发展过程有关.
-
NLRP3炎性体在糖尿病肾病肾间质炎症反应中的作用
目的 探讨NLRP3炎性体在糖尿病肾病肾间质炎症反应中的作用.方法 选择2014年6月-2015年5月浙江省人民医院2型糖尿病肾病患者50例作为糖尿病肾病组,同期肾脏错构瘤手术切除患者50例作为对照组.比较2组患者的临床资料、尿IL-18和尿IL-1β水平、肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β的表达,分析糖尿病肾病肾间质炎症和肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β表达的相关性,糖尿病肾病肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4免疫组化表达评分和尿IL-18、IL-1β水平的相关性.结果 糖尿病肾病组的尿蛋白定量、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白均高于对照组(P＜0.05).糖尿病肾病组尿IL-18和尿IL-1β水平均高于对照组(P＜0.05).糖尿病肾病组肾小管上皮细胞中NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β呈高表达,对照组肾小管上皮细胞中NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β呈低表达或不表达.糖尿病肾病组肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β的表达评分均明显高于对照组(P＜0.05).糖尿病肾病肾间质炎症和肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β表达均呈正相关(P＜0.05).糖尿病肾病肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4免疫组化表达评分和尿IL-18、IL-1β水平均呈正相关(P＜0.05).结论 P2X4可能通过激活NLRP3炎性体,调控炎性细胞因子,引起糖尿病肾病肾间质炎症反应.
-
胆绿素对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的作用
目的 探讨胆绿素(biliverdin,BV)对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的影响及其作用机制.方法 用不同浓度胆绿素(10、20、30μmol/L)处理小鼠RAW264.7巨噬细胞30min后再用LPS(1 μg/ml)处理细胞6h,ELISA法检测培养上清液IL-β和IL-18中的分泌量.30μmoL/L胆绿素处理细胞30min后再用LPS处理细胞6h,Western blot法检测胞内NLPR3、caspase-1、ASC和磷酸化IκB(p-IκB)的蛋白表达水平;NF-κB抑制剂BAY11-7082处理细胞1h后,然后给予细胞30 μmol/L胆绿素孵育30min,经1μg/ml LPS孵育6h,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-β、IL-18的表达水平.结果 (1)在受到LPS作用后,RAW264.7巨噬细胞分泌IL-β、IL-18水平显著升高;而在预先给予胆绿素后,抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18表达,并且呈剂量依赖性(P＜0.05).(2)与空白对照组相比,LPS处理巨噬细胞6h后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达明显上调(P均＜0.05),在同时间点,巨噬细胞在LPS处理前经过胆绿素预处理后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达都显著降低(均P＜0.05).(3)与LPS组相比,BAY+胆绿素明显抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18的表达(P＜0.05),并且BAY和胆绿素的对于LPS诱导炎性反应对的联合抑制作用显著的高于BAY或者胆绿素的单独作用(P＜0.05).结论 在RAW264.7巨噬细胞中,胆绿素可以通过抑制NF-κB的活性进而抑制NLRP3炎性体的形成,从而发挥抗炎作用.
-
痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中TRF1、TRF2及NLRP3炎性体的变化
目的 研究痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中端粒重复序列结合蛋白1(TRF1)、端粒重复序列结合蛋白2(TRF2)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体的变化趋势.方法 选择2013年6月～2015年3月在绵阳市中心医院就诊的急性期(30例)、慢性期(30例)、间歇期(30例)痛风性关节炎90患者,另选择30例健康者为对照,采集外周血单个核细胞并检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase1)、TRF1、TRF2、淋巴细胞功能相关抗原(LFA1)含量,采集血清并检测血清中白介素1β(IL-1β)含量.结果 痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase1、TRF1、TRF2、LFA1的mRNA含量以及IL-1β含量均高于健康者,差异有统计学意义(P＜0.05);急性期患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase1、TRF1、TRF2、LFA1的mRNA含量以及血清中IL-1β含量高于慢性期和间歇期患者,差异有统计学意义(P＜0.05);慢性期患者外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase1、TRF1、TRF2、LFA1的mRNA含量以及血清中IL-1β含量高于间歇期患者,差异有统计学意义(P＜0.05).血清中IL-1β含量与外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase1的含量呈正相关(r=0.882、0.718、0.784,P＜0.05);外周血中LFA-1含量与外周血单个核细胞中TRF1、TRF2的含量呈正相关(r=0.748、0.842,P＜0.05).结论 痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中TRF1、TRF2及NLRP3炎性体的表达增多,能够通过调节炎症和免疫反应来参与病情的发展.
关键词： 痛风性关节炎 端粒重复序列结合蛋白 NLRP3炎性体 白细胞介素1β -
运动预适应调控力竭运动大鼠NLRP3炎性体 信号通路保护心肌的机制研究
目的：探讨运动预适应（EP）调控力竭运动大鼠NLRP3炎性体信号通路保护心肌的机制。方法将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（C组）、无EP力竭组（EE组）、3dEP+EE组和3wEP+EE组，每组12只。C组和EE组均不运动，但EE组于3周后的后1d进行一次尾部负重3%体质量重物的游泳力竭运动；3dEP+EE组和3wEP+EE组按照每天游泳60min（游泳15min、休息5min，重复3次）、每周6d的标准分别训练3d、3周，并于后1d进行一次游泳力竭运动。光镜及电镜下观察心肌组织病理学及超微结构改变，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清白细胞介素（IL-1β、IL-18、IL-6）、超敏C-反应蛋白（hs-CRP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、脑钠肽（BNP）含量，采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测心肌NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）蛋白表达；采用Pearson相关分析各项指标之间的相关性。结果光镜和电镜下观察显示，C组心肌纤维形态结构正常、排列整齐，无间质水肿、肌膜破损及细胞肿胀；EE组心肌染色明显不均匀，大量心肌纤维断裂、排列紊乱，间质纤维中度增生、水肿，大量心肌细胞水肿坏死，线粒体重度水肿，部分嵴和少部分膜融合、模糊不清并且有嵴断裂，肌节紊乱；3dEP+EE组和3wEP+EE组心肌损伤明显减轻，以3wEP+EE组改善为明显。与C组比较，EE组血清IL-1β、IL-18、IL-6、hs-CRP、CK-MB、BNP及心肌NLRP3、caspase-1蛋白表达均显著升高〔IL-1β（μg/L）：18.77±1.28比12.00±1.55，IL-18（μg/L）：236.79±15.73比150.74±7.09，IL-6（μg/L）：59.31±9.17比34.65±2.89，hs-CRP（mg/L）：469.37±137.73比107.15±14.22，CK-MB（U/L）：15.57±0.91比7.40±0.40，BNP（ng/L）：532.08±63.44比386.96±34.77， NLRP3蛋白（灰度值）：0.66±0.07比0.16±0.06，caspase-1蛋白（灰度值）：0.96±0.08比0.48±0.06，均P＜0.01〕。3dEP+EE组和3wEP+EE组上述各指标均较EE组显著降低，且3wEP+EE组除BNP外，各指标明显低于3dEP+EE组〔IL-1β（μg/L）：14.26±1.42比16.57±1.81，IL-18（μg/L）：168.49±7.05比191.92±14.16， IL-6（μg/L）：32.62±3.81比45.61±6.20，hs-CRP（mg/L）：207.06±41.68比339.56±89.65，CK-MB（U/L）：9.97±1.08比13.10±0.78，NLRP3蛋白（灰度值）：0.33±0.07比0.48±0.06，caspase-1蛋白（灰度值）：0.65±0.06比0.79±0.02，均P＜0.01；BNP（ng/L）：432.53±32.03比478.46±44.79，P＞0.05〕。相关分析显示，IL-1β、IL-18、IL-6、hs-CRP、BNP、CK-MB、NLRP3、caspase-1两两之间均呈正相关（均P＜0.01）。结论 EP通过调控NLRP3炎性体信号通路表达降低炎症反应，从而发挥保护心肌的作用，长期EP的作用较短期EP作用明显。
-
原发性痛风中微小RNA-223表达变化及其临床意义
目的 探讨微小RNA-223(miR-223)在痛风急性关节炎调节中可能的作用.方法 收集痛风急性期(AG组)65例、间歇期(IG组)50例、健康体检者45名的血标本、临床资料及实验室检查指标;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR,TaqMan探针法)检测PBMCs miR-223水平.5名健康体检者的PBMCs经100 μg/ml的尿酸盐晶体(MSU)刺激12h后,ELISA检测IL-1β,RT-qPCR检测miR-223及其靶分子NLRP3 mRNA的变化.采用SPSS 17.0统计软件进行分析,非正态定量资料统计描述采用中位数(四分位数间距)[M(Q)],正态定量资料统计描述采用(x)±s表示,组间差异采用Wilcoxon秩和检验或者t检验,变量间的相关性分析采用Spearman相关分析.结果 miR-223在3组表达差异有统计学意义[8(17)和9(17)和26(76);Z=1 1.387,P均＜0.01],两两比较miR-223在AG与IG组均显著低于健康对照组[8(17)和26(76),P＜0.05;9(17)和26(76),P＜0.05],AG低于IG组[8(17)和9(17),P＜0.01].健康人PBMCs经MSU晶体刺激12 h后miR-223表达水平显著降低(0.34±0.20和1.05±0.24,t=-5.164,P＜0.01),而上清液IL-1β浓度及miR-223靶基因NLRP3 mRNA表达水平均显著增高[IL-1β (86±5) pg/ml和(13±6) pg/ml,t=21.042,P＜0.01;NLRP3 mRNA:5.2±0.4和1.3±0.5,t=14.640,P＜0.01].结论 急性痛风患者MiR-223表达降低可能使其靶向抑制NLRP3能力减弱,从而导致IL-1β炎症介质增加;MiR-223可能参与痛风急性炎症的自发缓解,其有望成为痛风急性炎症的治疗靶点.
-
微RNA对Nod样受体蛋白3炎性体调节方式研究进展
在细胞质活化形成的NLRP3炎性体复合体,能够调节促炎性细胞因子如IL-1β、IL-18和IL-33成熟,其异常激活与多种自身炎症、自身免疫以及代谢性疾病动脉粥样硬化、2型糖尿病、阿尔茨海默病、痛风的发生及发展密切相关,但NLRP3炎性体活性变化的调节机制并不完全清楚,基于此,本文简述了新近研究中发现参与NLRP3炎性体调节的miRNA,分析了miRNA对NLRP3炎性体的调节方式,提示miRNA可能通过多种方式参与NLRP3炎性体调控,从而参与多种炎性疾病发生.
-
基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠中性粒细胞炎性信号表达的影响
目的 基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体信号通路观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠诱导的大鼠中性粒细胞炎性信号表达的影响,以期探明其抗炎的药效作用机制.方法 健康雄性SD大鼠30只,按体质量分为5组,每组6只,GD高、中、低剂量组(4,8,16 g/kg)、秋水仙碱阳性对照组(3×10-4 g/kg)均灌胃给药,正常组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d.后1次灌胃1 h后,所有大鼠乙醚麻醉,取血清备用.SD雄性大鼠20只,参照文献方法提取分离大鼠中性粒细胞,接种培养.细胞试验分为2个实验组(不加受体抑制剂,加NALP3受体抑制剂),每个实验组均含6个组,正常对照组加入正常大鼠血清,模型对照组,高、中、低剂量组,秋水仙碱组全部滴加200 mg/L的尿酸钠混悬液造模,同时滴加含药血清,置于CO2细胞培养箱中,孵育12 h取出.酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(NF-κB)活性;蛋白印迹法检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-12(caspase-12)信号衔接蛋白表达水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观测NLRP3炎性体mRNA的表达.结果 细胞造模12 h后,与正常组比较,模型组大鼠中性粒细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-KB、ASC(除了加NALP3受体抑制剂组)、NALP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Caspase-12表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,给药各组IL-1β、IL-6、TNF-α、NALP3 mRNA及GD中、高剂量组NF-κB、ASC表达均明显降低(P<0.05),GD高、中剂量组caspase-12表达明显升高(P<0.05),而秋水仙碱组caspase-12表达无明显变化(P>0.05).结论 GD抗炎作用机制可能与降低中性粒细胞NLRP3、ASC表达,抑制IL-1β分化成熟及NF-KB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关.与秋水仙碱不同的是,GD能够增加caspase-12表达,负反馈抑制NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达,提示GD治疗痛风性关节炎新的抗炎机制.在加入NALP3受体抑制剂下,GD仍然能够降低模型大鼠中性粒细胞中TNF-α、NF-κB表达,提示GD可以通过另外信号通路发挥抗炎作用.
-
姜黄素对糖尿病肾病NLRP3炎性体活化的影响及机制研究
目的 观察姜黄素对糖尿病肾病(db/db)小鼠肾组织及人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中NLRP3炎性体活化的影响,并探讨其作用机制.方法 12只db/db小鼠,分为模型组和姜黄素治疗组,6只db/m小鼠为对照组.HK-2细胞分为对照组,高糖模型组,姜黄素处理组.ELISA法检测db/db小鼠尿蛋白,计算尿蛋白/尿肌酐比值;PAS染色行肾小球硬化指数评分;Western blot方法检测NLRP3、caspase-1和IL-1β在db/db小鼠肾组织和HK-2细胞中的表达;流式细胞仪检测HK-2细胞中线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平.结果 db/db小鼠血糖明显升高,伴有大量蛋白尿,肾小球硬化;db/db小鼠肾组织和高糖处理的HK-2细胞中NLRP3、caspase-1和IL-1β的表达增加;姜黄素治疗显著降低了db/db小鼠尿蛋白,减轻了肾小球硬化,抑制了db/db小鼠肾组织和高糖处理的HK-2细胞中NLRP3炎性体的活化;同时发现,高糖处理的HK-2细胞中线粒体ROS的水平明显增加,经过姜黄素处理后,ROS的水平明显减少.结论 姜黄素可以抑制db/db小鼠肾组织和高糖处理的HK-2细胞中NLRP3炎性体的活化,其作用机制可能与抑制线粒体ROS的产生有关.
-
稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定
目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型.方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD.利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果.结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不明显.结论:成功建立了NLRP3基因稳定敲低的小鼠巨噬细胞系,这种NLRP3炎性体缺损的巨噬细胞是探究NLRP3炎性体活化途径及其介导的炎症信号转导的有力工具.
