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牛膝多糖硫酸酯体外和体内抗艾滋病病毒作用
牛膝多糖硫酸酯(Achyranthes bidentata polysaceharide sulfate, ABPS)为牛膝多糖经硫酸酯化修饰后获得的产物,其结构清楚,理化性质稳定及分子质量小,具有抗单纯疱疹病毒、柯萨奇病毒和乙型肝炎病毒等作用.本文研究其在体外和体内的抗艾滋病病毒1型(human immunodeficieney virus type 1,HIV-1)活性.体外采用3H掺入法和酶联免疫吸附法测定ABPS对HIV-1逆转录酶和整合酶的活性,其半数抑制浓度(50% inhibiting concentrations, IC50)分别为(2.948±0.556)μmol·L-1和(0.155±0.030)μmol-L-1,但25μmol·L-1ABPS对HIV-1蛋白酶无效.ABPS在MT-4细胞培养内对HIV-1实验病毒株ⅢB和在人外周血单核细胞培养内对AZT耐药病毒株的急性感染有较强的抑制作用,但在HIV-1 ⅢB慢性感染的H9细胞培养中则无效.血清药理学研究表明,单次腹腔注射大鼠ABPS 125mg·kg-1或连续腹腔注射小鼠ABPS 3mg·kg-1(qd×20)后鼠血清在MT-4细胞培养内对HIV-1 P24抗原都有抑制作用,但口服ABPS生物利用度低,灌胃大鼠ABPS 2g·kg-1或灌胃小鼠ABPS 300mg·kg-1无效.实验结果提示ABPS有抗HIV-1作用,有可能用于防治HIV-1感染,值得进一步研究.
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复方丹参pH依赖型延迟释药微丸在家犬体内的药效动力学
目的制备复方丹参pH依赖型延迟释药微丸填充胶囊并进行家犬体内药效动力学研究.方法分别用HPMC,Eudragit L-30D-55,Eudragit L100/S100(1:6)包衣制备pH依赖型延迟释药微丸,测定体外释放曲线,并用血清药理学方法进行家犬体内的药效动力学研究.结果制备了复方丹参pH依赖型延迟释药微丸,体外溶出曲线呈pH依赖特征.单剂量给药后自制速释片R的药效动力学参数Tmax为0.58 h,Emax为34.63%,延迟释药胶囊T1和T2的Tmax分别延长至2.42和3.17 h,Emax分别降低至13.57%和14.52%,相对生物利用度分别为99.3%和133.6%.多剂量给药后自制速释片R波动度DF 7.32,延迟释药胶囊T1和T2的波动度DF 3.40和3.03.结论复方丹参pH依赖型延迟释药胶囊体外释放具有pH依赖特征,体内具有明显的延迟释药作用,多剂量达到稳态时,药效动力学波动系数低于普通片.
关键词： 复方丹参 pH依赖型延迟释药微丸 血清药理学 药效动力学 -
大黄蒽醌类成分肝肾毒性和效应物质研究
目的 研究大黄蒽醌类成分的肝肾毒性和效应物质.方法 大鼠灌胃大黄游离型蒽醌提取物制备含药血清.采用血清药理学方法,分别以谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)泄漏量为指标,考察不同剂量含药血清对HL-7702和HK-2细胞的毒性.用血清药化学方法,测定含药血清的HPLC色谱图,并提取各色谱峰紫外吸收光谱图,与空白血清色谱图比较,指认含药血清中的药源性成分,与提取物及对照品色谱图和光谱图比对,分析药源性成分的来源并鉴定部分成分.结果 与相应剂量空白血清细胞组比较,100％和80％含药血清组HL-7702细胞AST泄漏明显增加[(160.67±19.35)U·L-1vs(113.33±2.08)U·L-1,(123.00±7.00)U·L-1vs(82.33±11.93)U· L-1],差异均有统计学意义(均P＜0.01),100％,80％及40％含药血清组HK-2细胞LDH泄漏明显增加[(644.33±9.29)U· L-1 vs (606.67±11.85)U· L-1,(624.33±34.95)U· L-1vs(504.33±16.04)U·L-1,(603.67±42.83)U·L-1 vs(398.00±19.08)U·L-1],差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).大鼠灌胃大黄游离型蒽醌提取物后含药血清中产生了20个药源性成分,其中5个为原形游离型蒽醌,15个为代谢产物.5个为原形游离型蒽醌分别鉴别为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚,15个为代谢产物中的8个分别鉴别为芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷,其余7个代谢产物也具有蒽醌类成分的紫外吸收特征.结论 大黄蒽醌类成分具有肝肾毒性,其效应物质为体内代谢产生的结合型蒽醌及体外原形游离型蒽醌.
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中药脑脊液药理学方法研究进展
随着中医药研究的不断深入以及心脑血管疾病防治的需要,反映体内真实血药浓度下的中药作用物质基础和作用机制研究,已成为药理方法学研究的重点.血清药理学方法的广泛应用,已为中药体外研究提供了一种科学方法;但存在中药复方应用于离体实验时,体内外环境不完全一致等不足.中药脑脊液药理学方法的提出,初步解决了这一难点,为中医药研究中选择适宜的细胞离体培养体系提供了新途径,更为中药复方作用的物质基础和作用机制研究提供了新思路.
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中药复方药物代谢动力学研究方法及展望
本文综述了近年来关于中药复方药物代谢动力学的研究进展,着重介绍了一些新的理论与方法,并对今后该领域的发展进行了展望.
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蛇葡萄根提取物的含药血清对肝星状细胞凋亡及基因Bax/Bcl-2表达的影响
目的:研究中药蛇葡萄根提取物的含药血清对HSC/T6凋亡及凋亡基因Bax/Bcl-2表达的影响,从细胞学和分子生物学水平探讨中药蛇葡萄根抗纤维化的作用机制.方法:用流式细胞仪测定各体积分数(5%,10%和20%)的含药血清对HSC/T6作用后的DNA含量,计算细胞凋亡率;用SABC染色检测凋亡基因Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:含药血清体积分数为5%,10%和20%的蛇葡萄根提取物对HSC/T6的凋亡率分别为8.50%,14.30%和22.65%,均显著大于含生理氯化钠溶液的血清对照组(P<0.01);且均上调HSC/T6的促凋亡基因Bax的蛋白表达,同时下调抗凋亡基因Bcl-2的基因表达.结论:蛇葡萄根提取物含药血清能诱导HSC/T6的凋亡,上调促凋亡基因Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达.
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含去痴灵挥发油的大鼠血清对体外培养新生小鼠皮层神经元的营养作用
目的:研究含去痴灵挥发油的大鼠血清对体外培养新生小鼠皮层神经元的营养作用.方法:采用血清药理学方法,制备含去痴灵挥发油的大鼠血清.体外培养新生小鼠皮层神经元,在无血清培养液中加入含去痴灵挥发油的大鼠血清,使培养基中含药血清的终体积分数分别为0.1%,0.5%和2.5%,设立空白血清对照组和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF,终浓度为20 ng·mL-1)阳性对照组.观察培养48 h细胞的形态学改变,定量比较神经元突起数目和长度;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测培养d 4和d 8神经元存活数;并用RTPCR测定培养d4时神经元细胞的微管相关蛋白2(MAP2)的mRNA含量.结果:0.5%和2.5%的含去痴灵挥发油的大鼠血清均能使神经元突起数目和长度增加、不同培养期细胞存活数增加、MAP2基因表达量增加.结论:含去痴灵挥发油的大鼠血清对新生小鼠皮层神经元具有营养作用.
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富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖处理小鼠血清对K562细胞凋亡的影响及机制
目的:探讨富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖(SPP)处理的小鼠血清在体外对K562细胞凋亡的影响及机制.方法:采用血清药理学法制备SPP处理血清,MTT法观察SPP处理的小鼠血清(终浓度10%)对K562细胞增殖的影响;从形态学、DNA电泳技术观察凋亡发生,比色法检测凋亡相关基因Caspase-3的表达.结果:SPP处理的小鼠血清可显著抑制自血病K562细胞生长,且呈时间剂量依赖性.形态学和DNA电泳结果均证实有凋亡发生.与空白血清组比较,Caspase-3基因上调明显.SPP处理的荷瘤小鼠血清抗肿瘤效果明显优于正常小鼠的处理血清.结论:SPP处理的荷瘤小鼠血清可促K562细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3基因有关.
关键词： 富硒姬松茸 硒蛋白多糖 血清药理学 凋亡 caspase-3基因 -
降糖舒心颗粒对晚期糖化终产物致离体血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:观察降糖舒心颗粒对晚期糖化终产物(AGEs)致离体血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法:分离正常大鼠胸主动脉VSMCs,并传代培养,用AGEs造成胸主动脉VSMCs增殖模型.给正常大鼠灌胃降糖舒心颗粒混悬液10d,制备含药血清,采用噻唑蓝(MTT)比色法和3H-TdR掺入试验测定其吸收度和3H-TdR掺入量(cpm值).结果:AGEs能明显促进VSMCs增殖,降糖舒心颗粒含药血清能抑制胸主动脉VSMCs的增殖及3H-TdR掺入(与对照组比P＜0.05或P＜0.01),并呈现一定的量效关系.结论:降糖舒心颗粒对AGEs诱导VSMCs的增殖有一定的抑制作用.
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去痴灵脂溶性提取物血清抑制M146L细胞分泌β淀粉样蛋白
目的:研究中药复方去痴灵脂溶性提取物血清对转染人类β淀粉样前体蛋白(amyloid beta-proteinprecursor,APP)基因和早老素-1(prsenilin-1,PS-1)基因的M146L细胞分泌β淀粉样蛋白42(amyloid beta-protein42,Aβ42)的抑制作用.方法:采用血清药理学方法,制备去痴灵脂溶性提取物的含药血清.体外培养高效表达Aβ42的M146L细胞株,建立Aβ42过度表达的细胞模型.加入不同浓度(1%,3%和9%)的含药血清,用CCK-8(cell counting kit-8)比色实验检测含药血清对M146L细胞毒作用,用ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay)测定M146L细胞分泌Aβ42的变化.结果:3个浓度的去痴灵脂溶性提取物血清对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用.3个浓度的含药血清均能显著抑制M146L细胞分泌Aβ42,以高浓度组为明显.结论:一定浓度(1%,3%,9%)的去痴灵脂溶性提取物血清对M146L细胞分泌Aβ42有明显的抑制作用.
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纯化雄黄体内外抗肿瘤作用
目的:研究纯化雄黄的体内外抗肿瘤作用.方法:建立移植瘤小鼠S180肉瘤模型,观察纯化雄黄高、中、低剂量(2,1,0.5 g·kg-1,灌胃,qd)连续给药14 d对荷瘤小鼠的瘤重、胸腺指数和脾脏指数的影响,实验同时设溶媒对照组和环磷酰胺阳性对照组(CTX,100 mg·kg-1,腹腔注射1次).另外制备荷瘤小鼠含药血清和正常大鼠的含药灭活血清,通过血清药理学研究方法观察含药血清对人食管癌细胞株Ec9706的体外增殖抑制作用.结果:纯化雄黄可抑制小鼠S180肉瘤的生长,高、中、低剂量组抑瘤率分别为39.1%,29.2%和21.1%,对胸腺指数和脾脏指数无明显影响;荷瘤小鼠含药血清及正常大鼠的含药灭活血清均可抑制人食管癌细胞株Ec9706生长,且在48 h抑制作用达到强,抑制率分别为42.9%和27.7%.结论:纯化雄黄在体内和体外均有明显的肿瘤抑制作用.
关键词： 纯化雄黄 S180肉瘤 血清药理学 人食管癌细胞株Ec9706 -
香青兰及其含药血清对H9c2心肌细胞三种缺氧／复氧损伤模型的影响
目的:比较香青兰醇提物及其含药血清对H9c2心肌细胞3种缺氧／复氧损伤模型的影响,考察香青兰对心肌缺血／再灌注损伤的保护作用.方法:体外培养H9c2心肌细胞,以Na2S2O4,N2和厌氧袋为缺氧环境分别建立缺氧／复氧损伤模型,以T-SOD,MDA,LDH为指标,考察香青兰醇提物(1,10,100 μg·mL-1)及其含药血清对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响.结果:与模型组比较,香青兰醇提物及其含药血清能明显抑制缺氧／复氧损伤H9c2心肌细胞LDH释放和MDA含量,升高T-SOD活力(P＜0.05或0.01).结论:香青兰醇提物及其含药血清对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤具有保护作用,提示香青兰具有保护心肌缺血／再灌注损伤的作用.
关键词： 香青兰 血清药理学 H9C2心肌细胞 缺氧/复氧损伤 心肌缺血/再灌注损伤 -
薯蓣皂苷含药血清抗氧化损伤致心肌细胞凋亡的研究
目的 采用血清药理学方法探讨薯蓣皂苷含药血清对氧化损伤心肌细胞凋亡的作用及其机制.方法 以血清药理学方法采集含药血清.培养原代乳鼠心肌细胞,建立氧化损伤模型,以含药血清进行干预,MTT法检测细胞存活率.Hoechst33258荧光染色法观察药物作用后心肌细胞形态学变化.caspase-3活性测定方法探讨薯蓣皂苷抗凋亡途径.Western blot方法测定薯蓣皂苷对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.结果 MTT法作用结果显示,将原始收集血清稀释为相当于灌胃0.4、0.8、1.2 g(生药)·kg-1浓度时,相对于H2O2单纯损伤组和空白血清组心肌细胞有较高的存活率(P＜0.01),且呈现一定的剂量依赖性.Hoechst33258荧光染色结果显示:与H2O2组相比,含药血清组随着药物浓度升高细胞核固缩凝聚减轻,碎片依次减少.与H2O2组相比,caspase-3活性随含药血清浓度增高而降低.与H2O2组相比,薯蓣皂苷给药组能够下调Bax水平,上调Bcl-2水平,且呈现剂量依赖性.结论 薯蓣皂苷能够提高H2O2诱导的原代乳鼠心肌细胞存活率,降低caspase-3活性;减轻细胞核固缩和聚集,减少细胞核碎片;且能够降低Bax表达水平,提高Bcl-2表达水平.
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心舒口服液对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和家兔体外血小板聚集功能的影响
目的探讨心舒口服液治疗动脉硬化,抑制血管平滑肌增生和抗血小板聚集作用.方法通过血清药理学方法,考察心舒口服液对大鼠血管平滑肌体外增殖作用及家兔体外血小板聚集功能的影响.结果心舒口服液不同时间点含药血清能够明显抑制血管平滑肌细胞的增殖,对花生四烯酸(AA)和ADP诱导的体外血小板聚集功能均有明显的抑制作用.结论心舒口服液治疗心肌缺血作用机制与抑制血管平滑肌细胞增殖和抗血小板聚集有关.
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用血清药理学方法研究灵芝浸膏GLE的抗肿瘤作用机制
目的:探讨灵芝浸膏(Ganoderma lucidum Extract, GLE)的抗肿瘤作用及其机制.方法:采用血清药理学与体内外抑瘤实验相结合方法.MTT法测肿瘤细胞增殖程度,流式细胞仪测细胞凋亡,同时采用生物法测TNF-α,ELISA测定IFN-γ,并用RT-PCR方法检测mRNA表达.结果:(1)GLE(5、10、20 g.kg-1)灌胃显著抑制小鼠移植性肉瘤S180的生长;(2)GLE直接加入S180细胞体外培养不能抑制其生长,亦无诱导其凋亡的作用;(3)GLE血清显著抑制S180细胞生长并诱导其凋亡,GLE血清中TNF-α、INF-γ水平显著升高,而且GLE显著促进其mRNA的表达.结论:GLE无直接的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用是通过促进TNF-α和INF-γ mRNA表达及其生成而实现的.
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炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞钙电流的影响
目的 用血清药理学的方法研究炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞L型Ca2+通道电流(ⅠCa-L)的影响.方法 进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组和5%、10%、20%、40%空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对ⅠCa-L的影响.结果 含药血清各组均可抑制ⅠCa-L,5%、10%、20%、40%含药血清分别将ⅠCa-L峰值从(9.4±1.0)电流密度(pA/pF),降至(7.8±1.0)、(6.7±0.7)、(5.6±0.9)、(5.7±1.1)pA/pF.结论 炙甘草汤含药血清可抑制ⅠCa-L,且呈浓度依赖性作用增强,这可能就是炙甘草汤抗心律失常作用的机理.
关键词： 炙甘草汤 血清药理学 膜片钳 L型Ca2+通道电流 -
中药血清药理学应用研究展望
中药血清药理学是为了研究复方药物离体实验而诞生的学科,是近年来中药药理研究中的热门话题,也是中药复方研究中所采用的重要实验方法之一.目前该方法在实际应用中还存在许多问题,这些问题困扰了我们的实验设计和研究.经过我们在实验中的探索和实际应用,提出几点不成熟的思考以供商榷.
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内消连翘丸含药血清对体外人结节性甲状腺肿细胞增殖及分泌的影响
目的 探讨内消连翘丸对体外培养的人结节性甲状腺肿细胞(结甲细胞)增殖及分泌的影响.方法 分离并培养人的原代结甲细胞,同时用内消连翘丸或优甲乐的含药动物血清进行干预,采用MTT法和放免法检测含药血清对结甲细胞增殖及激素分泌功能的影响.结果 各组含药血清对体外培养的结甲细胞的增殖均有明显的抑制作用,并呈一定量效和时效关系,其中内消连翘丸大、中剂量组优于优甲乐组.促甲状腺素(TSH)对结甲细胞的增殖和分泌功能均有促进作用,中药各组合药血清对加TSH刺激的结甲细胞增殖仍有不同程度的抑制作用,中药作用24h对结甲细胞的激素分泌功能无明显影响.结论 在一定时间范围内,内消连翘丸含药动物血清可在不明显影响细胞分泌功能的前提下抑制结甲细胞的增殖.
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化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究
为探讨中药化痰散结方诱导人肺癌细胞(SPC-A1)凋亡的作用及其对正常人胚肺细胞的毒性作用,通过血清药理学方法,选择不同浓度的含药兔血清与人肺癌细胞共同孵育处理,并以正常人胚肺细胞(HEL)作对照.结果:人肺癌细胞经含中药兔血清作用,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增强;荧光镜下可见细胞核破碎,裂解为大小不等的凋亡小体;流式细胞仪检测显现典型的细胞凋亡峰,以5%含药血清作用48 h凋亡峰为明显,凋亡率为42.8%;出现S期细胞阻滞;而该含药血清对人胚肺细胞无诱导凋亡作用.化痰散结方通过血清药理学方法诱导人肺癌细胞的凋亡,可能是其抗肿瘤的分子学机制之一.
