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大黄素对兔主动脉平滑肌细胞Cat K,Cat D mRNA表达的影响
目的:探讨大黄素对兔主动脉平滑肌细胞(CCC-SMC-1)组织中蛋白酶K(Cat K),组织蛋白酶D(Cat D)mRNA表达的影响.方法:以2×104/mL密度接种细胞,实验分5个实验组,大黄素0.01,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25 mmol·L-组,对照组为培养基空白组,培养24 h,每组设5个复孔.MTT法观察大黄素对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用,PCR法检测大黄素对兔主动脉平滑肌细胞Cat K,Cat D mRNA的表达.结果:MTT法显示大黄素在0.05~ 0.25 mmol·L-1浓度对CCC-SMC-1细胞增殖有抑制作用,作用24 h后的半数抑制浓度(IC50)为0.10 mmol·L-1,且IC50随作用时间的延长显著前移.PCR法显示,不同浓度的大黄素作用于兔主动脉平滑肌细胞24 h后,与正常组细胞相比,Cat K,Cat D mRNA表达上调(P<0.05).结论:大黄素能抑制CCC-SMC-1细胞的增殖,其机制可能与上调Cat K,Cat D mRNA表达有关.
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冠心舒通胶囊及其各单味药对心肌细胞和主动脉平滑肌细胞损伤的保护作用机制研究
目的:探讨冠心舒通胶囊及其各单味药对体外培养乳鼠心肌细胞和主动脉平滑肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤以及细胞增殖的影响.方法:用MTT比色法,考察广枣提取物、丹参提取物、天竺黄水提物、天竺黄醇提物、冰片和胶囊内容物(0.01,0.05,0.10,0.20 μg·L-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞和主动脉平滑肌细胞增殖的影响.取原代培养的乳鼠心肌细胞和主动脉平滑肌细胞,建立H/R细胞损伤模型,实验分为正常细胞对照组(NC)、模型组(H/R)、以上各给药组(0.01,0.05,0.10 μg· L-1),给药24 h后测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)的水平.结果:与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,LDH漏出量增加、MDA含量增加、NO含量减少,NOS活性降低,SOD活性降低;与模型组比较,给药组可明显提高细胞存活率,提高细胞内SOD活性,增加NO含量,减少LDH漏出量和MDA含量,提高NOS活性.结论:冠心舒通胶囊及其各单味药对H/R损伤的心肌细胞和主动脉平滑肌细胞具有保护作用,其机制与抗脂质过氧化和舒张血管以及抑制细胞增殖有关.
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益气通络丹对体外培养大鼠血管平滑肌细胞自分泌NO的影响
益气通络丹是补阳还五汤的化裁方, 本实验从抗大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖方面, 对其疗效机理作了如下探讨.
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同型半胱氨酸对人主动脉平滑肌细胞 HCY-2表达及细胞增殖的影响
目的体外研究同型半胱氨酸(HCY)及叶酸对人主动脉平滑肌细胞(hASMCs)中同型半胱氨酸诱导基因(HCY-2)蛋白表达的影响,以及HCY对hASMCs增殖的影响.方法以免疫组织化学ABC法对体外培养的hASMCs中的HCY-2表达进行形态学观察,并利用图像分析系统对结果进行定量分析;以细胞计数法观察不同浓度HCY对体外培养的hASMCs增殖的影响.结果HCY-2主要表达在hASMCs的胞浆中,其表达强度与培养液中HCY浓度呈正性剂量依赖关系;叶酸促使HCY-2表达增强;不同浓度HCY可影响hASMCs的增殖,细胞增殖数目随HCY浓度增长而增加,当HCY到达1.25 mmol/L时,细胞数目达到大值,随着HCY浓度的继续增加,细胞增殖呈下降趋势.结论HCY促使HCY-2表达增强;并影响hASMCs的增殖.叶酸对HCY有拮抗作用.
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主动脉平滑肌细胞在三维培养中产生弹性纤维的研究
目的研究主动脉平滑肌细胞(ASMC)在仿真皮替代物的三维培养中是否能产生弹性纤维. 方法取1周龄SD大鼠胸主动脉,进行原代和传代培养,以α肌动蛋白免疫细胞化学染色鉴定平滑肌细胞.然后,将ASMC与胶原、甲壳素及糖胺多糖组合形成的凝胶混合,进行三维培养;培养1周和2周后,用Gomori醛复红染色和弹性蛋白免疫细胞化学染色,检测ASMC胶原凝胶. 结果传代细胞经α肌动蛋白免疫细胞化学染色鉴定,98%以上为ASMC.培养1周和2周的ASMC胶原凝胶中,均显示有弹性纤维存在. 结论 ASMC在仿真皮替代物的三维培养中能够产生弹性蛋白,并形成弹性纤维.
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三维培养的主动脉平滑肌细胞-胶原凝胶皮下移植的研究
目的研究经三维培养后的主动脉平滑肌细胞(ASMC)-胶原凝胶移植后,是否仍能产生弹性纤维及宿主的接受状态. 方法将仿真皮替代物三维培养2周的ASMC-胶原凝胶植入大鼠皮下,分别于术后4、7、10、14和28 d取材,用HE染色、Gomori醛复红染色、α肌动蛋白免疫组织化学染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,观察和检测ASMC-胶原凝胶. 结果在移植后第1周有大量的弹性纤维产生,但于28 d时完全消失.在移植后的28 d内,ASMC-胶原凝胶块周围没有明显的白细胞浸润. 结论利用ASMC-胶原凝胶作为一种有弹性的真皮替代物,尚需进一步的研究.
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原子力声显微镜研究大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5的弹性特征
目的 使用原子力声显微镜获得大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞的弹性分布.方法 使用原子力显微镜加声激励对在盖玻片上附壁生长的A7r5大鼠主动脉平滑肌细胞成像,在进行原子力声显微镜成像的同时,辅以力-距离曲线计算弹性模量.结果 使用原子力声显微镜可以在数分钟内无创、完整显示纳米尺度的A7r5大鼠主动脉平滑肌细胞的弹性分布,并得到其弹性模量.结论 原子力声显微镜可以在数分钟内无创、完整显示纳米尺度的细胞的弹性分布.
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载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞增殖及迁移的机制研究
目的:探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及迁移的机制。
方法:利用D-4F预孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs),而后给予氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导;采用CCK8细胞活力试剂盒检测VSMCs的增殖;利用transwell迁移小室和细胞划痕实验检测VSMCs的迁移;采用活性氧探针测定活性氧簇(ROS)的释放;利用western blot检测PI3K/Akt信号通路的激活和血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达。使用PI3K/Akt抑制剂、HO-1抑制剂及RNAi下调HO-1的表达,检测D-4F拮抗ox-LDL诱导VSMCs增殖和迁移的机制。 -
血管紧张素Ⅱ促进升主动脉瘤主动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶2增加
目的:一些研究报道证实胸主动脉瘤患者的升主动脉瘤壁中基质金属蛋白酶(MMP-2)表达和活性增高,然而触发MMP-2活性增强的分子和细胞学机制并不清楚。因此,我们将去探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否参与主动脉平滑肌细胞(SMCs)MMP-2表达上调及机制,这对胸主动脉瘤发病机制的揭示具有一定的作用。
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槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素(quercetin)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(SMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.方法:采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85~180 kD明显.结论:槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达.
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肝素小分子片段对平滑肌细胞生长及其抗凝作用的对比研究
肝素小分子片段抑制平滑肌细胞(SMC)增殖及抗凝作用的关系目前尚缺乏认识。本研究发现几种小肝素片段抗凝活性基本丢失,但均保持了抑制SMC增殖的活性。 1. 材料与方法:(1)肝素及其小分子片段对培养的人主动脉SMC的作用:将培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC)接种于24孔培养板。每孔1 ml (1×104细胞),实验共分7组:第1~5组含有不同糖基数的肝素小分子片段,第 6组含大分子肝素,第7 组为对照组,不含肝素及肝素小分子片段。上述各组肝素的浓度均以糖醛酸表示,每组3个浓度(19、38、76 μg/ml)。用含 10%人血清,10%胎牛血清的DMEM培养液培养24 h,然后用3[KG*2]HTdR参入法观察肝素及其小分子片段对培养的hASMC生长的影响。(2)肝素小分子片段抗凝活性的测定:用凝血法测定肝素及不同肝素小分子片段激活全血凝固时间。
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肿瘤坏死因子α介导的体外培养人血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的表达
目的采用肿瘤坏死因子(TNF-α)与胎儿主动脉平滑肌细胞(SMCs)共孵育,通过抗体阻滞实验方法,探讨中和抗体对TNF-α介导的基质金属蛋白酶(MMPs)及组织型金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)表达增强的影响,试图在细胞和分子的水平上探讨动脉粥样硬化不稳定斑块相关的发病机制,为临床防治提供新的思路.
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关键词:
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心舒口服液对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和家兔体外血小板聚集功能的影响
目的探讨心舒口服液治疗动脉硬化,抑制血管平滑肌增生和抗血小板聚集作用.方法通过血清药理学方法,考察心舒口服液对大鼠血管平滑肌体外增殖作用及家兔体外血小板聚集功能的影响.结果心舒口服液不同时间点含药血清能够明显抑制血管平滑肌细胞的增殖,对花生四烯酸(AA)和ADP诱导的体外血小板聚集功能均有明显的抑制作用.结论心舒口服液治疗心肌缺血作用机制与抑制血管平滑肌细胞增殖和抗血小板聚集有关.
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TNF-α增强主动脉平滑肌细胞内1型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达参与感染性休克的发生机制
目的 研究TNF-α对主动脉平滑肌细胞(VSMC)内1型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3RⅠ)表达的影响,揭示TNF-α影响VSMC收缩功能参与感染性休克的发生机制.方法 原代分离培养大鼠VSMC.按TNF-α处理的不同时间点(0、4、8、24h)分4组.分别应用Western blot、免疫荧光、RT-PCR、双荧光素酶检测方法,观察TNF-α对IP3R Ⅰ mRNA、蛋白表达及其启动子活性的影响.结果 TNF-α处理组细胞内IP3RⅠ分布未见变化,8、24h组荧光强度增强提示IP3RⅠ蛋白含量增加,IP3RⅠ蛋白表达升高(4h:1.059±0.005 vs 1.000 ±0.002,P =0.010;8h:2.416 ±0.042 vs 1.000±0.002,P <0.01;24h:2.138±0.010vs 1.000 ±0.002,P <0.01,n=9),IP3R Ⅰ mRNA表达明显增加(4h:2.260±0.889 vs 1.00±0.02,P=0.193;8h:5.449±2.279vs1.00±0.02,P=0.000;24h:3.049±1.684 vs 1.00±0.02,P=0.042,n=9).转染PGL3-IP3R Ⅰ promoter质粒后TNF-α组IP3R Ⅰ启动子活性明显增强(3.56±0.65 vs 1.00±0.05,P=0.020,n =9).结论 TNF-α可上调IP3R Ⅰ基因启动子活性,从而引起IP3R Ⅰ蛋白表达升高,增强VSMC内IP3Rs系统介导的Ca2+释放作用,这可能是TNF-α影响VSMC收缩功能参与感染性休克血管调控的机制之一.
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主动脉平滑肌细胞的三维培养研究
目的研究主动脉平滑肌细胞(aortic smooth muscle cell,ASMC)在三维培养中是否仍能产生弹性蛋白.方法取一周龄SD大鼠胸主动脉,经原代、传代培养后,和胶原、血清及培养液混合形成ASMC胶原凝胶,进行三维培养;培养2周后用Gomori醛复红弹性纤维染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,检测细胞胶原凝胶中所产生的弹性纤维,并进行电镜观察.结果传代细胞经α肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定,98%以上为ASMC.培养2周的ASMC胶原凝胶切片用二种染色方法均可显示有弹性纤维存在,电镜观察细胞超微结构呈典型的合成表型.结论ASMC在三难培养中能够产生弹性蛋白,并形成弹性纤维.
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马齿苋总黄酮对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 观察马齿苋总黄酮对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的抑制作用及机制.方法 由细胞计数、MTT法测定细胞增殖率,采用羟胺法、TBA方法分别测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果 马齿苋总黄酮(16.0、32.0、64.0μg/ml)以浓度依赖方式抑制RASMC及氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导RASMC增殖,可诱导少量RASMC凋亡.马齿苋总黄酮预处理24 h后已出现明显的抗增殖作用,提高培养液中SOD活性[(95.2+25.6)U/nd比(73.6+21.4)U/m1]、降低MDA含量[(3.78±0.52)nmol/L比(4.52±0.74)nmol/L],与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 马齿苋总黄酮具有抗RASMC增殖作用,该作用与提高SOD活性、降低MDA含量有关.
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反义TR和p21双基因共表达对人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用
目的观察携带反义凝血酶受体(ATR)或/和p21的单、双基因重组腺病毒伴随病毒(rAAV)载体对人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖与凋亡的影响.方法以携带ATR或/和p21的单、双基因rAAV感染人ASMC.半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达;MTT法测定感染不同时间点的细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期与凋亡细胞数目的变化;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色检测凋亡细胞的比率.结果单、双基因在ASMC中均获得整合,且双基因发生了共表达;病毒感染4 d时,ATR组、p21组和AP双基因组的细胞存活率与对照组相比分别降低了16.7%、21.6%和29.4%;三组的G0/G1期细胞数分别为(61.8±2.9)%、(82.5±4.0)%和(80.4±6.1)%;凋亡细胞数为(4.8±0.5)%、(5.7±0.1)%和(9.2±0.9)%;AO/EB染色显示的凋亡细胞比率分别为:对照组(1.5±0.8)%、ATR组(7.2±3.3)%、p21组(10.7±5.6)%、AP组(18.3±2.7)%.结论(1)双基因共表达对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用均较单基因具有较强的生物学效应.(2)为再狭窄的基因治疗提示了更优化的途径.
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体外培养高糖、高脂喂养大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的研究
目的 检测高糖、高脂喂养Goto-Kakizaki(GK)糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞(SMCs)的血管钙化指标,探讨糖尿病血管钙化的相关机制.方法 高糖、高脂喂养GK及Wistar大鼠2周,同时分离培养两组大鼠的主动脉SMCs,Wistar大鼠SMCs作为对照.通过细胞计数法观察细胞生长状况,以甲基百里香酚蓝比色法测定两组大鼠细胞层及培养上清中钙的含量,实时定量PCR检测两组细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、核心结合因子α-1(Cbfα-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达.结果 与Wistar大鼠SMCs相比,GK大鼠SMCs生长速度明显缓慢(F =363.392,P<0.05);细胞层钙含量[(0.56±0.22) vs.(0.39±0.09),t=2.47,P<0.05]明显增加,培养上清中钙含量[(0.82±0.22)vs.(1.20±0.17),t=-22.573,P<0.05]明显减少.GK大鼠SMCs中ALP (t=12.963,P<0.05)、OPN(t=8.305,P<0.05)及Cbfα-1(t=10.109,P<0.05)的基因表达增加,同时α-SMA(t=-8.219,P< 0.05)的基因表达减少.结论 高糖、高脂喂养的GK糖尿病大鼠的主动脉平滑肌细胞易发生钙化.
关键词: 细胞钙化 主动脉平滑肌细胞 Goto-Kakizaki大鼠 糖尿病 -
中药活性成分对oxLDL诱导血管平滑肌细胞泡沫化的影响
目的 探讨中药活性成分黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)、羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)和芍药苷(paeoniflorin,PAE)对小鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)泡沫化过程的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养小鼠ASMCs,并利用免疫荧光染色对其进行鉴定.利用氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)和肿瘤坏死因α(TNFα)诱导ASMCs泡沫化,并应用ASIV、HSYA和PAE进行干预,观察其对泡沫细胞形成的影响,应用油红O染色检测细胞形态学改变、酶促比色法测定细胞内胆固醇含量变化;应用RT-PCR和Western blot方法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白1(LOX-1)表达的变化.结果 oxLDL (80μg/mL)和TNFα (30 ng/mL)联用72h可诱导ASMCs泡沫化,细胞内脂质颗粒明显增多,细胞内胆固醇含量增加,LOX-1表达上调;ASIV、HSYA和PAE显著抑制上述各过程.结论 ASIV、HSYA和PAE能够抑制ASMCs泡沫化,抑制oxLDL诱导的LOX-1表达可能是其作用机制之一.