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脑外伤后血小板衍生生长因子及血管内皮生长因子对骨折愈合影响的实验研究
目的:探讨脑外伤后血小板衍生生长因子(PIDGF)及血管内皮生长因子(VEGF)对骨折愈合的影响.方法:选取180只大鼠进行实验,随机分成A、B、C、D四组,A组为脑外伤组40只,B组为骨折组56只,C组为骨折合并脑外伤组60只,D组为正常对照组24只,进行生物学实验观察实验结果.结果:X线摄片显示,C组骨痴形成速度明显优于B组(P＜0.05);在手术后1d、4d和1周时,C组PDEF表达明显高于B组(P＜0.05);在手术后4d、1周和2周时,C组VEGF表达明显高于B组(P＜0.05).结论:脑外伤后骨折愈合速度加快,主要与生长因子特别是血小板衍生生长因子和血管内皮生长因子持续时间和表达高峰提前有关.
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EGFRvⅢ及PDGF-D在结肠癌中的表达及临床意义
目的:探讨EGFRvⅢ和PDGF-D在不同分化程度及不同临床分期的结肠癌及正常对照组中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化法检测60例结肠癌组织及20例正常结肠组织中EGFRvⅢ和PDGF-D的表达.结果:EGFRvⅢ和PDGF-D在结肠癌中高表达,且与病理分化程度及TNM分期有关(P＜0.05).二者在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.636,P＜0.05).结论:EGFRvⅢ、PDGF-D与结肠癌发生发展密切相关,二者可能协同起作用.
关键词： 结肠癌 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体 血小板衍生生长因子 免疫组化 -
CTGF、PDGF-BB、TIMP-1、sICAM-1在肝纤维化程度中的评价
目的:探讨慢性肝炎患者血清中结缔组织生长因子(CTGF)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)在诊断中的临床价值.方法:用ELISA法检测146例慢性肝炎患者血清CTGF、PDGF-BB、TIMP-1、sICAM-1,同时与常规肝穿刺、组织病理检查结果进行相关分析,用ROC曲线评估这些指标在肝纤维化诊断中的价值.结果:血清CTGF、PDGF-BB、TIMP-1、sICAM-1均与肝纤维化分期呈正相关,ROC曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.789、0.707、0.723,联合这些指标可以明显提高诊断的准确性.结论:血清CTGF、PDGF-BB、TIMP-1、sICAM-1是肝纤维化分期标记物,在其程度评价中应用价值较高.
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糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织血小板衍生生长因子及受体表达的影响
目的：观察糖肾宁对自发性2型糖尿病 KK-Ay小鼠肾组织血小板衍生生长因子( platelet-derived growth factor, PDGF )、血小板衍生生长因子受体( platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)蛋白表达的影响。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,随机分为模型组、缬沙坦组和糖肾宁组各20只,设立C57BL/6J小鼠20只为空白组；药物干预12周后,测定24小时尿微量白蛋白排泄率( urinary albumin excretion, UAER),Masson染色观察各组肾脏病理,Western Blot检测PDGF、PDGFR蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组24小时UAER明显升高(P<0.05),肾组织PDGF、PDGFR蛋白表达明显升高；与模型组比较,缬沙坦组和糖肾宁组24小时UAER均有不同程度的降低(P<0.05),给药组间无显著性差异(P>0.05),肾组织PDGF、PDGFR蛋白表达有不同程度降低(P<0.05)。结论糖肾宁能够降低自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠24小时UAER,抑制PDGF及PDGFR蛋白的过度表达,保护肾功能。
关键词： 糖尿病肾病 糖肾宁 KK-Ay小鼠 血小板衍生生长因子 血小板衍生生长因子受体 -
益气解毒通络颗粒对乙肝肝硬化患者肝星状细胞标记物VEGF和PDGF-AB的影响
目的:探讨益气解毒通络颗粒剂治疗乙肝肝硬化好转的分子机制,完善该方治疗乙肝肝硬化的理论基础.方法:选取2015年6月至2017年10月在北京中医药大学东直门医院,采用简单随机化分组方法,随机选择符合入排标准的体检中心体检健康者15例,肝炎门诊就诊的乙肝肝硬化患者42例.乙肝肝硬化患者均已规范使用抗病毒药恩替卡韦分散片治疗,入组后予益气解毒通络颗粒治疗6个月;对健康者,乙肝肝硬化患者治疗前、治疗6个月后,分别采集血样,待标本集中后采用酶联免疫吸附法成批检测VEGF、PDGF-AB含量.并将测定结果进行统计分析.结果:结果显示,血清VEGF水平乙肝肝硬化患者治疗前较健康者轻度升高,治疗后较治疗前及健康者均有所下降,但组间比较无统计学意义(P>0.05);血清PDGF-AB水平乙肝肝硬化患者治疗前较健康者显著降低(P<0.001),治疗后较治疗前有所升高(P<0.05)但仍低于健康者(P<0.05).结论:VEGF和PDGF-AB水平的变化与乙肝后肝硬化的发病相关,益气解毒通络颗粒能够改善乙肝肝硬化患者血清VEGF和PDGF-AB水平,这可能是其治疗乙肝肝硬化的作用机制之一.
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平喘宁对哮喘大鼠Bcl-2,Bax,EGF mRNA及PDGF mRNA表达的影响
目的:观察平喘宁对寒性哮喘大鼠的肺功能、气道形态学、肺组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),表皮生长因子(EGF)mRNA及血小板衍生生长因子(PDGF) mRNA表达的影响.方法:将105只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组、平喘宁高、中、低剂量组,每组15只.以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠寒哮模型,造模21 d后,各给药组分别给予桂龙咳喘宁组(10 9·kg-1·d-1),地塞米松组(0.4 mg·kg-1·d-1),平喘宁高、中、低剂量组(19.6,9.8,4.9 g·kg-1 ·d-1),ig给药,正常组、模型组每天ig给予等量蒸馏水,连续给药4周,处死前测定肺功能,处死后解剖大鼠并取出肺组织.采用免疫组化法测定肺组织中Bcl-2及Bax的表达.采用苏木素和伊红(HE)染色行病理形态学改变观察,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测EGF mRNA,PDGF mRNA表达丰度.结果:与正常组比较,模型组大鼠支气管炎性细胞浸润明显,显著变窄,平滑肌增厚;肺功能下降(P＜0.01).Bcl-2表达升高,Bax表达降低(P＜0.01);EGF mRNA,PDGF mRNA表达升高(P＜0.01).与模型组比较,各给药组的肺组织病理改变减轻;肺功能有不同程度的好转(P＜0.01,P＜0.05).各给药组肺组织中Bcl-2表达降低,Bax表达增加(P＜0.01,P＜0.05).各给药组EGF mRNA,PDGF mRNA表达水平降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:平喘宁可降低哮喘大鼠Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达;抑制EGF mRNA,PDGF mRNA表达,从而抑制细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路活化,减轻炎性反应,改善肺功能,抑制气道平滑肌增生,延缓气道重塑而治疗哮喘.
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补肾活血方对肾间质纤维化大鼠肾组织中血小板衍生生长因子蛋白表达的影响
目的:观察补肾活血方对实验大鼠肾间质纤维化的保护作用并探讨其作用机制.方法:实验采用单侧输尿管梗阻大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、洛汀新组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组,观察了梗阻侧肾脏组织形态学改变,并分别于单侧输尿管梗阻术后第3、7、14、21、28d采用法,观察造模大鼠肾组织中血小板衍生生长因子(PDGF-BB)蛋白表达变化.结果:造模各组与假手术组相比均呈不同程度的病理损害,肾组织PDGF-BB蛋白表达3d后开始增加,随时间延长,PDGF-BB蛋白表达逐渐增加.与模型组相比,各给药组大鼠肾功能得以改善,肾组织PDGF-BB蛋白的表达有所降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:补肾活血方可以降低肾组织中PDGF-BB蛋白的表达,防治肾间质纤维化.
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芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证大鼠血清HIF-1α及PDGF表达的影响
目的:观察芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)痰瘀阻肺证模型大鼠血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1 α)、血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响.方法:复制COPD痰瘀阻肺证大鼠模型,给予芪白平肺胶囊、法舒地尔干预,ELISA检测模型大鼠HIF-1 α、PDGF表达.结果:模型组PDGF、HIF-1 α表达水平较正常组明显升高(P＜0.01);芪白平肺胶囊低剂量组PDGF、HIF-1 α表达水平较正常组显著升高(P＜0.05);芪白平肺胶囊低、高剂量组PDGF、高剂量组HIF-1 α表达水平较模型组明显降低(P＜0.05,P＜0.01);芪白平肺胶囊低剂量组PDGF表达水平较芪白平肺胶囊高剂量组显著降低(P＜0.05).结论:芪白平肺胶囊可降低COPD痰瘀阻肺证模型大鼠血清PDGF、HIF-1 α表达水平.
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海昆肾喜对阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及其mRNA表达的影响
目的:研究海昆肾喜(fucoidan)对阿霉素肾病大鼠肾组织血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用阿霉素肾病模型,将54只大鼠随机分为6组:正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、海昆肾喜低及高剂量组(0.77,3.08 mg·kg-1).实验第10周观察各组大鼠24 h尿蛋白定量,肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平及肾组织形态学变化;应用免疫组化及原位杂交方法分别观察PDGF-BB蛋白及mRNA在肾组织中的表达.结果:海昆肾喜低及高剂量组24 h尿蛋白定量和Scr,BUN水平较模型组均明显降低.PDGF-BB蛋白及mRNA的表达见于肾小管上皮细胞胞浆及肾小球系膜细胞,其表达较模型组显著减少.结论:海昆肾喜能抑制阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及mRNA的表达,这可能是该药物防治肾小球硬化的作用机制之一.
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蝎毒多肽提取物抑制肝癌H22细胞化疗期间再增殖实验研究
目的:观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对H22肝癌荷瘤小鼠化疗期间再增殖的抑制作用并探讨可能的机制.方法:96只Balh/c小鼠皮下接种小鼠肝癌H22细胞,随机分为模型组、PESV高、低剂量组和荷瘤对照组.以5-Fu对荷瘤小鼠进行化疗建立再增殖模型.按不同的用药方法对4组小鼠进行干预,每周测量肿瘤体积2次.各组每7 d处死6只小鼠,实验共进行35 d.以免疫组织化学方法检测各组肿瘤组织CD105,PCNA,VEGF,PDGF蛋白水平表达.以CD105标记微血管,计算微血管密度(MVD).结果:荷瘤对照组肿瘤体积在13～24 d增加迅速,荷瘤对照组小鼠在第27天全部死亡,模型组肿瘤体积在17 d前增长较快,在第17～22天增加较慢,之后体积增加又较快,在第31天全部死亡.PESV高、低剂量组肿瘤体积全程缓慢增加,体积在17 d以后显著低于模型组,PESV高低剂量组之间仅在第17天存在差异(P<0.05).免疫组织化学检测显示,模型组肿瘤组织第31天PCNA表达水平高于第21,28天(JP<0.01),PESV高、低剂量组表达水平显著低于模型组(P<0.01),PESV高、低剂量组仪在第17天存在显著差异(P<0.05).免疫组织化学检测显示,与PESV高、低剂量组相比,模型组CD105-MVD在第21,28天(P<0.05),第35天(P<0.01)存在显著差异,PESV高低剂量组之间无差别.模型组VEGF表达第35天高于第21,28天(P<0.05),PESV高、低剂量VEGF表达在第21,28,35天表达水平均显著低于模型组(P<0.01),PESV高低剂量组无差别.模型组肿瘤PDGF表达水平逐渐下降,PESV高,低组在第21天表达水平低,之后逐渐增高,PESV高低剂量组之间在第35天存在显著差异(P<0.01).相关性分析显示,肿瘤组织VEGF表达水平与肿瘤组织CD105-MVD呈正相关(r=0.669).结论:PESV可抑制H22肿瘤在化疗期间再增殖作用,其机制可能是抑制血管生成和使肿瘤血管正常化.
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大黄丹参水煎剂对胰腺纤维化大鼠转化生长因子β1、血小板衍生生长因子BB及其mRNA表达的影响
目的 观察大黄丹参水煎剂抗胰腺纤维化的可能作用机制.方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和大黄丹参水煎剂低、中、高剂量组,每组10只.腹腔注射二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)6周建立胰腺纤维化模型.大黄丹参水煎剂低、中、高剂量组在造模同时分别给予大黄丹参水煎剂0.137、0.274、0.548 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药6周.免疫组化检测胰腺α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-PCR检测胰腺大鼠转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA、血小板衍生生长因子BB (PDGF-BB) mRNA表达,免疫印迹法检测TGF-β1蛋白、PDGF-BB蛋白表达.结果 正常组α-SMA低表达,模型组α-SMA高表达,大黄丹参水煎液各剂量组α-SMA均有不同程度的减弱.模型组TGF-β1、PDGF-BB蛋白B mRNA表达较正常组上调(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,大黄丹参中、高剂量组TGF-β1蛋白及mRNA表达下调,大黄丹参高剂量组PDGF-BB蛋白及mRNA下调(P ＜0.05或P＜0.01).与大黄丹参中剂量组比较,大黄丹参高剂量组TGF-β1蛋白下降显著(P ＜0.05). 结论 “下调TGF-β1及PDGF-BB及其mRNA表达—抑制α-SMA表达—抑制PSC活化—减少ECM合成—改善ECM沉积”可能是大黄丹参抗胰腺纤维化的作用机制之一.
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生物材料及细胞外基质与骨形成研究进展
骨修复一直是骨科界的难题之一,许多学者进行了相关研究.近二十多年来,随着生物化学和分子生物学研究的发展,发现细胞的附着与细胞表面的受体及细胞外基质表面的特定位点有关,成骨细胞成骨活性与细胞外基质(extracellar matrix,ECM)有着密切的相关性,ECM的成分包括有机和无机成分两类,对骨形成起着主要作用的有骨形态蛋白(bone morphgenetic proteins,BMP),纤维粘连蛋白(fibronectin,FN),层粘蛋白(laminin,LN),波基结合素(vitronectin,VN)等.在骨形成的各个时期均有生长因子参与调节,如胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ,β-转化生长因子,酸、硷成纤维细胞生长因子,血小板衍生生长因子等多种骨原性生长因子.其中β-转化生长因子(transforming growth fator β,TGF-β)尤其引人注目[1].另外,硷性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),骨钙素(osteonectin,OC)及Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ)也来源于骨组织细胞的代谢物质,贮存于骨基质中.生物活性材料作为细胞外基质载体也是目前研究的热点,本文就部分生物材料及细胞外基质与骨形成的研究作一综述性报道.
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重力矢量及趋化诱导对脂肪干细胞在PLGA电纺膜上早期增殖的影响
观察研究重力矢量方向及血小板衍生生长因子(PDGF)趋化诱导,在体外环境对人脂肪于细胞(ASCs)在PLGA电纺膜表面黏附和增殖活动的影响.体外原代培养从人颊脂垫提取的ASCs,根据不同重力矢量条件以及有无趋化因子PDGF将实验分为4个组.A组:PDGF/重力矢量(+),含PDGF的PLGA电纺膜置于ASCs悬液底部;B组:PBS/重力矢量(+),空白(PBS)电纺膜置于ASCs悬液底部;C组:PDGF/重力矢量(-),含PDGF的PLGA电纺膜覆于ASCs悬液表面;D组:PBS/重力矢量(-),空白(PBS)电纺膜覆于ASCs悬液表面.分别于0、1、3、5、8、11d加入Alamar Blue继续孵化24 h后测OD值,对照标准曲线,计算各组Alamar Blue的下降百分比,评估ASCs的黏附增殖活动.结果显示:在重力矢量(+)组的早期(第1～4 d),无论趋化因子PDGF存在与否,Alamar Blue的下降百分比都能达到30％左右,不影响细胞的定植、黏附与增殖.但是在重力矢量(-)组,缺少趋化因子PDGF的Alamar Blue的下降百分比为25％左右,细胞将无法正常的定植与黏附.PDGF具有明显诱导ASCs趋化聚集作用,能减轻不利重力因素的影响,显著改善ASCs黏附与增殖.
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悬浮红细胞上清中与肿瘤相关非细胞成分蓄积规律研究
本研究探讨悬浮红细胞(pRBC)上清中与肿瘤相关的非细胞成分在整个保存期中的蓄积规律.在采集当日对悬浮红细胞进行五联袋分装,于保存第0、7、14、21、28、和35 d各取30 ml红细胞悬液,以1006×g离心10 min后取上清,采用ELISA方法测定正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蓄积浓度.结果表明:RAN-TES/CCL5和TNF-α在新鲜pRBC上清中保持有较高的浓度,随着保存期的延长,其蓄积浓度未见有明显增高.VEGF在保存当天的pRBC上清中浓度为229.9 pg/ml,保存7d末浓度迅速上升至749.08 pg/ml,之后较稳定地维持在高水平,保存35 d末其浓度为760.67 pg/ml,其浓度曲线显示了保存7d后的一个明显上升,但配对t检验未见有统计学差异.PDGF的蓄积规律表现为:PDGF在保存当天的pRBC上清中浓度为13.54 ng/L,保存期内稳定上升,28 d末略有下降,保存35 d末其浓度迅速上升为22.13 ng/L(P ＜0.05),显示浓度增长有统计学差异.MCP-1在保存当天的浓度为39.98 ng/L,保存期内缓慢上升,35 d末浓度为49.83 ng/L.结论:随着保存期的延长,pRBC上清中生长因子类物质似乎呈现明显的增长趋势,而RANTES/CCL5和TNF-α在新鲜pRBC上清中即保持有较高的浓度,且随着保存时间的延长蓄积浓度未见有明显增高,看来同保存期的延长无明显相关.
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白细胞去除对悬浮红细胞上清中肿瘤相关因子蓄积改变及其对肿瘤细胞体外增殖影响的研究
目的:本研究探讨悬浮红细胞(pRBC)储存前白细胞滤除是否会降低pRBC上清中肿瘤相关细胞因子的蓄积浓度,以及是否会抑制pRBC上清对HepG2肝癌肿瘤细胞的体外增殖.方法:将来自相同献血员捐献的同1次全血制备成的pRBC均分成为2组,其中一组储存前滤除白细胞,另一组未滤除白细胞.两组pRBC置于2℃-6℃冰箱,在保存第0d和35 d以1 006×g离心10 min并留取上清.采用ELISA方法测定正常T细胞的表达和分泌因子(RANTES/CCL5)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在pRBC上清中的浓度.体外培养HepG2肝癌细胞并观察其贴壁,加入保存第35天的两组pRBC上清,与HepG2细胞共同孵育48 h,并用MTT法测定HepG2细胞的体外增殖程度.结果:随着保存时间的延长,两组pRBC上清中5种细胞因子均有不同程度的浓度蓄积,即在35 d保存期末的浓度高于0d;其中VEGF的浓度蓄积变化有统计学差异,在非去白细胞组35 d保存期末的浓度升高了549.61±299.43 pg/ml,明显高于去白细胞组95.46±110.87 pg/ml (P＜0.05).体外HepG2肿瘤细胞增殖的MTT实验数据表明,保存35 d的非去白细胞pRBC上清孵育组的OD值为0.49 (95％ CI,0.43-0.55),明显高于去白细胞组的0.40(95％ CI,0.38-0.42) (P ＜0.05),即去白细胞组pRBC上清可明显降低体外肿瘤细胞增殖.结论:储存前白细胞去除,通过去除pRBC中白膜层中的血小板,降低血小板源性生长因子特别是VEGF的蓄积,有可能降低pRBC上清对体外HepG2细胞增殖的正向作用.
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生长因子刺激的间充质干细胞释放具有很强促血管新生功能的外泌体
目的:探讨脐带间充质干细胞(MSC)经红细胞生成素(EPO)和血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激所释放的外泌体促血管新生的活性变化.方法:接种人脐带MSC,贴壁过夜后换用含EPO (1 U/ml)和/或PDGF-BB(50 ng/ml)的α-MEM培养,72 h后应用超高速离心法收集培养上清中外泌体,流式细胞术测定外泌体的表面分子以确定其来源,透射电子显微镜观察其形状及大小.将不同来源的外泌体(10μg/ml)加入脐静脉内皮细胞培养体系中,应用MTT法测定细胞增殖状态,Matrigel培养技术观察网状结构形成情况,并计网状结构数量.结果:流式细胞术分析结果表明,人脐带MSC释放的微粒表达CD9、CD63和CD81,符合外泌体的表面分子特征.在透射电子显微镜下,外泌体呈囊性结构,直径为80 nm左右.未刺激组、EPO组、PDGF-BB组和EPO/PDGF-BB组外泌体蛋白含量,分别为256±124 μg/108细胞、1021±392 μg/108细胞、830±265 μg/108细胞和2207±733μg/108细胞,经EPO或/和PDGF-BB刺激后,人脐带MSC释放外泌体的数量显著增加(P＜0.01).MTT实验结果显示,经过EPO和PDGF-BB刺激的MSC释放的外泌体,可明显促进人脐带内皮细胞的体外增殖.Matrigel实验发现,未刺激组、EPO组、PDGF-BB组和EPO/PDGF-BB组每视野网状结构数量分别为2.6±0.84、4.6±1.57、4.2±0.78和6.3±1.34,在细胞生长因子处理组均显著高于未处理组(P＜0.01),而且在混合因子处理组均高于单因子处理组(P＜0.01).结论:EPO和PDGF-BB可刺激脐带MSC释放外泌体,而且这种外泌体具有更强的促血管新生功能.
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PDGF/PDGFR对血小板生成的调节作用
血小板衍生生长因子(PDGF)是重要的细胞因子,研究表明PDGF对造血干/祖细胞,巨核细胞/血小板、以及骨髓微环境的血小板生成素(TPO)合成都有重要的调节作用.PDGF可直接亦可通过促进其他生长因子生成如GM-CSF等促造血干/祖细胞的增殖和分化,抑制其凋亡.同时PDGF可调控TPO的生成及骨髓微环境,进而发挥对造血及血小板生成的调节作用,其机制可能为PDGF与血小板衍生生长因子受体(PDGFR)结合,启动PDGF/PDGFR信号通路,进而激活PI3K/Akt,促进相关细胞因子如C-Fos、NF-E2等的激活,抑制caspase-3的活化,从而发挥对巨核细胞的促分化和抗凋亡作用,进而调节血小板的生成.本文重点就PDGF/PDGFR对血小板生成的调节作用方面展开论述.
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PDGF-BB促粒细胞/巨核细胞生长及其作用机制的研究
目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF-BB)对体外粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)的生成作用及其对人巨核细胞株CHRF抗凋亡作用的具体机制.方法:采用血浆凝固培养法培养小鼠和人骨髓细胞CFU-GM和CFU-MK,探讨PDGF-BB对两者CFU-GM、CFU-MK形成能力的影响.通过AnnexinV/PI双染、活性Caspase-3表达及JC-1线粒体膜势能流式细胞术检测研究PDGF-BB对人巨核细胞株CHRF的抗凋亡作用机制.结果:PDGF-BB 0-100 ng/ml能够促进小鼠/人CFU-GM和CFU-MK的增殖并呈剂量依赖性,其中50 ng/ml作用为明显(P＜0.01).流式细胞术检测结果表明,PDGF-BB通过线粒体及Caspase-3通路对人巨核细胞株CHRF发挥抗凋亡作用(P＜0.05).结论:PDGF-BB能够促进体外小鼠和人粒-单核系及巨核系造血生成,且能通过线粒体途径和Caspase-3通路对巨核细胞发挥抗凋亡作用.
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PDGF、bFGF和EGF在气道平滑肌细胞增殖、迁移以及表型转换中作用的研究
目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对人气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移和表型转换的作用.方法 体外培养人ASMCs,给以PDGF、bFGF和EGF干预,采用BrdU掺入法和细胞计数检测细胞的增殖;Boyden小室法检测细胞的迁移;半定量逆转录-聚合酶链反应(sqRT-PCR)检测平滑肌α肌动蛋白(sm-α-actin)和肌球蛋白重链(sm-MHC)mRNA表达;Western blot检测sm-α-actin和sm-MHC蛋白的表达.结果 细胞分裂指数PDGF、bFGF和EGF干预后与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).细胞计数PDGF、bFGF和EGF干预后与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).迁移细胞数PDGF、bFGF和EGF十预后与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).细胞内sm-α-actin mRNA表达量PDGF、bFGF和EGF干预后与对照组比较,PDGF下预后明显增高,而bFGF和EGF干预后明显降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).细胞内sm-MHC mRNA表达量PDGF、bFGF和EGF干预后与对照组比较,PDGF干预后明显增高,而bFGF和EGF干预后明显降低,筹异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).细胞内sm-α-actin蛋白表达量bFGF和EGF干预后与对照组比较,PDGF干预后明显增高,而bFGF和EGF干预后明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).细胞内sm-MHC蛋白表达量PDGF、bFGF和EGF干预后与对照组比较,PDGF干预后明显增高,而bFGF和EGF干预后明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 PDGF、bFGF和EGF在体外可以直接诱导ASMCs的增殖和迁移,同时,bFGF和EGF导致ASMCs收缩表现型的表达降低,而PDGF则使其表达增高.
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靶向性血小板衍生生长因子siRNA对肝星状细胞增殖的影响
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)降低血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)基因对肝星状细胞(HSCs)增殖与细胞外基质表达的影响.方法 构建PDGF-B 靶向siRNA重组表达质粒pSilencer3.l-Hlhygro-PDGF-B siRNA,将重组质粒转染HSCs细胞,噻唑蓝(MTT)法测定转染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的增殖抑制率;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫印迹检测转染后36 h HSCs细胞PDGF-B表达.放免法检测HSCs细胞株上清液中透明质酸和Ⅲ型前胶原的表达.结果 经酶切鉴定和测序结果证实PDGF-B靶向siRNA重组表达载体构建成功,转染重组质粒36 h后,PDGF-B siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3干预组的HSCs增殖抑制率明显高于对照质粒转染组(34.04%、14.89%、25.53% VS 3.19%;均 P<0.01～0.05);RT-PCR和免疫印迹显示:各siRNA表达质粒阳性HSCs细胞PDGF-B mRNA和蛋白表达明显降低,与空脂质体组及对照质粒组比较,差异具有统计学意义(均P<0.05),放免法显示:siRNAs干预组HSCs细胞透明质酸和Ⅲ型前胶原表达明显降低,与空脂质体组及对照质粒组比较,差异具有统计学意义(均P<0.05).结论 靶向PDGF-B链的siRNA可降低HSCs的PDGF-B基因表达,具有抑制HSCs增殖和分泌细胞外基质的能力.
