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血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究
目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径.方法体外培养心肌成纤维细胞(CFB),分别加入不同浓度Ang Ⅱ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein),测定细胞3H-TdR和3H-Leu掺入率.结果 Ang Ⅱ浓度依赖性促进CFB的3H-TdR和3H-Leu掺入率,洛沙坦可完全抑制该效应,Genistein部分抑制该效应.结论外源性AngⅡ通过CFB的AT1R 对该细胞产生增殖反应,作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导.
关键词： 血管紧张素Ⅱ 心肌成纤维细胞 洛沙坦 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 自发性高血压大鼠 -
槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素(quercetin)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(SMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.方法:采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85～180 kD明显.结论:槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达.
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细胞学标本表皮生长因子受体基因突变检测的规范化流程
目的 探讨细胞学标本表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的规范化流程.方法 收集北京6家医院287例临床怀疑肺癌的细胞学标本,应用设计的规范化检测流程检测细胞学标本中EGFR基因突变状态.选择40例非小细胞肺癌(NSCLC)患者富于肿瘤细胞胸水标本,比较同一标本采用石蜡包埋和细胞学甩片中刮取癌细胞同时检测EGFR突变的一致性,比较直接测序(Seq)法及扩增受阻突变系统(ARMS)方法检测EGFR基因突变状态的差异.对应用吉非替尼治疗的患者分析其基因突变状态与疗效的关系.结果 287例怀疑肺癌的细胞学标本中,发现肿瘤细胞236例(82.2％,236/287),其中寡肿瘤细胞标本31例(13.1％,31/236),富于肿瘤细胞学标本205例(86.9％,205/236).富于肿瘤细胞学标本中,180例(87.8％,180/205)诊断为NSCLC.Seq法检测富于肿瘤细胞NSCLC标本EGFR基因突变率为27.8％ (50/180),腺癌标本为28.2％ (50/177).ARMS方法检测富于肿瘤细胞NSCLC标本EGFR基因突变率为45.6％ (82/180),腺癌标本为46.3％(82/177).寡肿瘤细胞标本ARMS方法检测EGFR突变率为38.7％(12/31),与富于肿瘤细胞标本EGFR突变率差异无统计学意义(P=0.12).40例富于癌细胞胸水标本中,ARMS检测石蜡包埋细胞学标本和细胞学甩片刮取癌细胞标本的EGFR基因突变率均为37.5％ (15/40),一致率为100％.吉非替尼治疗ARMS(+)组和ARMS(-)组患者的无进展生存时间(PFS)分别为12个月和2个月(P ＜0.001),总生存时间(OS)分别为19个月和7个月(P=0.003).吉非替尼治疗Seq(+)组和Seq(-)组患者的PFS分别为12个月和7个月(P =0.227),OS分别为20个月和15个月(P=0.510).吉非替尼治疗Seq(+)ARMS(+)组和Seq(-)ARMS(+)组患者的PFS分别为12个月和10个月(P =0.354),OS分别为20个月和17个月(P=0.334).结论 细胞学标本EGFR基因突变检测的流程具有可靠性和可行性,病理质控和免疫组化染色在细胞学标本EGFR基因突变检测流程中作用重要,细胞学标本EGFR基因突变检测需采用高灵敏度的检测方法.
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酪氨酸蛋白激酶抑制剂--Gleevec的抗肿瘤作用
Gleevec(STI571,CGP57148B,imatinib mesylate)是一种能够特异地抑制酪氨酸激酶的抗癌新药,已通过美国食品药物管理局(FDA),用于治疗慢性髓细胞性白血病(chronic myeloid ormyelogenous leukemia,CML)和胃肠道肿瘤(gastrointestinal stomaltumor,GIST).Gleevec以2一苯胺嘧啶(2-phenylamino-pyrimidine)为先导化合物,其分子式是C29H3N7O·CH4SO3,相对分子量为589.7,通过竞争结合ATP位点,特异地阻止酪氨酸激酶受体自身磷酸化,影响细胞信号转导,抑制肿瘤细胞的增殖[1].本文在回顾传统治疗方法的基础上,介绍了Gleevec以bcr-abl融合基因编码的酪氨酸激酶受体为靶点,治疗慢性髓细胞性白血病等肿瘤的效果评价,进一步阐述了Gleevec可能引起的细胞信号转导机制和细胞周期的改变.
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甲状腺癌靶向治疗进展
大多数甲状腺癌可通过手术、131I内放射及促甲状腺激素(TSH)抑制治疗治愈,但对进展期髓样癌,局部晚期放射碘难治性甲状腺癌目前仍缺少有效治疗方法.对于这类病人使用分子靶向药物是近年甲状腺癌治疗的一大进步,并显示出良好的应用前景.部分分子靶向药物已被美国食品药物管理局批准上市,并陆续写入2014年版美国国家癌症综合网络(NCCN)及美国甲状腺协会(ATA)等的甲状腺癌治疗指南,成为甲状腺癌治疗的第4种途径[1-7].
关键词： 甲状腺癌 靶向治疗 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 -
aFGF和Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性及[Ca2+]i的影响
目的:探讨aFGF及TPK抑制剂Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性及游离Ca2+浓度的影响.方法:用不同浓度的aFGF和Genistein诱导AGZY-83A细胞,(γ-P32)-ATP标记的Histone I为底物,液体闪烁测定PKC活性;Fura-2/AM负载荧光光度法测定细胞内游离Ca2+浓度.结果:aFGF诱导后,细胞内PKC活性及Ca2+浓度升高,且与aFGF呈剂量依赖效应.Genistein抑制细胞内PKC活性及Ca2+浓度,也呈剂量依赖效应.Genistein对aFGF诱导的PKC活性抑制更显著.结论:进一步证明PKC和Ca2+确是TPK的下游信号分子.
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抑制小窝蛋白－1磷酸化对机械通气所致肺损伤的保护作用
目的：研究抑制小窝蛋白－1（ Cav－1）磷酸化对机械通气所致肺损伤的效应。方法50只健康雄性SD大鼠随机分为A、B1、B2、C1及C2五组（每组10只）。 A组为正常对照组，仅做气管切开；B1组为1 h大潮气量机械通气组；B2组为2 h大潮气量机械通气组；C1组为1 h大潮气量机械通气＋酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP2（5 mg／kg）组；C2组为2 h大潮气量机械通气＋酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP2（5 mg／kg）组。 C1和C2组在机械通气前1 h腹腔注射抑制剂。各组大鼠均连续监测平均动脉压（ MAP ）。光镜观察肺组织病理改变，并做弥漫性肺泡损伤系统（ diffuse alveolar damage， DAD）评分，比色法测定髓过氧化物酶（ myeloperoxidase， MPO）活性，计算肺湿／干比（W／D），蛋白印迹检测磷酸化小窝蛋白－1[P －Cav －1（Y14）]和小窝蛋白－1（Cav－1）表达情况，免疫组织化学染色法检测肺组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和白细胞介素－1受体相关激酶4（IRAK4）表达情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠肺泡灌洗液TNF－α水平，伊文思蓝（ Evans blue）法检测肺血管通透性。结果 B1、B2、C1、C2组病理损伤评分、肺湿／干比、Cav－1、eNOS、IRAK4表达量、TNF－α水平、Evans blue渗出量、MPO活性、MAP及血气分析与A组比较差异均有统计学意义（均P＜0．05）；与A组比较，B1、B2、C1组P－Cav－1表达升高（均P＜0.05），而C2组P－Cav－1（Y14）表达量差异无统计学意义（P＞0．05）；C1组与B1组比较，C2组与B2组比较，病理损伤评分、肺湿／干比，P－Cav－1（Y14）、eNOS、IRAK4表达量、TNF－α的水平、Evans blue含量、MPO活性、MAP、及血气分析差异均有统计学意义（均P＜0.05）；C1组与B1组比较，C2组与B2组比较，Cav－1表达量差异无统计学意义（均P＞0．05）。结论抑制Cav－1磷酸化能够降低肺毛细血管通透性，减少炎症因子和炎症细胞的迁移，从而对大鼠机械通气所致肺损伤起到保护作用。
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2,5-MC抑制支架植入术后内膜增殖的实验研究
目的评估酪氨酸蛋白激酶抑制剂2,5-MC抑制支架植入术后内膜增殖的效果.方法将含2,5-MC的F-127凝胶包裹于新西兰兔支架植入段颈动脉腔外,对侧包裹空白F-127凝胶作对照.通过RT-PCR、免疫组化染色检测核内癌基因c-myc和细胞核抗原Ki67的表达;通过三色染色观察内膜增厚情况,检测2,5-MC抑制内膜增殖的效果.结果2,5-MC治疗组核内癌基因c-myc mRNA和Ki67抗原的表达均显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).组织学检测显示治疗组内膜增生厚度明显低于对照组;植入术后3个月,治疗组内膜/中膜比为0.92±0.10,血管腔狭窄率(51.0±5.58)%;对照组内膜/中膜比为1.30±0.39,血管腔狭窄率(73.01±5.94)%,二组比较有显著差异(P＜0.05,P＜0.01).结论腔外包裹酪氨酸蛋白激酶抑制剂2,5-MC具有抑制支架植入术后内膜增殖的效果.
关键词： 支架 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 内膜增殖 -
Genistein对大鼠垂体前叶细胞增殖的抑制作用
应用细胞培养、 ～3H-TdR掺入、 流式细胞和电镜技术, 观察酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂genistein对正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20增殖的影响, 并探讨其可能的机制。结果显示: genistein作用48 h后可明显抑制正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20增殖。流式细胞仪检测发现, 50 和100 μmol/L genistein可将AtT-20细胞阻断于G0/G1期及G2/M期, 并出现凋亡峰, 凋亡率分别达19.9％和36.4%。电镜照片显示有凋亡细胞。结果表明, PTK抑制剂可以明显抑制正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20的增殖, 并诱导细胞凋亡, 说明PTK活性对细胞增殖和分化有重要作用。
关键词： genistein 垂体 增殖 凋亡 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 -
酪氨酸蛋白激酶抑制剂治疗肾脏疾病的前景
近年来，随着细胞间及细胞内信息传递的分子机制研究的深入，细胞信号传导通路在细胞生理、病理过程中所起的作用日益被人们所认识。它不仅调节细胞的分裂、增生、分化、死亡等正常生理过程，异常的信号传导通路还导致许多炎症性疾病和增生性疾病如肿瘤、皮肤病等［1］。针对这一发病机制，人们提出了“信号传导治疗”（signal transduction therapy）的概念，即通过抑制或阻断异常信号传导通路中的各组成部分的功能及作用，来阻断该信号通路，以达到治疗疾病的目的。用于信号传导治疗的药物包括：
关键词： 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 信号传导 肾脏疾病 -
酪氨酸蛋白激酶抑制剂对缺氧复氧时内皮细胞连接通讯功能的影响
目的:缺氧复氧刺激能损伤内皮细胞间隙连接通讯功能,本研究观察了酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein对这种损伤的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞株ECV304分3组给予不同处理.①常氧对照组:常氧状态下培养12～18小时;②缺氧复氧组:氧浓度低于1%状态下培养12～14小时,再置于常氧状态复氧0～6小时;③genistein组:加入不同浓度genistein(2μM、10μM、50μM)后,给予缺氧复氧组相同的处理.在试验各时段应用荧光漂白回复技术对细胞间隙连接通讯功能进行分析,结果用荧光回复率表示.结果:不同浓度genistein对复氧2小时的内皮细胞荧光回复率作用不同.低浓度genistein(2μM)对荧光回复率没有作用;中、高浓度genistein(10μM、50μM)能使荧光回复率上升(P<0.05).结论:genisetein能保护缺氧复氧时内皮细胞间隙连接通讯功能.提示缺氧刺激通过酪氨酸蛋白激酶途径损伤内皮细胞的间隙连接通讯功能.
关键词： 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 内皮细胞 缺氧复氧 细胞间通讯功能 -
RG50864对血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响
为研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响,应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,用流式细胞仪分析RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA百分含量及增殖细胞核抗原的变化.结果表明:与对照组相比,RG50864处理组可显著地抑制PDGF诱导的PASMC增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数(P＜0.01),增加PASMC生长周期中的G0/G1期的DNA百分含量,抑制S期及G2M期的DNA百分含量(P＜0.01).RG50864可显著地抑制PDGF诱导的PASMC增殖细胞核抗原表达,抑制PASMC周期S期及G2M期DNA百分含量,阻止PASMC周期由G0/G1期向DNA合成的S期及G2M期转化.
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新生自发性高血压大鼠心肌细胞与成纤维细胞的相互作用
为研究自发性高血压大鼠心肌细胞与成纤维细胞在体外培养下的相互作用.收集上述细胞的24 h培养上清液作为这两种细胞的条件培养基,观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂洛沙坦或酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素对细胞3 H-TdR和3 H-Leu掺入率的影响.结果发现,心肌成纤维细胞培养基可明显促进这两种细胞的生长,该作用不能被洛沙坦抑制,而可被金雀异黄素抑制.心肌细胞培养基无促进这两种细胞生长作用.结果提示,成纤维细胞可能分泌经酪氨酸蛋白激酶介导的促生长因子,调控心肌细胞和心肌成纤维细胞的生长.
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染料木黄酮防治大鼠移植动脉硬化的实验研究
目的 探讨染料木黄酮(Genistein,GEN)对移植动脉硬化的保护作用及其机制.方法 建立Brown-Norway至Lewis大鼠腹主动脉移植模型,将受体鼠随机分为四组:1组)、(n=8):高剂量染料木黄酮组(20 mg/kg·d);2组(n=8):高低剂量结合的染料木黄酮组[20 mg/(kg·d)14 d+2 mg/(kg·d)46 d]腹腔注射60 d染料木黄酮(GEN);3组(n=5):溶剂对照组,腹腔注射溶剂二甲基亚砜(DMSO)60 d;4组(n=5):异系对照组,不给予任何处理.移植后60d取移植血管作病理组织学检查并利用算机图像分析系统测量内膜厚度;免疫组织化学检测CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润;ELISA法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)的变化.结果 病理组织学检查两实验组分别与两对照组比较,内膜增厚不明显(P＜0.001)且淋巴细胞和巨噬细胞浸润减少,免疫组织学检测CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润减少(P＜0.01);两对照组血清中VEGF表达显著高于实验1组即高剂量组(P＜0.01),但与实验2组即高低剂量结合组无明显差别.结论 染料木黄酮对移植动脉硬化有保护作用,其机制可能与减少了淋巴细胞的浸润,影响生长因子的表达有关,但其主要作用机制有待进一步研究.
关键词： 染料木黄酮 移植动脉硬化 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 植物雌激素 血管内皮生长因子 -
Lavendustin A对gp120抑制大鼠海马CA1区LTP的翻转作用
目的:为了探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂Lavendustin A(Lav A)对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120引起大鼠海马脑片CA1区的长时程增强效应(long-term potentiation,LTP)的影响.方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位EPSP,研究了Lav A对gp120引起的大鼠海马脑片CA1区突触传递和可塑性变化的影响.
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酪氨酸蛋白激酶抑制剂对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖肥大的影响
为明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR-VSMC)增殖与血小板源生长因子-AA(PDGF-AA)、PDGF-α受体表达的关系及酪氨酸蛋白激酶在其中的作用,我们在培养的血管平滑肌细胞中,采用免疫印迹(Westernblot)、3H-TdR及3H-Leu掺入等方法,观察在不同来源大鼠(SHR/Wistar)血管平滑肌细胞中,PDGF-AA、PDGF-α受体及PDGF-β受体表达的差异性;在PDGF-AA刺激下细胞的增殖、肥大反应及酪氨酸蛋白激酶抑制剂(genistein)对其的影响.结果表明:在SHR-VSMC中PDGF-AA、PDGF-α受体蛋白表达明显高于Wistar-VSMC,而PDGF-β受体蛋白表达在SHR-VSMC与Wistar-VSMC无明显差异;在不同浓度PDGF-AA(2、5、10、20)ng/mL刺激下,SHR-VSMC中PCNA表达呈剂量依赖性增高P＜0.01;加入酪氨酸激酶抑制剂,SHR-VSMC中PCNA表达呈剂量依赖性显著减少P＜0.01.在不同浓度PDGF-AA(2、5、10、20)ng/mL刺激下,SHR-VSMC中3H-Leu、3H-TdR掺入率呈剂量依赖性增强;加入酪氨酸激酶抑制剂SHR-VSMC中3H-Leu、3H-TdR掺入率显著减少.PDGF与其受体结合后,可激活受体细胞膜内的酪氨酸蛋白激酶,导致蛋白分子磷酸化的级联反应,启动MAPK、PKC等信号转导通路,调节特定基因的表达或通过改变细胞内相应蛋白质的功能状态导致细胞的增殖肥大.本实验应用酪氨酸激酶抑制剂genistein阻断酪氨酸激酶活性,证实阻断PDGF-AA所介导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖肥大,关键是阻断酪氨酸蛋白激酶的活性,酪氨酸蛋白激酶介导的信号转导在其中发挥重要作用.
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RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.方法:用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用Western Blot 方法分析RG50864对PDGF诱导的PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的定性表达.结果:RG50864(0.1μmol/L)能显著抑制PDGF诱导的PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以85～180KDa明显,当RG50864浓度达100μmol/L时,则能完全抑制磷酸化蛋白的产生,其作用呈明显的剂量效应关系.结论:RG50864能显著地抑制PDGF诱导的PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达.
关键词： 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 血小板衍生生长因子 肺动脉平滑肌细胞 -
RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响.方法:应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,用流式细胞仪分析RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA百分含量及增殖细胞核抗原的变化.结果:与对照组相比,RG50864处理组可显著地抑制PDGF诱导的PASMC增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数(P<0.001),增加PASMC生长周期中的G0/G1期的DNA百分含量,抑制S期及G2M期 DNA百分含量(P<0.01或P<0.001).结论:RG50864可显著地抑制PDGF诱导的PASMC增殖细胞核抗原表达,抑制PASMC周期S期及G2M期DNA百分含量,阻止PASMC周期由G0/G1向DNA合成的S期及G2M期转化.
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酪氨酸蛋白激酶及其抑制剂在肝星状细胞激活中的研究进展
肝纤维化(liver fibrosis)是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复过程的代偿反应,表现为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝内过量沉积.[1] .肝星状细胞(又称贮脂细胞,Ito细胞或窦周细胞,hepatic stellate cells,HSC)激活并转化为肌成纤维样细胞(myofibroblastic-like cell,MFLC)和成纤维细胞(fibroblast cell,FC)是肝纤维化发生、发展的核心环节.[2] .酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase,TPK)在HSC激活过程中细胞内信号传递方面起了重要的作用.酪氨酸蛋白激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)可能通过抑制细胞内信号传导而影响HSC激活.本文就酪氨酸蛋白激酶、酪氨酸蛋白激酶抑制剂与肝星状细胞的激活作一综述.
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金雀异黄素对肾癌细胞系GRC-1细胞生物学行为的影响
目的观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(genistein)对GRC-1细胞的体外生物学行为的影响,探讨蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂应用于肿瘤治疗的可能. 方法将细胞用金雀异黄素处理后,分别用MTT法、激光共聚焦显微镜、电子显微镜观察金雀异黄素对肿瘤细胞的体外生物学行为的影响. 结果金雀异黄素可显著抑制GRC-1细胞的增殖,使肿瘤细胞增殖停滞在G1期和G2期,并明显改变细胞的外在形态和细胞内波形蛋白的排列方式. 结论酪氨酸蛋白激酶抑制剂genisein可抑制肾肿瘤细胞的增殖(P<0.01),并改变其细胞骨架的排布方式. 酪氨酸激酶抑制剂有望开发成为有效的抗恶性肾肿瘤的药物.
关键词： 金雀异黄素 肾肿瘤 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 波形蛋白
