首页 > 文献资料
-
异甘草素对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增生的抑制作用研究
目的 研究异甘草素对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增生的影响及作用机制.方法 2017年3—6月,通过 α-actin免疫组化染色对原代大鼠PASMCs进行鉴定,并取3～7代用于细胞实验;将细胞分成常氧组、低氧组、低氧+10μmol/L异甘草素组、低氧+25μmol/L异甘草素组、低氧+50μmol/L异甘草素组、低氧+100μmol/L异甘草素组,在常氧(21％O2)或低氧(3％O2)条件下培养24 h;CCK-8染色法检测异甘草素对低氧诱导的PASMCs增生的影响;DCFH-DA荧光探针检测异甘草素对低氧诱导的PASMCs活性氧(ROS)产生的影响;qRT-PCR检测异甘草素对低氧诱导的PASMCs NOX4 mRNA表达的影响.结果 低氧组PASMCs的吸光度(OD)值(0.86±0.05)显著高于常氧组(0.57±0.02),低氧+25μmol/L异甘草素组OD值(0.75±0.02)较低氧组显著降低,而且随着给予异甘草素浓度的增加OD值呈明显下降趋势;DCFH-DA结果显示,低氧组PASMCs ROS的产生(13.36±0.36)％显著高于常氧组(3.05±0.18)％,低氧+25μmol/L异甘草素组ROS的产生(9.79±0.26)％较低氧组显著降低,而且随着给予异甘草素浓度的增加ROS的产生呈明显下降趋势;qRT-PCR结果显示,低氧组PASMCs的NOX4 mRNA表达量是常氧组的2.15倍,低氧+25μmol/L异甘草素组NOX4 mRNA表达量较低氧组显著降低,而且随着给予异甘草素浓度的增加NOX4 mRNA表达量呈明显下降趋势.结论 异甘草素抑制低氧诱导的PASMCs增生,可能与抑制低氧诱导的PASMCs ROS的产生有关.
-
补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响
目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制.方法:应用TGF-β1/BMP4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖.细胞分为正常组(10％正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0 μg·L-1 BMP-4的10％正常大鼠血清),4％补肺益肾方含药血清(含7.5 μg·L-1TGF-β1与5.0 μg·L-1 BMP-4,6％正常大鼠血清及4％补肺益肾大鼠血清),6％补肺益肾方含药血清(含7.5 μg·L-1TGF-β1与5.0 μg·L-1 BMP-4,4％正常大鼠血清及6％补肺益肾大鼠血清)及8％补肺益肾方含药血清组(含7.5 μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1 BMP-4,2％正常大鼠血清及8％补肺益肾大鼠血清).24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达.结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P＜0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8％浓度显著抑制细胞增殖(P＜0.01).TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P＜0.05),8％补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP4诱导的p-Smad2/3表达(P＜0.05).TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P＜0.01),8％补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P＜0.05).结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径.
-
益肺活血颗粒对缺氧培养大鼠肺动脉平滑肌细胞NO,iNOS的影响
目的:观察益肺活血颗粒对缺氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)一氧化氮(NO)产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响.方法:采用组织块贴壁法培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组,缺氧组,缺氧+益肺活血颗粒组(7 5,1.5,0 15 g·L-1).利用硝酸还原酶法测定各组PASMCsNO的产生,RT-PCR测定iNOS mRNA的水平,免疫组化法测定胞内iNOS蛋白的表达量.结果:与单纯常氧组相比,缺氧组PASMCs iNOS转录和翻译增强,NO生成显著升高(P＜0 05)；且与单纯缺氧组相比,益肺活血颗粒组随着药物浓度的增加,可进一步提高PASMCs iNOS的活性和NO的生成(P＜0 05).结论:益肺活血颗粒可以促进缺氧条件下PASMCs NO产生及iNOS活性和表达,其可能是通过提高iNOS基因的转录和蛋白的表达来实现,从而抑制PASMCs的增殖及介导血管的舒张,在缺氧性肺动脉高压方面有着独特的疗效.
-
葛根素通过线粒体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡
目的:探讨线粒体途径在葛根素(PUE)诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用.方法:葛根素高、中、低剂量(1.5×104,1.5×10-4,1.5×10-5 mol·L-1)干预体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),观察线粒体膜电位的变化,Western Blot检测凋亡相关基因Caspase-9,Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:葛根素加药组与正常组相比线粒体膜电位明显降低,葛根素可使Caspase-9的蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达升高,葛根素对PASMC的诱导作用还具有浓度依赖性.结论:葛根素可通过线粒体途径诱导PASMC凋亡.
-
牛磺酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响
目的:观察Tau对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡作用的影响,并探讨其机制是否通过死亡受体途径.方法:取Wistar雄性大鼠肺动脉平滑肌细胞培养；分为正常组(control)、凋亡组(SD)、给药组(Taurine高、中、低剂量).用吖啶橙(A0)法,在荧光显微镜下观察6孔板细胞核形态学变化；用Western-blot法分别测定Bax,Bcl-2,Procaspase-3,Fas的蛋白表达变化.结果:吖啶橙法3组结果可以看出,凋亡组和Tau给药组的细胞核皱缩,形成凋亡小体.Western-blot法测定显示Tau升高Bax和Fas蛋白表达,降低Procapase-3和Bcl-2的表达.结论:Tau可能通过死亡受体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡.
-
芪白平肺胶囊含药血清介导NO对肺动脉平滑肌细胞KATP通道蛋白表达的影响
观察不同低氧时段下,原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs) ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP通道)蛋白的表达,探讨芪白平肺胶囊含药血清(简称QBPF)调控PASMCs KATP通道蛋白表达与一氧化氮(nitric oxide,NO)的相关性.清洁级SD大鼠给予芪白平肺胶囊颗粒连续灌胃10 d,制备芪白平肺含药血清.采用组织块贴壁法,体外培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞;Western blot检测不同低氧时间下Kir6.1和SUR2B的表达,以及在一氧化氮合酶抑制剂——Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)和KATP通道抑制剂——格列本脲(glyburide,GLYB)分别干预下,QBPF对其表达的影响.低氧6h后Kir6.1和SUR2B蛋白表达开始上调,在低氧24 h达到高峰,低氧48,72 h的蛋白表达出现不同程度下调.在低氧24h条件下,QBPF能进一步上调KATP通道Kir6.1和SUR2B蛋白表达,且这种上调作用能分别被KATP通道阻断剂GLYB和NO特异性阻断剂L-NAME所阻断,提示芪白平肺胶囊具有明确的KATP通道开放作用,其机制可能通过介导NO相关途径上调KATP通道蛋白表达,参与肺血管舒张作用,缓解COPD的发生发展.
-
内皮素-1诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达
为研究内皮素-1(ET-1)对培养的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,应用贴块法培养人胎儿肺动脉平滑肌细胞,应用免疫细胞化学染色、原位杂交方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA的表达.结果显示,加入含10-8mol/L ET-1的培养液培养48h和72h后,HPASMC Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白表达明显增强.提示ET-1能够诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,其调控机制之一是在转录水平上增强了Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达.
-
低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞血红素加氧酶-1 mRNA 表达及细胞增殖的影响
探讨血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的表达及HO-1/一氧化碳(HO-1/CO)体系对PASMC增殖的影响.应用荧光定量RT-PCR法测定HO-1 mRNA表达.用双波长法检测碳氧血红蛋白(HbCO)吸光值.应用免疫细胞化学方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达.发现HO-1 mRNA在常氧大鼠PASMC有低水平的表达,低氧12h HO-1 mRNA水平是常氧时的1.5倍,且HbCO产量随之显著增高(P＜0.01);低氧24h HO-1 mRNA表达呈回落趋势,HbCO产量亦有所减少,但两者仍高于常氧水平.低氧12h及24h PASMC PCNA核阳性反应颗粒表达较常氧时增强(P＜0.01,P＜0.001),使用HO抑制剂ZnPP-9,其PCNA核阳性反应颗粒表达较单纯低氧时增加更多(P＜0.001,P＜0.01).低氧组核NF-κB阳性染色较常氧组增强(P＜0.001),使用ZnPP-9,其表达则比低氧时更多(P＜0.01).低氧通过诱导大鼠PASMC的HO-1 mRNA基因表达,上调HO/CO体系活性,使内源性CO含量增高,抑制PASMC增殖;NF-κB参与了PASMC增殖的调控机制.
-
黏着斑激酶促进人肺动脉平滑肌细胞增殖
目的 探讨黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是否参与人肺血管平滑肌细胞增殖.方法 将纤黏连蛋白(fibronectin,FN)预处理的培养人肺血管平滑肌细胞进行分组,采用不同浓度的FAK正义寡核苷酸转染,应用免疫沉淀及免疫印迹方法测定FAK的活性及蛋白质表达,并利用MTr比色法及3H-TdR掺入法测定细胞增殖情况.结果 FAK正义寡核苷酸转染后,FAK的活性及蛋白质表达量均随着剂量增加而增加,呈浓度和时间依赖性地促进细胞增殖及3H-TdR掺入.结论 FAK促进人肺动脉平滑肌细胞增殖.
-
低氧抑制猪肺动脉平滑肌细胞MMP-2和MMP-9的表达
目的探讨低氧对猪肺动脉平滑肌细胞(PASMC)分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响.方法采用酶谱法测定PASMC培养基中MMP-2和MMP-9的酶活性,免疫印迹法检测培养基中MMP-2和MMP-9的蛋白表达,免疫组化法测定细胞原位MMP-2和MMP-9的蛋白表达,RT-PCR法检测mRNA的表达.结果低氧后PASMC 分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降;MMP-9酶活性、细胞外蛋白表达量下降,而细胞内蛋白表达无变化.结论低氧可抑制PASMC分泌 MMP-2和MMP-9的酶活性,其机制可能是低氧影响PASMC中 MMP-2基因的转录、影响MMP-9蛋白表达后的分泌与活化,导致MMP-2和MMP-9酶活性的改变.
-
IL-6／IL-21信号通路在肺动脉高压的治病过程中起重要作用
肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension ，PAH）是一种发生在远端中小型肺动脉的疾病，主要与动脉肌化、内膜增厚和丛状损伤的形成有关。近年来，炎症和自身免疫也被认为是 PAH 病理过程中的重要因素。T 细胞、B 细胞、巨噬细胞等炎症细胞在进展型 PAH 的丛状损伤中有浸润。因此，这些细胞分泌的炎性因子可能与肺动脉内皮细胞（PAEC）和肺动脉平滑肌细胞（PASMC）的过度增殖有关。
-
核因子κB途径介导C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的促炎作用
目的 观察了C反应蛋白(CRP)对培养的肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)炎性因子白介素-6(IL-6)的影响,探讨CRP对肺血管疾病的可能作用.方法 体外培养hPASMCs,以不同质量浓度的CRP(5～200μg/mL)刺激不同时间(0,3,6,9,12,18,24 h).核因子κB(NF-κB)的活性以非变性凝胶电泳迁移率(EMSA)方法进行分析.IL-6 mRNA和蛋白水平以Real-time PCR和ELISA方法进行检测.结果 CRP以浓度依赖的方式促进hPASMCs IL-6的合成.与对照组相比,CRP 200 μg/mL使IL-6的合成增加2.8倍.CRP显著诱导NF-κB在bPASMCs的激活.CRP对hPASMCs的促炎作用受到细胞表面FCγⅡa受体特异性抗体的抑制.结论 CRP促进体外培养的hPASMCs对IL-6的表达,这一作用是通过细胞表而FcγⅡa受体亚型和NF-κB的核内转位激活而介导的.提示CRP在肺动脉高压的发病中有重要作用.
-
脂联素基因修饰的脂肪干细胞对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠的影响及机制
目的：观察脂肪干细胞（ADSC）移植和脂联素（APN）基因修饰的ADSC移植对野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PAH）大鼠心肺结构、功能、代谢模式的影响及其机制。
方法：将过表达APN的慢病毒载体导入ADSC，ELISA测ADSC上清液APN含量，激光共聚焦检测其在肺组织的定位。80只SD大鼠，随机分为正常组（NC组）、PAH组、ADSC组、导入空载慢病毒的ASDC（ADSC-V）组和APN基因修饰的ASDC（ADSC-APN）组。PAH、ADSC、ADSC-V和ADSC-APN组给予腹腔注射MCT 40 mg/kg。14 d后，3个治疗组分别经颈外静脉注1×106/ml的ADSC、ADSC-V和ADSC-APN。移植3 W后，测平均肺动脉压（mPAP）、右心室肥厚指数（RVHI），HE染色观察并计算肺小动脉管壁厚度指数（WT%）及管壁面积指数（WA%），离体血管环张力评估肺小动脉功能，超声心动图测右心功能。核磁共振（NMR）测血中代谢物浓度并行PLS-DA分析。用BMP抑制剂、AMPK抑制剂干预PAH大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC），Western blot测BMP2、Smad1/5/8、AMPK蛋白的表达，CCK-8检测细胞增殖。 -
17β-雌二醇/微小核糖核酸-21信号通路抑制低氧性肺动脉高压肺血管重构的机制研究
目的:探讨17β-雌二醇(E2)对低氧性肺动脉高压(HPH)的保护作用是否通过下调微小核糖核酸(miRNA)-21 (miR-21)表达进而抑制肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖而实现.方法:(1)动物水平:32只健康雌性SD大鼠行卵巢切除术后随机分入常氧组、常氧+E2组、低氧组、低氧+E2组,每组8只.两个E2干预组大鼠每日皮下注射E2 20 μg/kg,余组大鼠皮下注射等量生理盐水.两个低氧组大鼠在低氧环境下饲养,两个常氧组大鼠呼吸正常空气,连续饲养8周建立HPH模型.观察各组大鼠肺血管形态、平均肺动脉压(mPAP)及右心室肥厚指数(RVHI)变化,用实时聚合酶链式反应(PCR)及免疫印迹法测定肺动脉中miR-21、增殖细胞核抗体(PCNA)表达变化.(2)细胞水平:将体外培养的人PASMC随机分为3组:常氧组、低氧组、低氧+E2组,24 h后用四甲基偶氮唑蓝比色法检测各组细胞增殖情况,用实时PCR及免疫印迹法检测细胞中miR-21和PCNA表达变化.结果:(1)动物水平:低氧组较常氧组肺小动脉厚度和RVHI均明显增加,mPAP升高,肺动脉中miR-21及PCNA表达明显上升(P均<0.01);常氧+E2组上述指标较常氧组无明显变化(P均>0.05);低氧+E2组上述三项指标明显低于低氧组(P均<0.01).(2)细胞水平:与常氧组相比,低氧组细胞增殖明显,miR-21和PCNA表达明显上升(P均<0.01);与低氧组相比,低氧+E2组细胞增殖程度明显减轻,miR-21和PCNA表达明显下降(P均<0.01).结论:E2能够改善HPH大鼠肺血管重构、肺动脉压力、右心室肥厚程度,其保护作用可能是通过下调miR-21和PCNA表达从而抑制PASMC增殖而实现的.
-
新型ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的观察埃他卡林(IPT)对内皮素1(ET-1)诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的作用,并探讨其作用机制.方法 ET-1诱导培养的兔PASMC增殖,氚-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法检测DNA合成;流式细胞仪技术检测细胞周期.结果 ET-1(10-7 mol/L)使PASMC [3H]-TdR掺入量增加146.8%,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);在相同条件下,加入ET-1的同时,分别向培养基中加入IPT 10-7、10-6、10-5 mol/L,细胞[3H]-TdR掺入量分别下降(19.8±4.6)%、(41.2±9.5)%、(54.7±10.1)%,与ET-1组比较差异有显著性(P＜0.01);培养基中加入ET-1(10-7 mol/L)、IPT(10-5 mol/L)前30 min,预先加入格列本脲10-7 、10-6 、10-5 mol/L,其[3H]-TdR掺入量分别增加(49.1±8.7)%、(68.6±15.1)%、(110.1±26.8)%.流式细胞仪细胞周期检测显示ET-1(10-7 mol/L)刺激PASMC由静止期(G0/G1期)进入DNA合成期(S期)和有丝分裂期(G2/M期),其G0/G1期比例降低(22.04±1.07)%,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),而S期与G2/M期之和增加(210.1±37.9)%,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);相同条件下,加入ET-1(10-7 mol/L)的同时,分别加入IPT 10-7、10-6、10-5 mol/L作用24 h后,PASMC的S期和G2/M期细胞比例之和分别降低(36.6±5.7)%、(42.6±4.9)%、(66.3±4.7)%,与ET-1组比较差异有显著性(P＜0.01),G0/G1期细胞比例则分别增高(14.4±3.0)%、(17.9±2.6)%、(27.9±3.2)%,与ET-1组比较差异有显著性(P＜0.01).结论 IPT通过激活ATP敏感性钾(KATP)通道,浓度依赖性地抑制ET-1诱导培养PASMC增殖.
-
大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞对血小板源性生长因子的反应性及其意义
目的 分离培养并鉴定大鼠不同分支级别肺动脉平滑肌细胞(PASMC),观察其对血小板源性生长因子(PDGF)反应性的差异,探讨相同刺激因素下,不同级别肺血管病理改变不同的细胞学机制.方法 分离SD大鼠肺动脉并按解剖学分支分为3组:大动脉组,包括肺动脉干及肺内一级主干;中动脉组,指肺内主干二、三级分支;小动脉组,包括肺内动脉四级及以上分支.分离培养不同分支PASMC并用平滑肌细胞抗体进行免疫荧光染色鉴定.给予PDGF刺激,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Western blot方法测定增殖细胞核抗原表达水平变化以反映细胞增殖能力;伤口愈合实验检测细胞迁移能力的变化.结果 不同分支PASMC在光学显微镜下观察无明显差别;免疫荧光染色结果显示,三种常用的平滑肌细胞标志物即平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙结合蛋白(S100A4)和平滑肌调宁蛋白(calponin)抗体染色均呈阳性,各组间荧光强度无明显差异.正常培养条件下3组细胞增殖率分别为(137.0±12.1)％、(166.1±23.6)％、(156.8±2.5)％,Western blot检测PCNA表达灰度值分别为(0.41±0.10)、(0.55±0.18)和(0.48±0.28),迁移到空白区域的细胞个数分别为(49±14)、(68±13)和(71±7),组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).给予10 μg/LPDGF干预48 h后,中、小动脉组PASMC的增殖率分别为(215.7±17.8)％、(195.2±6.6)％,均高于大动脉组[(167.0±14.4)％,均P＜0.01],干预后3组细胞内PCNA蛋白表达灰度值分别为(0.93±0.11)、(1.21 ±0.14)和(0.62±0.03),迁移到空白区域的细胞个数分别为(194 ±46)、(171 ±16)和(68±21),中、小肺动脉组与大动脉组相比差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 尽管不同分支PASMC通常无明显差异,但其增殖与迁移能力的改变在PDGF刺激下根据血管级别而有所不同.提示在相同病理条件下,不同级别肺动脉的病理改变可能与平滑肌细胞本身的反应性不同有关.
-
全反式维甲酸对人肺动脉平滑肌细胞表型和迁移的影响及可能机制
目的探讨全反式维甲酸(atRA)对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型和迁移的影响及可能机制.方法培养的人PASMC株随机分成8组:对照组(A组)、溶媒组(B组)、10%胎牛血清干预组(C组)、atRA干预组分别加入浓度为0.001 μmol/L (D组)、0.01 μmol/L(E组)、0.1 μmol/L(F组)、1 μmol/L(G组)、10 μmol/L (H)组的atRA,干预24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞JWA基因mRNA表达,用改良Boyden小室法检测各组迁移细胞数,用RT-PCR法及免疫细胞化学法检测各组细胞内平滑肌细胞α肌动蛋白(SM-α-actin) mRNA及蛋白表达.结果人PASMC内JWA mRNA表达量A、B、C组分别为0.125±0.014、0.164±0.018、0.164±0.006,3组间比较差异无统计学意义(P均＞0.05);而D组(0.326±0.018)、E组(0.440±0.033)、F组(0.460±0.040)、G组(0.589±0.024)、H组(0.821±0.050)分别与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);迁移细胞数C组为(30.4±7.4)个/高倍视野(HP),与A组[(7.2±1.9)个/HP]、B组(6.8±2.3)个/HP]比较差异有统计学意义(P均＜0.01);而D组[(21.8±2.9)个/HP]、E组[(17.2±2.3)个/HP]、F组[(14.4±3.5)个/HP]、G组[(12.6±3.4)个/HP]、H组[(8.8±2.4)个/HP]与C组比较差异有统计学意义(P均＜0.01);但G、H组与A、B组比较差异无统计学意义(P均＞0.05);细胞内SM-α-actin 蛋白表达量C组为0.219±0.018,与A组(0.319±0.011)、B组(0.325±0.005)比较差异均有统计学意义(P均＜0.01); E组 (0.328±0.016)、F组(0.386±0.025)、G组(0.442±0.017)、H组(0.501±0.018)与C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);而F、G、H组与A、B组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01); 细胞内SM-α-actin mRNA表达量C组为0.144±0.009, 与A组 (0.299±0.023)、B组(0.296±0.041)比较差异有统计学意义(P均＜0.01);而D组(0.487±0.014)、E组(0.501±0.020)、F组(0.611±0.018)、G组(0.774±0.013)、H组(0.851±0.026)与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 atRA能诱导人PASMCs内JWA基因表达增加,使细胞表现为收缩表型,细胞迁移受到抑制.
-
腺病毒介导反义血管紧张素Ⅱ1型受体cDNA对人肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响
目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响.方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASMC分为DMEM组、AdCMVLacZ组和AdCMVahAT1组,分别给予不同的干预因素干预PASMC,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化及彩色图像分析法检测AT1R的表达情况,并用改良的迁移小室进行细胞迁移实验.又将培养的PASMC分为DMEM组,AngⅡ组,AdCMVLacZ+AngⅡ组和AdCMVahAT1+AngⅡ组,用流式细胞仪检测各组PASMC的增殖指数和凋亡率,绘制DNA合成直方图.结果转染AdCMVahAT1后48 h的PASMC,AT1R mRNA明显低于对照组[AT1R/β-actin吸光度(A)比值:AdCMVahAT1组为0.48,DMEM组为0.97,AdCMVLacZ组为0.96];AdCMVahAT1组AT1R蛋白表达水平(A值为176.39±21.63)显著低于DMEM组(A值为310.21±29.82)和AdCMVLacZ组(A值为306.45±30.09),差异均有统计学意义(P均＜0.01),转染AdCMVahAT1后24 h的PASMC迁移距离为(40.93±9.69)μm,显著短于DMEM组的(78.23±11.79)μm和AdCMVLacZ组的(77.80±10.66)μm,差异均有统计学意义(P均＜0.01).给予AngⅡ刺激48 h,AngⅡ组PASMC的增殖指数(59.69±3.46)显著高于DMEM组(50.25±1.34,P<0.01),转染AdCMVahAT1后再用AngⅡ刺激48 h的AdCMVahAT1+AngⅡ组PASMC的增殖指数(24.67±3.19)则显著低于3个对照组(P均＜0.01),而AdCMVLacZ+AngⅡ组(59.53±3.26)和AngⅡ组比较差异无统计学意义(P>0.05).此时AdCMVahAT1+AngⅡ组出现凋亡峰,而在其他各组未出现明显凋亡峰,AdCMVahAT1+AngⅡ组凋亡率为(24.70±4.04)%,分别与DMEM组的(2.05±1.71)%、AngⅡ组的(2.19±1.99)%、AdCMVLacZ+AngⅡ组的(2.11±1.85)%比较, P均＜0.01.结论反义AT1R通过抑制AT1R的表达,能抑制AngⅡ介导的PASMC迁移和增殖,并具有促PASMC凋亡的作用.
-
一氧化氮合酶基因转染抑制缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的机制研究
目的研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染对缺氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21、p27在细胞增殖过程中的调控作用.方法经脂质体介导将iNOS重组逆转录病毒载体(pLNCX/iNOS)转染大鼠PASMCs,检测外源性iNOS表达及其生物学活性;氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入、流式细胞技术观察iNOS转染对缺氧条件下大鼠PASMCs增殖的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞技术检测p21、p27的变化.结果转染后检测证实,外源性iNOS基因可有效转录、表达,具有生物学活性;iNOS转染显著抑制缺氧条件下大鼠PASMCs3H-TdR的掺入,缺氧组(D组)大鼠每分钟衰变数值为(18 011±2 521)次/min,缺氧+DETA NONOate组(E组,0.5、1 mmol/L)每分钟衰变数值分别为(15 364±1 382)次/min、(13 712±1 782)次/min、低氧+iNOS转染组(G组)大鼠每分钟衰变数值为(15 145±1 514)次/min,3组比较差异有显著性(P＜0.01);iNOS转染导致停滞于G0/G1期的细胞比例增加,G组G0/G1期细胞百分比为67.8%,与D组(46.8%)比较差异也有显著性(P＜0.01);iNOS转染可使低氧条件下PASMCs的P27蛋白表达下调受到抑制,P27蛋白质表达相对百分比结果表明,静息组(A组)为25.1%,常氧组(B组)为15.8%,E1组(0.5 mmol/L)、E2组(1 mmol/L)分别为11.6%、14.3%,G组为12.7%,D组、E1组(0.1mmol/L)组及C组P27蛋白表达未能检测到.结论iNOS基因转染可抑制缺氧条件下大鼠PASMCs的增殖,其机制可能与NO通过转录后机制抑制P27蛋白表达下调有关.
关键词： 一氧化氮合酶 缺氧 肺动脉平滑肌细胞 增殖 细胞周期蛋白依赖性激酶 -
灯盏花素对低氧肺动脉平滑肌细胞蛋白激酶Cα mRNA表达影响的观察
采用原位杂交技术观察了灯盏花素在整体水平对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)及离体低氧培养猪PASMC蛋白激酶Cα(PKCα)mRNA表达的影响,以从分子水平探讨灯盏花素治疗低氧性肺动脉高压的作用机制.
