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截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠死亡受体途径的影响
目的 观察"截断逆挽方"对慢加急性肝衰竭大鼠JNK信号通路死亡受体途径的影响.方法 SPF级Wistar雄性大鼠70只,随机分为正常组、模型组、截断逆挽方组和SP600125组,各组大鼠给予猪血清腹腔注射13周,联合D氨基半乳糖/脂多糖(D-galactosamine/lipopolysaccharide,D-GalN/LPS)急性攻击,构建慢加急性肝衰竭大鼠模型,截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天,SP600125组于急性攻击前半小时腹腔注射.各组大鼠均在急性攻击后4、8、12小时平行取材.用免疫组化法(Immunohistochemical detection,IHC)检测肝组织中半胱氨酸蛋白酶-8(Cysteine Proteinase-8,Caspase-8)、Caspase-3、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase ,Fas)的表达量,用蛋白印迹法(Western Blot,WB)检测肝组织中Fas配体(Fas ligand,FasL)的表达量.结果 与正常组相比,模型组各时间点Caspase-3、Caspase-8、Fas、FasL表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,截断逆挽方组及SP600125组在4小时和8小时表达减少,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),12小时较模型组升高,差异无统计学意义(P>0.05).结论 截断逆挽方可以有效降低Caspase-3、Caspase-8、Fas、FasL的表达量,阻断死亡受体途径,减少模型大鼠肝细胞凋亡.
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牛磺酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响
目的:观察Tau对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡作用的影响,并探讨其机制是否通过死亡受体途径.方法:取Wistar雄性大鼠肺动脉平滑肌细胞培养；分为正常组(control)、凋亡组(SD)、给药组(Taurine高、中、低剂量).用吖啶橙(A0)法,在荧光显微镜下观察6孔板细胞核形态学变化；用Western-blot法分别测定Bax,Bcl-2,Procaspase-3,Fas的蛋白表达变化.结果:吖啶橙法3组结果可以看出,凋亡组和Tau给药组的细胞核皱缩,形成凋亡小体.Western-blot法测定显示Tau升高Bax和Fas蛋白表达,降低Procapase-3和Bcl-2的表达.结论:Tau可能通过死亡受体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡.
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瑞香狼毒提取物体外诱导肿瘤细胞凋亡作用比较研究
目的:体外比较瑞香狼毒提取物ESC,ESC-1,ESC-2对NCI-H157细胞的凋亡诱导作用.方法:采用流式细胞仪检测凋亡率；采用分光光度法检测caspase-3,8,9的活性；采用ELISA法观察凋亡通路Fas,Fas-L,TNF-α,TRAIL-R,Cyto-C,Smac/DIABLO蛋白的表达.结果:与对照组相比,ESC,ESC-1,ESC-2可明显提高NCI-H157细胞的凋亡率；ESc可明显提高NCI-H157细胞caspase-3,8酶的活力,ESC-2可明显提高NCI-HI57细胞caspase-3,8,9酶的活力；ESC,ESC-1,ESC-2可显著上调NCI-HI57细胞Fas蛋白的表达,ESC可明显增高Fas/Fas-L；ESC,ESC-1,ESC-2可显著上调NCI-H157细胞TNF-α蛋白的表达.ESC-1可显著下调NCI-H157细胞TRAIL-R的表达.ESC,ESC-1,ESC-2对NCI-H157细胞Cyto-C蛋白表达无显著性影响.ESC-1,ESC-2可显著下调NCI-H157细胞Smac蛋白的表达.结论:瑞香狼毒提取物诱导肿瘤细胞凋亡可能与调控死亡受体途径通路蛋白有关.瑞香狼毒提取物诱导肿瘤细胞机制复杂,可能存在双向调节的作用,其诱导凋亡是综合调控的结果.
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氧化型胆固醇诱导血管细胞凋亡的机制
氧化型胆固醇(Ch-Ox)能诱导血管细胞凋亡,它是氧化低密度脂蛋白诱导细胞凋亡的主要活性成分之一,在动脉粥样硬化的形成过程中起重要作用.本文综合目前Ch-Ox的细胞毒性作用的研究进展,讨论了Ch-Ox诱导细胞凋亡的可能机制,并对凋亡的两种可能途径及信号转导进行分析,认为Ch-Ox通过线粒体途径诱导细胞凋亡已得到大量研究结果的证明;而通过死亡受体途径的可能性仍有待于进一步研究;胞内钙离子浓度的升高是Ch-Ox诱导细胞凋亡的早期信号转导事件;活性氧在Ch-Ox诱导细胞凋亡过程中也可能作为第二信使发挥重要作用.
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凋亡途径与肿瘤治疗
经典的凋亡途径是指死亡受体途径和线粒体途径,其调控可通过死亡受体、线粒体、凋亡抑制蛋白和Caspase酶等多个水平实现,也受相关传导通路信号的调节.凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,利用有关的凋亡诱导和调控机制诱导肿瘤细胞凋亡已经成为治疗肿瘤的一个重要途径,我们即对该方面的研究进展进行综述.
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自然杀伤细胞在慢性乙型肝炎中双重作用的研究进展
人类肝脏自然杀伤细胞（nature killer cell，NK）自然富集，肝内优势突出了其在控制嗜肝病毒感染的重要性。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染中NK细胞为研究者提供了有利的机会来考虑这些免疫效应细胞在肝脏独特环境的重要功能。NK细胞在乙型肝炎中的作用仍在研究中。近年来数据表明， NK细胞是能够发挥抗病毒和免疫调节功能，也通过死亡受体途径导致肝损伤。下面将NK细胞的抗病毒和致病作用作进一步概述。
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薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机制研究
目的 探讨中药单体薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机制.方法 采用Western blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及逆转录PCR(RT-PCR)对DRG诱导细胞凋亡的机制进行了研究.结果 在HCT15细胞中,DRG促发了线粒体调控的凋亡途径,细胞色素c呈时效性地从线粒体中释放到胞质中,同时Bax与Bcl-2蛋白表达的相对比例上调,caypase-9、caspase-3和PARP等被剪切成具有活性的片段,但是caspase-7却未见剪切,同时还不影响P53和Bcl-xL的表达；而与死亡受体途径相关的FADD表达无明显变化,caspase-8酶原也未见剪切；另外,DRG也不抑制BH3短肽与Bcl-xL 的结合；RT-PCR检测结果表明,DRG诱导HCT-15细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA水平的改变,进而导致Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平则明显增加,说明DRG诱发的细胞凋亡中涉及到Bcl-2和Bax基因水平的变化.结论DRG诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax和Bcl_2靶基因的转录表达,上调Bax/Bcl-2蛋白表达水平比例,并终通过激活经典的线粒体途径而不是死亡受体途径来发挥其HCT-15细胞凋亡诱导作用,且对P53呈非依赖型.
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TXNIP过表达对INS-1细胞凋亡通路的影响
目的 本研究使用腺病毒转染技术,观察在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞过表达TXNIP是否引起细胞凋亡,并对TXNW介导细胞凋亡的通路进行初步分析.方法 将处于对数生长期在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞分为3组,即正常培养组、空病毒(Ad-eGFP)组和TXNIP过表达(Ad-TXNIP-eGFP)组,均于转染48h后收集细胞进行指标测定.结果 转染细胞48 h时病毒转染率达到高峰,并且荧光蛋白表达量基本一致.同Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组TXNW mRNA(38.68±7.35比0.73±0.39,P＜0.01)和蛋白表达量(1.28±0.25比0.62±0.16,P＜0.01)均明显增高,说明转染及TXNIP过表达成功.与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNW-eGFP组Caspase-3相对活性明显增高[(3.823±0.238)nmol·h-1·mg-1比(0.956±0.107)nmol·h-1·mg-1,P＜0.01];反映下游不同通路的Caspase-8[(132.10±27.33)pg/ml比(81.01±15.34)pg/ml,P＜0.01]、Caspase-9[(290.76±43.15)pg/ml比(88.94±14.68)pg/ml,P＜0.01]和Caspase-12活性[(266.96±18.50)pg/ml比(52.05±6.13)pg/ml,P＜0.01]均明显增高.结论 单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养下INS-1细胞凋亡.线粒体凋亡途径、死亡受体活化途径和内质网应激介导途径均参与了TXNIP引起的INS-1细胞凋亡的发生.
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三氧化二砷诱导K562/ADM细胞内质网应激反应性凋亡的机制研究
内质网应激反应性凋亡途径是不同于经典的线粒体途径和死亡受体途径的细胞凋亡适路.三氧化二砷(A2O3)对白血病以及其他实体肿瘤均具有良好的抗肿瘤效应,且与常规化疗药物无交叉耐药性[1].
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Fas与FasL在芪白平肺胶囊含药血清诱导低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用
目的:探讨Fas与FasL在芪白平肺胶囊含药血清诱导低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterysmooth muscle cells,PASMCs)凋亡中的作用.方法:芪白平肺胶囊含药血清和空白血清的制备.大鼠PASMCs 的培养及a-SMA细胞免疫荧光鉴定.MTT法筛选佳含药血清及佳低氧时间.正式实验根据MTT结果分为常氧对照组,低氧模型组,佳含药血清组,含药血清作用佳低氧时间后,TUNEL-FITC/DAPI法检测各组PASMCs凋亡情况,Western Blot法检测各组PASMCs的Fas与FasL蛋白表达变化.结果:与低氧模型组比较,芪白平肺胶囊含药血清可明显促进低氧大鼠PASMCs的凋亡,但细胞内Fas与FasL蛋白表达较模型组无显著差异.结论:芪白平肺胶囊含药血清能有效抑制低氧大鼠PASMCs增殖作用,促进其凋亡,但Fas/FasL死亡受体通路可能不参与芪白平肺胶囊含药血清诱导低氧大鼠PASMCs凋亡的调控.
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细胞凋亡及其信号转导途径
细胞胞凋亡是生物体细胞受基因精确调控的主动消亡过程,在多细胞生物体调控机体发育、维持内环境稳定中起着重要作用.细胞凋亡的机制是高度复杂而精确的,它是能量依赖的分子连锁反应,有多种分子参与、多重信号转导通路介导其调控.本文对细胞凋亡途径及其信号转导的研究概况进行综述.
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009 死亡受体及线粒体途径与激活诱导T细胞凋亡
免疫系统形成了一系列确保激活的淋巴细胞能被有效清除的分子及信号途径,称之为激活诱导的细胞死亡.激活诱导的细胞死亡主要负责调节免疫细胞稳态及清除自身反应性淋巴细胞.死亡受体途径及线粒体死亡途径分别是细胞凋亡的外在途径和内在途径,也参与了激活诱导的T细胞凋亡,本文就外周成熟T细胞凋亡相关的死亡受体途径、线粒体死亡途径及其相关调控机制研究进展作一综述.
关键词： 激活诱导的T细胞凋亡 死亡受体途径 线粒体途径 -
活性氧与内质网应激介导肝细胞凋亡研究进展
凋亡是程序性细胞死亡,目前已知的3条凋亡途径包括死亡受体途径、线粒体途径及内质网应激凋亡途径.
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紫外线灭活仙台病毒诱导人胶质瘤细胞系LN229凋亡作用
目的 探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制.方法 用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24 h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降.结论 灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关.
关键词： 仙台病毒 人胶质瘤细胞系LN229 凋亡 线粒体途径 死亡受体途径 -
白英生物碱通过激活FAS途径诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究
目的 探讨白英生物碱(STA)诱导人肺癌A549细胞凋亡及其对Fas途径相关基因表达的影响.方法 采用STA处理体外培养的A549细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Fas、FasL、Cleaved caspase-8和Cleaved caspase-3蛋白表达.结果 STA能抑制A549细胞增殖,STA各组细胞抑制率显著升高且呈剂量依赖性,与正常对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.01);STA各组细胞凋亡率明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.01)；Caspase-8/Caspase-3抑制剂能抑制STA诱导细胞凋亡,与同剂量STA组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；STA各组细胞Fas、FasL、Cleaved caspase-8和Cleaved caspase -3表达显著上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 Fas介导的死亡受体途径参与STA诱导肺癌A549细胞凋亡.
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Nutlins类似物NL-86诱导HeLa细胞凋亡的研究
目的 观察新型Nutlins类似物NL-86在体外诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用的分子机制.方法 采用MTT法检测NL-86化合物对HeLa细胞增殖的影响;用 FITC-Annexin V及碘化丙锭(PI)双染法,通过流式细胞仪(FCM)检测NL-86诱导HeLa细胞凋亡情况;用Western 印迹检测PARP[poly(ADP-ribose)polymerase]、pro-caspase 3、8、9的变化,并利用活力检测试剂盒检测caspase 3、8、9的活力,初步确定其诱导凋亡的通路.结果 不同浓度的NL-86 对于HeLa细胞的存活率均具有一定影响,并以浓度依赖的方式诱导HeLa细胞凋亡;随着NL-86浓度的增加,PARP被切割、HeLa 细胞pro-casepase 3、8的含量下降,但 pro-caspase 9无变化.活力测定结果显示caspase 3、8被激活,caspase 9无变化.结论 NL-86化合物能够有效地在体外诱导HeLa 细胞凋亡,且可能依赖于caspase 3、8相关的死亡受体凋亡途径,为进一步研发治疗宫颈癌等肿瘤疾病的药物奠定了实验基础.
关键词： Nutlins类似物 宫颈癌 细胞凋亡 死亡受体途径 -
大骨节病死亡受体途径调节因子表达的组织学改变
目的 观察大骨节病软骨组织中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)和细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达的变化,明确其在大骨节病软骨损伤中的作用.方法 将依据大骨节病和骨关节病诊断标准收集的软骨分为大骨节病组(KBD)、骨关节病组(OA)和正常对照组.采用免疫组化染色法检测3组关节软骨的死亡受体调节因子FADD和c-FLIP表达变化,并在显微镜下计数和比较3组关节软骨不同层间阳性表达率的显著性差异.结果 (1)KBD和OA组软骨[分别为(28.68±2.19)％和(35.40±2.34)％]中层FADD表达显著较正常组增高(F=16.245,P=0.000),而在表、深层3组间均无显著差异(P=0.206,P=0.761); (2)FADD在KBD软骨中表达以中层高,为(28.68±5.38)％,其次为深层的(17.94±8.38)％; (3)KBD和OA软骨表层FLIP表达均显著低于正常组(F=5.929,P=0.018),而中层和深层与正常组间均无显著差异.结论 KBD软骨中层FADD显著上调,而软骨表层FLIP表达显著下调,表明死亡受体途径及其调节因子在大骨节病软骨损伤中具有重要作用.
关键词： 大骨节病 死亡受体途径 Fas相关死亡结构域蛋白 FLICE抑制蛋白 免疫组化 -
Survivin靶向抑制措施及其与常用化疗药物联合应用的研究进展
肿瘤是细胞在基因水平上调控紊乱,克隆性异常增生形成的新生物,积累的过多细胞便是过度增殖和凋亡不足的结果,凋亡前基因的钝化突变及抗凋亡蛋白的过度表达都会导致凋亡不足和恶性细胞的生长优势.而凋亡的线粒体途径和死亡受体途径均可被凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)成员抑制.作为IAPs小成员的胞质蛋白,Survivin的分子量约16.5 kD,含4个外显子和3个内含子,经常过表达于分化成熟的肿瘤细胞而在正常成熟组织中不表达,将凋亡过程阻止在有丝分裂G2/M关卡,促成肿瘤细胞的异常有丝分裂[1].该特性使得科学家们选择性靶向杀伤肿瘤细胞的兴趣增大,阻止Survivin的活性从而促进凋亡的措施不断涌现甚至进入体外实验和临床应用,现对其主要措施及联合用药情况进行综述.
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Bcl-xL和Survivin在结直肠癌中的研究进展
肿瘤的发生发展,与有癌变潜能细胞的凋亡抑制密切相关.线粒体途径和死亡受体途径是介导细胞凋亡的主要过程,终启动caspase级联活化和瀑布样反应,诱导细胞凋亡.Bcl-xL 和Survivin都是细胞凋亡强有力的抑制剂,均与caspase级联反应过程有关,可能与肿瘤的形成和发展、耐药性的产生以及免疫耐受密切相关.
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Fas/FasL信号通路在铅暴露致PC12细胞凋亡中的作用
目的 探讨Fas/FasL信号在铅诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)发生细胞凋亡中的作用.方法 醋酸铅的暴露剂量设为0、0.1、1.0与10.0 μmol/L,暴露时间为48 h.免疫荧光技术观察细胞内Fas蛋白的表达,Westernblot法检测Fas与FasL蛋白表达水平,比色法测定细胞内caspase-8与caspase-3的活性,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 免疫荧光技术与Western blot法均表明,与对照组比较,1.0与10.0 μmol/L醋酸铅暴露可致PC12细胞内Fas表达明显增加(P＜0.05),10.0μmol/L醋酸铅可诱导FasL蛋白表达显著增加(P＜ 0.01).此外,与对照组相比,caspase-8活性在10.0 μmol/L醋酸铅暴露后显著升高(P＜0.01),而caspase-3活性在1.0与10.0 μmol/L醋酸铅染毒后均显著上升(P＜0.05).流式细胞术结果显示,0.1、1.0与10.0 μmol/L醋酸铅染毒均增加PC12细胞凋亡率(P＜0.05),与对照组比较,差异有统计学意义.结论 铅暴露可诱导PC12细胞凋亡,其机制可能与死亡受体途径的激活有关.
