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几种抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡能力的比较
目的:比较抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡的能力,以期找到一种疗效较好的化疗药物.方法:根据临床常用的高及低剂量,分别将羟基喜树碱、三氧化二砷、紫杉醇、全反式维甲酸、奥曲肽及5-Fu与胰腺腺泡癌细胞SW1990系共同培养6、12、24h,利用光镜及电镜下的形态学方法及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)确定细胞凋亡,并利用AO-EB双重荧光染色法及PI和Annexin-V FITC双重标记下的流式细胞术定量测定细胞凋亡率.结果:上述药物均可诱导SW1990细胞凋亡,凋亡诱导能力由强到弱依次为紫杉醇、5-氟尿嘧啶、羟基喜树碱、三氧化二砷、全反式维甲酸和奥曲肽.各药物的凋亡诱导能力呈剂量和时间的依赖性,其中紫杉醇的作用强且快.结论:紫杉醇可能是一种疗效较好的胰腺癌化疗药物.
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细胞凋亡与肝移植免疫耐受
终末期肝病的发病率很高,在亚洲尤其突出,肝移植是其治疗的有效手段.如何诱导肝移植免疫耐受是免疫学工作者及临床医师遇到的免疫学理论和临床现实问题.细胞凋亡是近10 a来研究的热点问题.本文主要介绍细胞凋亡的概念,形态学的改变,检测方法,肝移植免疫耐受的特殊性,细胞凋亡与肝移植免疫耐受、排斥反应的关系等研究现状.强调了T细胞凋亡诱导肝移植免疫耐受.
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凋亡途径与肿瘤治疗
经典的凋亡途径是指死亡受体途径和线粒体途径,其调控可通过死亡受体、线粒体、凋亡抑制蛋白和Caspase酶等多个水平实现,也受相关传导通路信号的调节.凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,利用有关的凋亡诱导和调控机制诱导肿瘤细胞凋亡已经成为治疗肿瘤的一个重要途径,我们即对该方面的研究进展进行综述.
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异叶败酱提取物对白血病K562细胞作用的蛋白质组学研究
目的 研究异叶败酱提取物作用于人白血病K562细胞的分子机制.方法 以异叶败酱提取物作用于K562细胞后提取细胞总蛋白,用双向电泳对蛋白进行分离,对异叶败酱提取物处理前后的K562细胞总蛋白双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定差异明显的蛋白质.结果 通过对比分析异叶败酱提取物处理前后的白血病K562细胞总蛋白双向电泳图谱,发现异叶败酱提取物处理组中有23个蛋白点发生了明显改变.经质谱和Mascot软件分析,成功鉴定了3个蛋白质,分别为热休克蛋白90β,甘油醛-3-磷酸脱氢酶,血红蛋白.结论 通过蛋白质组学技术,发现了异叶败酱提取物处理前后白血病K562细胞差异明显的蛋白质点23个,这些差异蛋白质可能是异叶败酱提取物对白血病K562细胞产生增殖抑制、凋亡诱导和诱导分化作用的关键蛋白质.
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三氧化二砷抗肿瘤作用机制及临床应用研究进展
一、三氧二砷的抗肿瘤作用机制1.通过线粒体依赖性通路诱导细胞凋亡:凋亡细胞在被诱导产生特征性形态学改变和DNA降解之前,一个普遍的变化是线粒体膜功能的改变即线粒体的通透性改变(permeability transition,PT),这是调节凋亡的中心环节.砷剂与巯基结合后,导致线粒体膜通透性转运孔的开放,反应性氧类增加,进而导致线粒体跨膜电位(△ψm)下降.巯基是As2O3诱导线粒体膜电位下降和细胞凋亡的重要化学感受器,二硫键还原剂二硫苏糖醇(DTT)明显阻止As2O3诱导的细胞线粒体膜电位下降和细胞凋亡,因此,其机制可能与巯基氧化尤其是二硫键的形成有关.MPT是细胞凋亡的调节物,可能作为细胞死亡的开关一但打开,线粒体膜电位下降,细胞不可逆地进行凋亡[1-3].当线粒体膜电位降低时,促凋亡因子,如细胞色素C(Cyto-C)和凋亡诱导因子(AIF)自线粒体释放入胞质,激活一些凋亡效应分子,如半胱氨酸蛋白酶家族成员caspase-9,进一步激活aspase-3,从而诱导细胞凋亡.Caspase即半胱氨酸蛋白酶家族.在NB4(一种APL细胞系),U937及SH-SY5Y成神经细胞瘤等细胞系中均可见As2O3等砷剂诱导的凋亡相关的caspase激活[4,5].根据其在细胞凋亡中的作用可分为始动(上游)caspase(caspase2、8、9、10)和效应(下游)caspase(caspase3、6、7)两大类.前者在凋亡诱导信号作用下结合特异辅因子而活化,并进一步活化后者.因而caspase的活化级联形式是砷剂诱导凋亡的重要通路.综上所述,砷剂引起的MPT开放和△ψm破坏是决定细胞生存与否的关键,而caspase是砷剂诱导凋亡的下游效应物,其活化可诱导细胞凋亡.
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大鼠支持细胞(Sertoli)对淋巴细胞作用初探
目的 探索Sertoli细胞对淋巴细胞的作用,为人工构建免疫豁免等提供思路.方法 酶解法分离培养幼龄大鼠睾丸的Sertoli细胞;用丝裂原ConA、LPS分别刺激T、B淋巴细胞活化;用MTT法测定Sertoli细胞上清作用过的淋巴细胞增值活力;用AnnexinV/PI法测定经Sertoli细胞培养上清作用后淋巴细胞的凋亡率.结果 Sertoli细胞培养上清明显抑制ConA(MTT测定OD值阳性/对照:0.22/0.11)和LPS(MTT测定OD值阳性/对照:0.19/0.09)对淋巴细胞的促增殖作用,也可诱导这两种淋巴细胞凋亡率上升(34.5Vs29.9与48.6Vs33.9).结论 Sertoli细胞培养上清对丝裂原激活的T、B细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用.
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白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用
目的观察白屈菜红碱(chelerythrine)对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法通过MTT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果MTT实验显示白屈菜红碱抑制BGC823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期.结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性.
关键词： 白屈菜红碱 增殖抑制 凋亡诱导 人胃癌BGC823细胞 -
骨髓增生异常综合征患者Fas、FasL和FAP-1基因的表达
报道骨髓增生异常综合征(MDS)患者存在凋亡诱导基因Fas、FasL的表达异常[1,2].FAP-1为Fas相关酪氨酸磷酸酶,可与Fas胞浆内链相互作用,抑制Fas介导的细胞毒作用[3],其在MDS细胞中的表达,国外报道尚少,国内未见报道.我们采用BT-PCR对36例MDS患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中Fas、FasL和FAP-1的mRNA表达进行了研究.
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p53基因与口腔颌面肿瘤
有关口腔颌面部肿瘤发生机制尚无统一认识.近年来,人们认识到癌基因的激活和抑癌基因的失活与肿瘤的发生、发展有密切关系.研究证实,口腔颌面部肿瘤与多个基因和抑癌基因有关.p53基因是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性高的抑癌基因[1],其在细胞周期调控、细胞生长抑制、肿瘤细胞凋亡诱导以及肿瘤治疗等方面均有重要作用.本文就p53基因在口腔颌面部肿瘤中的表达与意义综述如下.
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姜黄素对人肾癌Caki-2细胞生长和凋亡的影响及其机制
目的:观察姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法:应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞12、24、36、48、72、96 h,采用MTT法评价姜黄素对Caki-2细胞的生长抑制作用;应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞36、48、72、96 h,采用AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒评价姜黄素对Caki-2细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测姜黄素对Caki-2细胞H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,β-actin作为内参蛋白.结果:不同浓度的姜黄素能显著抑制Caki-2细胞生长,36、48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;不同浓度的姜黄素能显著诱导Caki-2细胞凋亡,48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;姜黄素作用后,Caki-2细胞中H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达显著增加,ERK1/2、β-actin蛋白表达与空白组相比无统计学差异.结论:姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞有显著的生长抑制作用,其机制可能与通过抑制H-Ras蛋白表达、直接或间接下调ERK信号通路蛋白表达相关;同时,姜黄素对Caki-2细胞有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关.
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紫草素和胡桃醌对舌癌Tca8113细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用比较研究
目的 比较紫草素和胡桃醌对舌癌Tca8113细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法 采用MTT法观察紫草素和胡桃醌对Tca8113细胞的增殖抑制作用并绘制细胞生长曲线;采用Hoechst 33258染色法检测两种药物对Tca8113细胞的凋亡诱导作用;采用SPSS 19.0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验.结果 5 ～ 25 μmol/L浓度范围内,两种药物对Tca8113细胞的生长抑制作用呈现出明显的剂量和时间依赖性,且两种药物均可诱导Tca8113细胞凋亡;15 μmol/L紫草素的增殖抑制作用及诱导凋亡作用均强于胡桃醌(P＜0.05).结论 紫草素对Tca8113细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用强于胡桃醌.
关键词： 紫草素 胡桃醌 舌癌Tca8113细胞 增殖抑制 凋亡诱导 -
β1-整合素与乳腺癌细胞凋亡关系的实验研究
目的探讨乳腺癌细胞凋亡与β1-整合素作用的关系.方法人乳腺癌细胞SK-BR-3在培养中以不同浓度的抗β1-整合素单克隆抗体的作用下,观察其对TNF-α诱导的凋亡并计算凋亡率.结果加入凋亡诱导剂后,凋亡细胞由正常生长的2.85±0.41增加到25.62±1.41(P＜0.01);而加入抗β1-整合素单克隆抗体的实验组凋亡细胞数明显减少,且随加入抗体浓度的增加而再度减少.结论TNF-α对SK-BR-3人乳腺癌细胞凋亡的诱导作用可能是由β1-整合素参与的介导作用实现的,且存在着一种在一定范围内的量、效依赖关系.
关键词： 人乳腺癌细胞 凋亡 抗β1-整合素单克隆抗体 凋亡诱导 -
人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究
背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的实验研究很少。本实验在体外构建针对人慢性粒细胞白血病(chronic myelogenou leukemia，CML)bcr-abl融合基因mRNA的反义寡核苷酸，探讨bcr-abl反义寡核苷酸对K562细胞凋亡的诱导作用。方法：以bcr-abl融合基因mRNA翻译起始点融合前区19个寡核苷酸为作用靶点，设计反义寡核苷酸，以其反义寡核苷酸序列转染人慢性粒细胞K562细胞，采用Hoechst染色法观察不同浓度寡核苷酸对K562细胞株的凋亡情况，采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测自噬凋亡蛋白LC3-Ⅱ的表达情况，采用流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞周期变化，采用JEM-4000EX电镜术检测细胞凋亡形态变化，通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡情况。结果：Hoechst染色结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸能显著促进K562细胞的凋亡，且呈现一定的浓度依赖性。Western blot检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸各浓度组凋亡自噬蛋白LC3-Ⅱ表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸作用于K562细胞后，细胞周期阻滞于G0/G1期。各组G0/G1期、S期细胞数量与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。在JEM-4000EX电镜下可见明显的新月型凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳显示，10、30μmol/mL bcr-abl反义寡核苷酸组可以明显观察到以180~200 bp碱基对整倍数出现明暗间隔的DNA梯状条带。结论：Bcr-abl反义寡核苷酸可显著诱导K562细胞凋亡，为临床上基因治疗人CML提供一定的参考。
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醉香含笑心材挥发性成分GC-MS分析及抑制MDA-MB-231细胞生长与诱导其凋亡作用
目的 分析醉香含笑心材提取物(extract of trunk of Michelia macclurei Dandy.,ETMMD)的挥发性成分,并考察其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外生长抑制作用及诱导其凋亡的作用.方法 水蒸气蒸馏法提取醉香含笑心材的挥发性成分,用气-质联用(GC-MS)技术进行分析,并用峰面积归一化法测定各成分相对含量;采用MTT法及流式细胞术分别检测6.25,12.50,25.00 μg·mL-1的ETMMD对MDA-MB-231细胞体外生长抑制作用及诱导其凋亡的作用.结果 共检出42个色谱峰,确定了其中41种化合物,占该挥发性成分总量的99.73％.ETMMD对MDA-MB-231细胞的抑制率呈浓度依赖关系.结论 ETMMD的挥发性成分以倍半萜烯及不饱和酮、不饱和酯类为主,此外还包括高级脂肪酸酯,以及一些甾体类化合物.ETMMD能明显抑制MDA-MB-231细胞的生长.浓度为6.25,12.50,25.00 μg·mL-1的ETMMD可明显诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡.
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美洛昔康抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究
目的：研究美洛昔康( meloxicam,Mel)对人结肠癌细胞LoVo增殖抑制作用及其机制。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,体外药物敏感试验(结晶紫染色)和流式细胞术( FCM)分析Mel对细胞的增殖抑制作用；流式细胞术和HE染色检测Mel对细胞凋亡的影响；萤光素酶报告质粒检测Mel 对 Wnt/β-catenin 通路信号转导的影响；Western blot检测Mel对细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Mel能抑制LoVo细胞增殖,72 h、100μmol· L-1 Mel的细胞抑制率高达(57．635±3．86)%(t=10．044,P=0．001)；Mel能诱导 LoVo 细胞凋亡,24 h、60μmol · L-1 Mel的细胞凋亡率达到(33．6 ± 1．7)%( t =30．166, P =0．001)；Mel能降低TCF/LEF及Myc/Max报告质粒的萤光素酶活性,24 h、60μmol · L-1 Mel 可使 TCF/LEF 和 Myc/Mac报告的荧光素酶活性分别降至(40．05± 2．79)%( t =14．864, P =0．001)和(35．9±2．38)%( t =16．904, P =0．001)；Mel能下调细胞内β-catenin 蛋白水平,40μmol · L-1 Mel在24、48 h时,可将β-catenin蛋白水平分别降至(71±3．78)%( t =7．353, P =0．003)、(52．66±3．57)%( t =11．724,P=0．001)。结论 Mel能抑制LoVo细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制 Wnt /β-catenin 通路信号转导,降低细胞内β-catenin蛋白水平有关。
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蟾蜍灵对白血病K562细胞生长抑制机制
目的 探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响.方法 倒置光显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态结构改变;MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;流式细胞术分析蟾蜍灵对细胞周期的影响.结果 在光镜、荧光显微镜和电子显微镜下,蟾蜍灵作用K562细胞的形态和结构发生明显改变;蟾蜍灵对K562细胞的生长具有明显的抑制作用,与对照组细胞进行比较,差异具有显著性(P<0.05);MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0.013 μmol/L,统计学分析证明,差异具有显著性(P<0.01);蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;蟾蜍灵可阻滞K562细胞于G2/M期.结论 ①蟾蜍灵对K562细胞的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用;②蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡可能归功于G2/M期阻滞.
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来沙木单抗和表柔比星联合诱导肾癌细胞协同性毒性
来沙木单抗是肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2( TRAIL-R2)的人源化单抗,对晚期癌症患者发挥良好的治疗效果.阿霉素能通过诱导TRAIL-R2表达增强来沙木单抗对癌细胞的活性抑制作用[1].
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cFLIP与TRAIL调控凋亡的研究进展
TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand)为TNF超家族成员,与特定受体结合后通过死亡受体通路诱导细胞凋亡.cFLIP(cellular Fas-associated death domain-like IL-1 beta-converting enzyme inhibitory protein)为一类在多物种包括哺乳动物细胞中广泛存在的凋亡抑制蛋白,抑制TRAIL诱导的凋亡.TRAIL与cFLIP分别发挥诱导凋亡与抑制凋亡作用,在生理和病理状态下具有不同意义.
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醒脑静注射液在神经细胞凋亡中作用的研究进展
细胞凋亡是机体细胞在正常生理或病理状态下发生的自发的、程序化的一种死亡过程,可以有多种因素如缺血缺氧、病毒感染、药物、毒素等所诱导.因此,抑制凋亡成为了保护神经细胞的治疗重点.醒脑静注射液是由安宫牛黄丸改制的水溶性注射液,由麝香、郁金、冰片、栀子等提取制成.麝香气味芳香,性善走窜,具有较强的开窍闭通作用;冰片辛苦微寒,通诸窍而散郁火,常与麝香相伍用于醒神开窍;栀子泻三焦之火,清热凉血,利湿解毒;郁金辛苦性寒,活血止痛,行气解郁,凉血清心.四药合用,具有芳香开窍、醒神止痛、清热解毒等作用[1].研究表明,醒脑静可对神经细胞凋亡过程的多个环节进行干预,包括抑制凋亡诱导的启动、调节凋亡相关基因表达、拮抗凋亡执行蛋白酶活化,从而减少神经细胞的凋亡.现笔者就近年来醒脑静注射液对神经细胞凋亡影响的实验研究作一综述.
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Thapsigargin对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的诱导作用研究
目的探讨Thapsigargin对人乳腺癌MCF-7细胞株雌激素受体阳性的凋亡诱导作用.方法在体外培养条件下,应用Thapsigargin与5-FU处理MCF-7细胞株,采用流式细胞仪检测其细胞凋亡率和周期分布;MTT比色法分析其细胞生长抑制率;透射电镜观察细胞超微结构.结果Thapsigargin可使5-FU诱导的MCF-7细胞凋亡率和生长抑制率明显增加,并改变细胞周期的分布.电镜下可见MCF-7细胞凋亡小体明显增加.结论Thapsigargin具有明显加强5-FU对人乳腺癌MCF-7细胞株的凋亡诱导作用,值得进一步研究.
关键词： Thapsigargin 乳腺癌 凋亡诱导
