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曲古抑素A对耐顺铂人肺腺癌细胞株凋亡影响及其机制的探讨
目的:探讨曲古抑素A(TSA)诱导耐顺铂(DDP)人肺腺癌A549/DDP细胞株凋亡的作用及机制.方法:荧光染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析cFLIP、Caspase-8、Caspase-3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的变化,同时比色法测定Caspase-8活性.结果:曲古抑素A能诱导凋亡A549/DDP细胞株凋亡,随着浓度增加,其凋亡率逐渐增加.蛋白质印迹法结果显示,TSA处理细胞后,cFLIP蛋白水平下降,Procaspase-8减少,提示该酶被激活,促使Bid蛋白切割.Procaspase-3减少,提示酶被激活.PARP蛋白减少,切割的条带逐渐增加,提示PARP活性增加,促进细胞凋亡.比色法结果显示TSA对Caspase-8活性和cFLIP的影响具有浓度和时间依赖性.结论:TSA可以通过降低cFLIP水平激活Caspase-8诱导A549/DDP细胞凋亡.
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cFLIP在不同宫颈病变组织中的表达及临床意义
目的:研究cFLIP在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)、慢性宫颈炎组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组化染色(SP)法检测40例宫颈癌、45例CIN、15例慢性宫颈炎和10例正常宫颈组织中eFLIP的表达情况,并对宫颈癌的病理类型、分化程度、临床分期和是否有淋巴结转移等生物学行为进行相关性分析.结果:①宫颈癌组、CIN组、慢性寓颈炎组及正常宫颈组织中cFLIP的阳性表达率分别为95.00%、68.88%、20.00%、10.00%.宫颈癌组、CIN组与正常宫颈组三组间两两相比,均具有显著性差异(均P<0.05).慢性宫颈炎组与正常宫颈组相比,无显著性差异(P>0.05).②CIN Ⅰ组、CINⅡ组与宫颈癌组相比,具有显著性差异(P<0.05).CINⅢ组与宫颈癌组相比,无显著性差异(P>0.05).③cFLIP的阳性表达率与宫颈癌的病理类型、分化程度、淋巴结转移及临床分期无关(P>0.05).结论:cFLIP与宫颈癌的发生、发展密切相关,可能成为治疗宫颈癌的潜在靶点.
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Fas,FasL和cFLIP与宫颈癌研究现状
脂肪酸合成酶(Fas)是一种跨膜蛋白,属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族.其与配体(FasL)相互作用是诱导细胞凋亡的主要途径之一.研究表明,Fas/FasL异常表达可引起肿瘤组织中细胞凋亡与增殖失衡.细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白细胞介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)是一种内源性凋亡抑制蛋白,可抑制多种凋亡受体,如Fas/FasL等诱导的细胞凋亡.近来发现,Fas/FasL、cFLIP在许多肿瘤组织中表达异常,可作为肿瘤治疗新靶点.已开展对三者在宫颈癌中的相关研究,将为宫颈癌诊断、治疗及预后判断提供新思路和手段.
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抑制人cFLIP基因表达的shRNA质粒的构建与功能验证
目的:构建特异性抑制cFLIP基因表达的质粒并检测其对肝癌细胞的影响.方法:根据人cFLIP mRNA的序列,设计合成3对cFLIP基因的shRNA,将其连入干扰载体,转染HepG2,蛋白印迹法检测基因表达情况,以检测其对肝癌细胞的影响.结果:构建了特异性抑制肝癌细胞中cFLIP表达的质粒.结论:成功构建能特异且高效阻断cFLIP表达的shRNA表达质粒,为进一步研究cFLIP基因对肝癌增殖的影响及其临床应用奠定了基础.
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Fas、FasL及cFLIP在宫颈病变中的表达与宫颈癌发生发展相关性的初步探讨
背景与目的:虽然机体有一系列免疫监视机制,但肿瘤仍能发生并持续发展.本研究通过检测Fas、Fas配体(FasL)、cFLIP在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)中的表达,探讨其在宫颈癌发生发展中作用.方法:应用免疫组织化学染色的方法,检测40例宫颈癌、20例CIN及20例正常宫颈上皮中Fas、FasL和cFLIP的表达,并进行相关临床病理因素分析.结果:Fas在宫颈癌和CIN中的阳性表达率(47.5%,45.0%)明显低于在正常宫颈组织的表达率(90.0%,P＜0.05),其阳性表达率的高低与CIN的分级、临床分期及组织学分级有关(P＜0.05);FasL在宫颈癌和CIN中的表达率(50.0%,40.0%)则明显高于正常宫颈组织中的表达率(5.0%,P＜0.05),其阳性表达率的高低与CIN的分级,临床分期,及组织学分级有关(P＜0.05),且有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05);cFLIP在宫颈癌和CIN中的表达率(92.5%,70.0%)明显高于在正常宫颈组织中的表达率(10.0%,P＜0.05),cFLIP的表达与CIN的分级有关(P＜0.05),与宫颈癌的临床分期、组织学分级、病理类型、淋巴结是否转移无关(P＞0.05).Fas与FasL的表达呈负相关(ra=-0.69,P＜0.05),cFLIP与Fas的表达密切相关(ra=0.368,P＜0.05).结论:宫颈癌细胞通过Fas低表达和FasL、cFLIP高表达逃避机体免疫监视并进行免疫反击以促使肿瘤发生、发展及转移.
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cFLIP在早期自然流产绒毛组织的表达及意义
目的:检测早期正常妊娠及自然流产绒毛组织中细胞凋亡抑制蛋白cFLIPmRNA及其蛋白产物的表达,分析并探讨cFLIP与自然流产的关系.方法:应用RT-PCR法及免疫组化SP法检测cFLIP mRNA及其蛋白产物在20例自然流产患者(研究组)绒毛组织的表达,以同期正常妊娠要求人工流产20例为对照组.结果:研究组绒毛组织中cFLIP mRNA及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:细胞凋亡抑制蛋白cFLIP参与维持正常妊娠,绒毛组织中其表达下降可能在自然流产的发生中起重要作用.
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cFLIP 、TBX2在颅内外鳞癌中的表达及意义
目的：探讨颅内外鳞癌中cFLIP及TBX2的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测了57例颅内外鳞癌、38例癌旁不典型增生及30例正常组织中cFLIP、TBX2蛋白表达情况。结果颅内外鳞癌组织中cFLIP及TBX2的阳性表达率明显高于不典型组织及正常组织。cFLIP及 TBX2的表达水平与患者性别、部位之间的差异无统计学意义（P＞0.05），而肿瘤TNM分期及淋巴结转移的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 cFLIPL及TBX2在颅内外鳞癌中的表达水平较高，两者可能在鳞癌发生、发展中发挥重要作用。
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cFLIP在压力超负荷诱导的心肌肥厚及纤维化中的作用
目的 利用基因工程小鼠研究细胞型Fas相关死亡区域蛋白样β白介素-1转换酶抑制蛋白基因(cFLIP)在压力超负荷诱导的心肌肥厚及心肌纤维化中的作用.方法 cFLIP杂合子小鼠(heterozygote,HZ)和cFLIP野生型小鼠( wild type,WT)各20只分别随机分为模型组和假手术组,每组10只.主动脉缩窄术建立小鼠心肌肥厚模型,术后4周超声检测小鼠心室腔大小及左室短轴缩短率,组织病理学方法评价心肌肥厚及纤维化程度,实时定量聚合酶链式反应在mRNA水平检测心肌肥厚标志物心钠肽,脑钠肽,β-MHC以及心肌纤维化标志物结缔组织生长因子(CTGF),Ⅰ、Ⅳ型胶原(collagenⅠ,Ⅳ),TGF-β1.结果 术后4周,HZ模型组较WT模型组和HZ假手术组心室腔增大,左室短轴缩短率下降(P＜0.05,n=10);心肌肥厚及纤维化组织病理学检测及相关标志物表达水平模型组较假手术组升高(P＜0.05,n=10),而HZ模型组表达增加程度较WT模型组更为显著(P＜0.05,n=10).结论 cFLIP可抑制心肌肥厚及纤维化,对心功能起保护作用.
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cFLIP与HPV-16 E7在宫颈组织中的表达及其相互关系
目的 检测宫颈病变组织中cFLIP与人乳头瘤病毒-16E7(HPV-16 E7)的表达,并研究二者在宫颈组织恶性转化过程中的作用及其相互关系.方法 应用免疫组化SP染色法检测40例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(cervical in-traepithelial neoplasia,CIN)及20例宫颈炎组织中HPV-16 E7与cFLIP的表达情况.结果 cFLIP在宫颈癌、CIN及官颈炎组织中的阳性表达率分别为92.50%、70.00%及30.00%,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05);3种宫颈组织中HPV-16 E7的阳性表达率分别为82.50%、75.00%及60.00%,两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05).eFLIP、H[PV-16 E7表达阳性率与宫颈癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无明显关系(均P>0.05).cFLIP表达与HPV-16 E7表达呈正相关(r=0.268,P=0.02).结论 cFLIP在宫颈癌组织中特异性高表达,可能通过抗凋亡作用及逃避免疫监视影响机体对HPV感染的免疫反应,并可能协同HPV-16 E7影响细胞生长周期,在宫颈癌的恶性转化过程中共同促进肿瘤的发生、发展.
关键词： 人乳头瘤病毒-16E7 cFLIP 宫颈癌 宫颈上皮内瘤变 -
cFLIP与TRAIL调控凋亡的研究进展
TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand)为TNF超家族成员,与特定受体结合后通过死亡受体通路诱导细胞凋亡.cFLIP(cellular Fas-associated death domain-like IL-1 beta-converting enzyme inhibitory protein)为一类在多物种包括哺乳动物细胞中广泛存在的凋亡抑制蛋白,抑制TRAIL诱导的凋亡.TRAIL与cFLIP分别发挥诱导凋亡与抑制凋亡作用,在生理和病理状态下具有不同意义.
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非小细胞肺癌组织中cFLIP和P53蛋白的表达
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中cFLIP、P53蛋白的表达及意义.方法 采用免疫组化方法检测56例NSCLC组织和16例肺良性病变中cFLIP、P53蛋白表达情况,分析二者在肺癌组织学分型、分化程度、临床分期和淋巴结转移方面表达差异及其相关性.结果 56例NSCLC标本中cFLIP和P53阳性表达率分别是58.9%(33/56)、62.5%(35/56),肺良性病变组织标本中阳性率分别是18.75%(3/16)和0%.cFLIP和P53在Ⅰ、Ⅱ期、无淋巴结转移组中的表达分别低于Ⅲ、Ⅳ期和淋巴结转移组,而在病理组织学分型和不同分化组间无统计学意义.cFLIP和P53在肺癌组织中的表达呈正相关(r=0.328,P＜0.05).结论 cFLIP和P53可以作为肺癌预后的评价指标,P53对cFLIP的表达可能有调控作用.
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cFLIP在肝细胞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨肝病变组织中cFLIP与HBX的表达、相互关系及临床意义.方法 免疫组织化学SP染色法检测120例肝癌、120例肝硬化组织及40例正常肝组织中cFLIP与HBX的表达情况.结果 cFLIP及HBX在正常肝组织、肝硬化与肝癌组织中的表达均依次增强(P＜0.05).Child A级组与Child B、C级组及肝癌组比较cFLIP表达有显著性差异(P＜0.05),肝癌组与Child B、C级组比较无显著性差异(P＞0.05).cFLIP表达阳性率与肝癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关.Child B、C级组中HBX(+)组cFLIP阳性表达率高于HBX(-)组的表达率(P＜0.0)5);肝癌、Child A级肝硬化组织中HBX(+)组和HBX组cFLIP阳性表达率无显著性差异(P ＞0.05).结论 cFLIP与HBX在肝癌组织中特异性高表达,cFLIP的特异性高表达是肝癌变的一个早期事件,并可能协同HBX在肝癌癌前病变向宫颈癌的发展过程中起重要作用,共同促进肿瘤的发生.
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脂质体介导FLICE抑制蛋白反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡
背景与目的:FLICE抑制蛋白基因在凋亡信号传递中发挥重要作用,研究靶向cFLIP的反义基因治疗药物可能为临床治疗胃癌提供新的方法和思路.本研究拟探讨cFLIP反义寡核苷酸对人胃癌细胞株BGC823凋亡的影响.方法:以脂质体Lipofectame2000为载体,介导cFLIP反义寡核苷酸片段导入胃癌细胞株BGC823.RT-PCR和Western blot方法检测cFLIPL/s mRNA和蛋白在HeLa、BGC823细胞中的表达;以cFLIP基因翻译起始区为靶点,人工合成20个碱基全硫代修饰的反义寡核苷酸,脂质体介导转染BGC823细胞后,MTT法检测细胞抑制率;原位末端标记、流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测蛋白表达变化.结果:cFLIP mRNA的2种拼接体和表达蛋白在HeLa、BGC823细胞中呈阳性表达.MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖,其抑制作用随浓度增加而增强;TUNEL检测可见阳性染色;流式细胞仪分析发现在G1峰前出现凋亡峰;Western blot检测可见cFLIPL和cFLIPs蛋白表达显著下降.结论:cFLIPL/s mRNA和蛋白在HeLa、BGC823细胞中表达.脂质体介导反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制cFLIPL/s蛋白表达,促进凋亡.
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甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及其相关机制.方法 采用Hoechst33258染色技术检测甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响,并采用RT-PCR方法在mRNA水平研究cFLIP基因在甲基硫代腺苷诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡过程中的作用.结果 甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞具有明显促进凋亡作用.在这一过程中,cFLIP基因在mRNA水平上出现明显下调情况.绪论甲基硫代腺苷对HCT116细胞具有明显凋亡诱导作用.cFLIP基因的下调可能起到了重要作用.
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BAK、cFLIP在子宫内膜异位症中的表达及临床意义
目的：探讨凋亡相关基因BAK、cFLIP在EMs组织中的表达情况及其生物学行为的相关关系。方法：采用免疫组化的方法检测40例正常子宫内膜、40例卵巢EMs 患者的在位内膜及异位内膜中的BAK、cFLIP基因蛋白的表达情况。结果：BAK、cFLIP基因蛋白在三组子宫内膜细胞都有表达； BAK基因蛋白在异位内膜组、在位内膜组及正常内膜组阳性表达率及阳性表达强度呈递增表达，而cFLIP呈递减表达，差异有显著性（P＜0．05）；分泌期正常内膜组BAK 基因蛋白阳性表达率及阳性表达强度显著高于增殖期，而cFLIP则相反（P＜0．05），在位内膜组、异位内膜组的增殖期与分泌期的BAK、cFLIP基因蛋白表达差异无显著性（P ＞0．05）；异位内膜组和在位内膜组中 BAK 基因蛋白表达率及阳性表达强度重度组（Ⅲ～Ⅳ期）明显低于轻度组（Ⅰ～Ⅱ期），而cFLIP的表达则相反（P＜0．05）。异位内膜组织中BAK与cFLIP表达水平呈负相关（r＝-0．389，P＜0．05）。结论：BAK、cFLIP的负相互作用，参与了EMs 凋亡与增殖紊乱过程，在EMs的诊断和治疗中具有重要意义。
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cFLIP、FADD在宫颈癌组织中的表达及意义
目的:研究cFLIP、FADD在宫颈癌组织中的表达,探讨cFLIP、FADD在宫颈癌发生、发展中的作用及其临床意义.方法:采用免疫组化(SP法)检测64例宫颈癌、15例CIN、12例慢性宫颈炎病例以及10例正常宫颈组织中cFLIP、FADD蛋白的表达,并检测宫颈癌中增殖细胞核抗原标记指数(PCNA-LI).结果:cFLIP、FADD在宫颈癌中的表达与CIN、慢性炎症组及正常组中的表达差异有显著意义(P＜0.01),宫颈癌组织中同时出现cFLIP的高表达和FADD的低表达.cFLIP的表达水平与PC-NA-LI呈正相关(r1=0.7738,P＜0.01),FADD的表达水平与PCNA-LI成负相关(r2=-0.8011,P＜0.01).进一步分析发现,在宫颈癌中,肿瘤细胞分化越差,临床分期越晚,以及伴有癌细胞转移的淋巴结中,cFLIP高表达,而FADD低表达.cFLIP、FADD的表达与患者年龄、组织学分型无关.结论:cFLIP、FADD与宫颈癌的发生、发展和转移密切相关,可能是治疗宫颈癌的潜在靶点.
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cFLIP反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞SW620的增殖
目的 研究cFLIP反义寡核苷酸(cFLIP-asODN)对人结肠癌细胞株SW620细胞增殖的影响.方法 利用脂质体将cFLIP-asODN转染入SW620细胞,并设空载体+cFLIP-asODN转染组、脂质体+无意义ODN转染组和空白对照组作为对照.荧光倒置显微镜检测复合物对细胞的转染效率;荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中cFLIP mRNA和蛋白的表达水平的变化;MTT法分析复合物对SW620细胞增殖的影响;流式细胞术分析转染后细胞凋亡情况.结果 与空载体+cFLIP-asODN转染组、脂质体+无意义ODN转染组和空白对照组相比,脂质体递送cFLIP-asODN进入细胞后,SW620细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05);转染cFLIP-asODN后,SW620细胞中的cFLIP mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05);且细胞凋亡率(29.5±2.4)%也明显高于空载体+cFLIP-asODN转染组(5.8±0.7)%、脂质体+无意义ODN转染组(5.5±0.8)%和空白对照组(5.2±0.5)%(P<0.05).结论 通过在体外转染cFLIP-asODN可有效抑制结肠癌细胞株SW620的增殖.
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cFLIP与人类疾病
cFLIP[Fas-associated death domain-like interleukin-1β-converting enzyme(FLICE)-like inhibitory protein]是近来发现的一种含有死亡结构域的蛋白质.cFLIP的适量表达水平对人体多个生理环节至关重要,而其异常表达却与人类多种疾病密切相关.本文对cFLIP的特点及其与人类多种疾病的关系进行综述,探讨cFLIP在人类疾病中的作用,为临床治疗这些疾病提供新的思路及有效的治疗策略.
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cFLIP与卵巢癌
卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤之一,它的发生发展及其化疗耐药性是多基因参与的复杂过程.卵巢癌的多药耐药性是当前卵巢癌化疗面临的主要问题,现有化疗方案及联合基因治疗策略均难以达到完全逆转耐药性的目的.有效地逆转或克服多药耐药性是卵巢癌领域研究的热点与难点.随着分子生物学技术的发展,医学界正努力从基因、蛋白质水平上探寻新的分子机制及药物作用靶点.
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脂质体介导的cFLIP反义寡核苷酸对肾细胞癌的凋亡作用
目的 探讨cFLIP反义寡核苷酸(ASODN)对肾细胞癌的抑制作用.方法 设计合成cFLIP的ASODN,按不同浓度在脂质体介导下转染786-0肾癌细胞株,设无义(NSODN)和空白对照组进行比较.观察细胞的生长状态,Western blot检测cFLIP 蛋白的表达,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测其凋亡率.结果 与NSODN、空白对照组比较,ASODN组cFLIP蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞抑制率(分别为10μmol/L组34.20%,20μmol/L组39.50%)显著增高,上述效应呈浓度依赖性;镜下观察ASODN转染细胞代谢衰退,当转染浓度至20/μmol/L时,其凋亡率(56.11%)显著高于空白对照组(7.29%)和NSODN(4.69%)组.结论 ASODN能特异性封闭肾癌细胞cFLIP基因的表达,并可抑制肾癌细胞的增殖,诱导其凋亡.
关键词： 肾癌 TRAIL cFLIP 反义寡核苷酸(ASODN) 凋亡
