补肾活血颗粒对帕金森病模型大鼠黑质和纹状体中Fas、FADD表达的影响

目的 探讨补肾活血颗粒对帕金森病模型大鼠黑质、纹状体中Fas、FADD表达的影响.方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组10只和造模组50只,采用6-羟基多巴胺注射造模.造模成功的23只随机分为模型组10只和观察组13只.观察组给予补肾活血颗粒灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃.应用免疫组化染色技术观察大鼠黑质、纹状体中Fas和Fas死亡结构域蛋白(FADD)表达的变化情况.结果 模型组Fas在黑质阳性细胞表达率(PI)为(1.400±0.070),纹状体PI为(1.820 ±0.090),均高于正常组和观察组(P＜0.01).模型组FADD在黑质PI为(1.160±0.058),纹状体PI为(0.780±0.040),均高于正常组和观察组(P＜0.01).结论 补肾活血颗粒治疗帕金森病的疗效机制可能与下调Fas和FADD表达有关.

FADDDEL-GFP基因修饰在小鼠胰岛细胞移植中的作用

目的 探讨融合蛋白FADDDEL-GFP在胰岛细胞移植治疗1型糖尿病中的作用.方法 将重组子FADDDEL-GFP导入胰岛细胞NIT-1,检测基因转染前后胰岛细胞分泌胰岛素的水平.用STZ诱导1型糖尿病模型小鼠,将FADDDEL-GFP修饰的NIT-fg细胞移植于糖尿病小鼠,检测胰岛细胞移植后对糖尿病小鼠的影响.结果 转染重组子FADDDEL-GFP的NIT-1可见绿色荧光蛋白表达;移植NIT-fg细胞的精尿病小鼠血糖降至正常,生存期延长,与对照组有明显差异.结论 FADDDEL-GFP可增强机体抗同种移植排斥反应的能力.

食管上皮癌变过程中FAS、FASL、FADD和caspase-8的表达及其意义

目的 研究细胞凋亡调控因子FAS、FASL、FADD和caspase-8基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义.方法 用免疫组化SP法检测食管黏膜中FAS、FASL、FADD和caspase-8的表达;原位杂交法检测食管黏膜中FADD mRNA和caspase-8 mRNA的表达.结果 从食管正常黏膜组织到不典型增生和食管癌组织,FAS蛋白表达率呈逐渐下降趋势,FASL蛋白表达率呈逐渐上升趋势,食管癌与正常组织之间差异明显(P＜0.05).高、中分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于低分化鳞癌(P＜0.05).从食管正常黏膜组织到不典型增生和食管癌组织,FADD和caspase-8蛋白及RNA阳性表达率呈逐渐下降趋势,食管癌与正常黏膜组织之间差异明显(P＜0.01);caspase-8蛋白和mRNA在高、中分化鳞癌中的表达率高于低分化鳞癌(P＜0.05).结论 FAS与FASL的表达失衡与食管癌的发生、发展有密切关系,并与食管癌的分化和免疫逃避有关.FADD与caspase-8基因表达异常在食管癌的发生、发展中可能起着重要作用.

FADD,Caspase-8的表达缺失在肝细胞癌TRAIL耐受机制中的作用

目的:探讨FADD和Caspase-8表达缺失在肝细胞癌TRAIL耐受机制中的作用.方法:免疫组织化学方法检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中FADD蛋白的表达,原位杂交方法检测H C C中Caspase-8的表达,并结合临床资料进行分析.采用TRAIL联合应用亚毒性剂量的化疗药及细胞因子,观察其对于肝癌细胞株(HepG2、SMMC-7721)的胞毒作用,荧光分光光度计检测Caspase-8活性变化,Western blot检测FADD表达的变化.结果:60例HCC中FADD阳性率,显著低于癌旁肝组织FADD阳性率(25% vs 70%,P<0.01);HCC中33例Caspase-8表达阳性率,低于癌旁组织阳性率(19/20,95%).亚毒性剂量的化疗药(丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、放线菌素D)可显著增强TRAIL的细胞毒活性,治疗后Caspase-8活性及FADD表达量显著增高.结论:HCC中FADD、Caspase-8的表达下调可能参与TRAIL耐受的机制,化疗药物可通过上调FADD的表达、增强Caspase-8活性来加强TRAIL的抗癌作用.

AIM To investigate the clinical features of FADD and TRADD expressions in primary hepatocellular carcinoma ( HCC ) and to determine their relationship with hepatic apoptosis.METHODS FADD and TRADD expressions were detected by immunohistochemistry and hepatic apoptosis were determined by in situ endlabeling ( ISEL).RESULTS Ten (25.6%) cases of HCC were detected to express FADD protein. The positive rate in HCC is lower than that in non-cancerous adjacent liver tissues (62.5%) (P＜0.05). In those of grade Ⅰ - Ⅱ, 8 (38.1%) cases were FADD positive, while only 2/18 (11. 1%) cases of grade Ⅲ - Ⅳ had detectable FADD protein (P＜0.05). No relationship was found between FADD expression and other clinical features,such as gender, age, tumor size, differentiation or metastasis. ISEL positive cells can be seen in all cases of HCC. The hepatic apoptosis was associated with FADD expression as more apoptotic cells were detected in those cases which had moderately to strongly positive FADD, as compared with negative or weak positive FADD cases (P＜ 0.05). No relationship was found between FADD expression and hepatic apoptosis in non-cancerous adjacent liver tissues. Fifteen of 39 (38.5%) cases of HCC were found positive for TRADD protein, and similar positive rate (37.5%) in non-cancerous adjacent liver tissues (P ＞0.05). The expression of TRADD is correlated with HCC differentiation,as only 22.2% of moderately to highly differentiated HCC showed positive TRADD protein, while as high as 52.4% of poorly differentiated HCC had TRADD (P＜0.05). No relationship was found between TRADD expression and gender, age, tumor size or grade or metastasis, although 42.9% of HCC of grade Ⅰ/Ⅱ showed positive TRADD which was slightly higher than that of grade Ⅲ/Ⅳ (33.3%,P ＞ 0.05). Hepatic apoptosis was not related to TRADD expression in HCC or non-cancerous adjacent liver tissues.CONCLUSION Loss of FADD expression plays an important role in HCC carcinogenesis, and expression of TRADD also contributes to HCC development. The cell apoptosis in HCC is associated with FADD expression. However, the expression of TRADD does not correlate well with hepatic apoptosis in HCC.

骨肉瘤组织FLIP和FADD及Caspase-8蛋白表达与细胞凋亡相关性的研究

目的:探讨FLIP、FADD和Caspase-8在人骨肉瘤组织及骨软骨瘤组织中的表达及其与骨肉瘤细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组化法检测FLIP、FADD和Caspase-8蛋白在43例骨肉瘤组织及30例骨软骨瘤组织中的表达,并经图像分析系统检测FLIP、FADD和Caspase-8蛋白的平均光密度(OD)值.用激光扫描共聚焦显微镜检测骨肉瘤及骨软骨瘤中细胞凋亡分布情况并对各因子之间进行相关性分析.结果:FLIP蛋白阳性物质在骨肉瘤中的表达高于骨软骨瘤,P<0.05;而FADD 和 Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达低于骨软骨瘤,P<0.05.FLIP和Caspase-8蛋白在骨肉瘤中表达呈负相关,r=-0.843,P<0.05;而FLIP、FADD蛋白在骨肉瘤中表达无相关性.骨肉瘤组细胞凋亡指数(AI) 显著低于骨软骨瘤组,P<0.05;FLIP蛋白表达与细胞凋亡指数呈负相关,r=-0.726,P<0.05;而Caspase-8蛋白表达与骨肉瘤细胞凋亡呈正相关,r=0.446,P<0.05; FADD蛋白表达与与凋亡指数无相关性.结论:FLIP蛋白对骨肉瘤细胞凋亡有抑制作用,Caspase-8蛋白在骨肉瘤中呈低表达,抑制了肿瘤细胞凋亡.如能抑制FLIP的表达,促进Caspase-8的表达,可提高骨肉瘤细胞对凋亡的敏感性.

依达拉奉对脑缺血再灌注后FADD、caspase-8表达的影响

目的 研究大鼠脑缺血再灌注后Fas相关死亡域蛋白(FADD)、caspase-8蛋白的表达及依达拉奉对其的影响. 方法 用免疫组化法测定缺血2 h后再灌注不同时相缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达.结果 缺血半暗带皮质内FADD、caspase-8蛋白的表达于缺血再灌注后3 h明显上升, 再灌注12 h达高峰(P＜0.01), 至再灌后24 h明显下降.依达拉奉能显著下调其表达(P＜0.01, P＜0.05). 结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带FADD、caspase-8蛋白的表达均明显增加, 提示二者可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用, 依达拉奉可能通过抑制其表达而达到脑保护的作用.

FADD、IPO-38与肿瘤的研究进展

通过查阅大量国内外文献，对FADD、IPO-38与肿瘤的研究进展加以综述，以期为人为调控和干预细胞凋亡通路、干预细胞增殖并发现新的相关疾病治疗策略提供科学依据，尤其为恶性肿瘤的基因靶向治疗方面提供新的思路。

维生素E琥珀酸酯诱导人胃腺癌细胞凋亡途径

目的探讨维生素E琥珀酸酯(VES)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的死亡受体(Fas)信号转导途径.方法人胃腺癌SGC-7901细胞经不同剂量VES(5,10,20 μg/ml)处理,同时做琥珀酸、维生素E和空白对照,采用DAPI(4,6-贰脒基-2-苯基吲哚)荧光染色法观察细胞凋亡情况,用Western Blot法检测Fas、带有死亡结构域的Fas相关蛋白(FADD)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-8)蛋白表达情况,Fas和FADD反义寡聚核苷分别转染SGC-7901细胞后,用荧光法检测caspase-8活性.结果经VES处理后的细胞DAPI染色可见凋亡的形态学改变,20 μg/ml VES处理48h后的细胞凋亡率为89.6%;VES处理48h后Fas、FADD和caspase-8蛋白表达明显增加,且呈剂量-效应关系;阻断Fas可明显抑制FADD蛋白表达,Fas和FADD反义寡聚核苷转染细胞后caspase-8活性明显降低(P<0.01),其中阻断Fas的效果高于阻断FADD.结论维生素E琥珀酸酯诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡过程中启动了Fas信号转导途径,VES启动Fas后,FADD将Fas和caspase-8联接起来,活化caspases级联反应,从而构成Fas/FADD/caspase-8的凋亡信号途径.

Fas相关死亡域蛋白在增生性瘢痕组织中原位表达及意义

目的探讨Fas相关死亡域蛋白(FADD)在增生性瘢痕(HS)各个时期的表达变化以及与HS演变的关系.方法采用原位杂交与图像分析系统相结合的方法,定量观察FADD在HS各个时期的表达变化.结果FADD在HS成熟期的表达量是增殖期的2倍,是消退期的5倍;FADD阳性信号主要见于表皮棘层、真皮网状层,以及部分血管.结论FADD表达与增生性瘢痕演变密切相关.

Caspase信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨Caspase信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法 RT-PCR检测经双歧杆菌LTA处理后,结肠癌Lovo细胞中MyD88和FADD mRNA的表达变化;Annexin V检测经Caspase通用抑制剂(Z-Val-Ala-Asp-FMK)预先处理后,双歧杆菌LTA诱导结肠癌Lovo细胞凋亡率的变化;荧光法检测经双歧杆菌LTA处理后,Lovo细胞中Caspase-8活性的变化.结果 经双歧杆菌LTA处理后, Lovo细胞中MyD88的mRNA表达明显升高(P＜0.05),而FADD信号分子的mRNA表达无明显变化;双歧杆菌LTA能够增强Lovo细胞中Caspase-8的活性(P＜0.05),且其诱导Lovo细胞凋亡的作用能够被Caspase抑制剂所抑制(P＜0.05).结论 MyD88信号分子在双歧杆菌LTA诱导Lovo细胞凋亡中可能起着承接上游分子TLRs与下游信号分子FADD的作用;而Caspase信号通路可能是双歧杆菌LTA诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的主要信号传导途径.

融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的胰岛细胞凋亡的影响

目的:研究融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的细胞凋亡信号的生物学效应,以探讨通过基因修饰靶细胞对1型糖尿病的影响.方法:用脂质体将融合基因pFADDdel-GFP导入胰岛细胞株NIT,通过细胞RT-PCR和荧光显微镜检测其表达,采用FACS检测抗-Fas抗体诱导的胰岛细胞株的细胞毒效应.结果:转染重组子pFADDdel-GFP的NITf-g细胞可见绿色荧光蛋白表达;MTf-g细胞对抗-Fas诱导的细胞损伤率为10.16%,细胞内的Caspase-3的活性为12.33%,均明显低于对照组(P＜0.05).结论:成功建立了稳定表达FADDdel-GFP的胰岛细胞株;FADDdel-GFP可有效抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导.

FADD在非小细胞肺癌组织中的表达及与癌细胞凋亡的关系

目的 探讨FADD在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床生物学意义,并探讨其与NSCLC癌细胞凋亡的关系.方法 采用免疫组化SP法分别检测55例肺癌组织及23例癌旁正常肺组织中FADD的表达,TUNEL法检测NSCLC中癌细胞凋亡.结果 55例NSCLC组织中FADD表达的阳性率为83％,23例正常肺组织中FADD表达的阳性率为91％,差异无统计学意义(P＞0.05).NSCLC中FADD表达程度与肿瘤的分化程度呈正相关(rs =0.483,P=0.000),与肿瘤的TNM分期呈负相关(rs=-0.404,P=0.002).NSCLC中FADD阳性表达率与肿瘤的分化程度、TNM分期有关(均P＜0.01).与肿瘤的性别、年龄、是否吸烟、肿块大小、病理分型、淋巴结转移、胸腔积液无关.所选36例NSCLC中均检测到癌细胞的凋亡,FADD蛋白中等阳性、强阳性的NSCLC中癌细胞凋亡程度较高,而阴性表达的NSCLC中凋亡程度较低.结论 FADD表达异常在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用,FADD表达水平与NSCLC细胞凋亡密切相关.

脑缺血鼠溶栓前后FADD和FAP-1在大脑皮层细胞中表达的意义

目的探讨Fas相关死亡蛋白(FADD)和Fas相关磷酸酶-1(FAP-1)在大鼠缺血后脑细胞中的阳性表达与溶栓疗效的关系.方法免疫组化方法观察大鼠脑局灶性缺血后脑细胞中上述两种物质的分布.结果缺血后大鼠脑皮层锥体细胞中阳性表达明显,溶栓前促、抑细胞调亡的FADD、FAP-1的活化和超量表达,溶栓后大脑皮层神经细胞阴性表达,细胞变性、坏死明显改善.结论大鼠缺血性损伤可引起脑细胞调亡,细胞变性、坏死的程度与脑缺血持续时间呈正相关;缺血早期溶栓可提高血管再通率,促进脑缺血的预后.

FLIP、FADD在上皮性卵巢癌中表达及其临床意义

目的:研究FLIP、FADD在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,探讨二者在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及其临床意义.方法:采用免疫组化SP法及RT-PCR法检测44例上皮性卵巢癌及17例正常卵巢组织中FLIP、FADD的表达,并检测上皮性卵巢癌中PCNA的表达,分析FLIP,FADD表达与上皮性卵巢癌临床病理参数及PCNA表达的关系.结果:FLIP、FADD在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率,与正常卵巢组织相比,差异有统计学意义(P<0.05). FLIP,FADD表达与上皮性卵巢癌病理分级及临床分期有关,FLIP、FADD在Ⅰ-Ⅱ期中的阳性表达率,与Ⅲ-Ⅳ期相比,差异有统计学意义(P<0.05). FLIP、FADD在病理组织学-1级中的阳性表达率,与2-3级相比,差异有统计学意义(P<0.05).FLIP、FADD的表达与患者年龄、组织学分型及淋巴结转移无关.上皮性卵巢癌组织中FLIP表达与PCNA表达成线性正相关,r分别0.880和0.564;FADD表达与PCNA表达成线性负相关,r分别为-0.591和-0.683.结论:FLIP、FADD与上皮性卵巢癌的发生发展密切相关,可能是治疗上皮性卵巢癌的潜在靶点.

槲皮素对脑缺血再灌后FADD蛋白表达的影响

目的 研究大鼠脑缺血/再灌后Fas相关死亡域蛋白(FADD)的表达及槲皮素对其影响.方法 用免疫组化法测定缺血2 h再灌注不同时相缺血半暗带FADD蛋白的表达.结果 缺血半暗带脑皮质内FADD蛋白的表达于再灌注3 h明显升高,再灌注12 h达高峰(P＜0.01),至再灌注24 h其表达明显下降.槲皮素能显著下调其表达(P＜0.01～0.05).结论 脑缺血/再灌后缺血半暗带FADD蛋白表达明显增加,提示可能在脑缺血/再灌注损伤中发挥重要作用.槲皮素可能通过抑制其表达从而达到脑保护的作用.

白藜芦醇对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的研究

目的 研究白藜芦醇对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的作用及其机制.方法 利用免疫组织化学法检测白藜芦醇对肿瘤细胞中Fas、FasL、FaDD蛋白表达的影响；分光光度法检测肿瘤细胞中Caspase-8、Caspase-3量的影响.结果 高剂量组对肿瘤细胞Fas活性、中、高剂量组对肿瘤细胞FasL、FaDD活性均具有明显的上调作用；中、高剂量组对肿瘤细胞中Caspase-8和Caspase-3活性具有明显的上调作用,低剂量组仅对肿瘤细胞中Caspase-3活性具有上调作用.结论 白藜芦醇可能通过Fas-FasL途径诱导S180荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡.

转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用

目的 研究转染FADD缺失突变体(FADDdel)和WeelHu/GFP的胰岛β细胞株(NIT细胞)抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响.方法 采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度.将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu/GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养,利用51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用.结果 转染WeelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化(P＞0.05).转染pCMV-WeelHu/GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞(P＜0.01),表达WeelHu或WeelHu/GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义,转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用(P＜0.05),但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤,且对胰岛素的分泌及细胞增殖无明显影响.

FADD在脑缺血鼠大脑皮质锥体细胞中表达

目的:探讨在Fas死亡区内的相关蛋白(Fas-associated protein with death domain,FADD)在大鼠局灶性缺血损伤中的表达及其与缺血性神经细胞损伤的关系.方法:用免疫组化法观察大鼠局灶性脑缺血损伤后脑组织中的FADD蛋白免疫反应阳性细胞分布.结果:脑缺血组大鼠脑内发现FADD的免疫阳性表达细胞以大脑皮质锥体细胞、神经轴突、神经胞体较明显,分布于患侧大脑皮质、基底节、海马等部位.结论:FADD的活化及超量表达可能介导缺血神经细胞信号传导过程,并参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理生理过程.

人FADD基因诱导粘液表皮样癌细胞凋亡的研究

目的观察人FADD基因对涎腺粘液表皮样癌细胞(MEC-1)的诱导凋亡作用.方法通过反转录PCR获取人FADD基因,将基因克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pIRES2-EGFP中,阳离子脂质体法转染粘液表皮样癌细胞,通过细胞记数、荧光显微镜及电镜观察、流式细胞仪等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况.结果与对照组相比,在转染1～3天内,FADD基因的表达导致粘液表皮样癌细胞存活数目减少,大量细胞发生凋亡.结论人FADD基因可以有效地诱导转染的粘液表皮样癌细胞凋亡.