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力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长
观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性.采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用.利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变.采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况.建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,观察LDM的体内抗肿瘤活性.LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞VEGF蛋白的表达,抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长.LDM剂量0.02和0.04 mg*kg-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01).LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长.
关键词： 力达霉素 人胃癌BGC823细胞 血管内皮生长因子 凋亡 -
Chk1与Chk2高表达对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响
目的:在建立Chk1/2基因高表达人胃癌BGC823细胞的基础上,探讨Chk1/2基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用.方法:采用流式细胞术检测DADS作用于Chk1/2高表达BGC823细胞周期分布情况.Western blot检测Chk1、p-Chk1、Chk2、p-Chk2、Cdc25C与Cyclin B1表达变化.结果:流式细胞术显示,Chk1高表达组G2/M期细胞较对照组与空载体组增加(P<0.05).而15 mg·L-1 DADS处理后,各组G2/M期细胞较处理前增加,Chk1高表达组较空载体组差异有统计学意义(P<0.05).Chk2高表达组G2/M期细胞较对照组与空载体组差异无统计学意义(P>0.05).而DADS处理Chk2高表达组后,G2/M期细胞较对照组与空载体组差异有统计学意义(P<0.05).Western blot显示,Chk1/2蛋白及p-Chk2表达水平不受DADS的影响,但p-Chk1呈时间依赖性上调(P<0.05).DADS处理Chk1高表达BGC823细胞12、24、36、48 h后,Cdc25C磷酸酶与Cyclin B1表达较对照组呈时间依赖性下降(P<0.05).结论:DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期与激活Chk1/Cdc25C/Cyclin B1通路有关.Chk1高表达可增强DADS阻滞G2/M期细胞的作用,而Chk2高表达对DADS无影响.
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沉默Chk1基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响
目的:探讨沉默Chk1基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用.方法:采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk1基因,q-PCR与Western blot检测Chk1 mRNA与蛋白表达.流式细胞术检测DADS作用与Chk1基因沉默BGC823细胞周期分布情况.Western blot检测Cdc25C与cyclinB1表达.结果:流式细胞术显示,15 mg·L-1DADS作用BGC823细胞12、24、36、48 h后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P＜0.05).Chk1沉默BGC823细胞Chk1 mRNA与蛋白表达下调(P＜0.05).沉默Chk1后,G2/M期细胞较对照组降低(P＜0.05).DADS处理后,对照组G2/M细胞高于Chk1沉默组(P＜0.05).Chk1基因沉默后Cdc25C和CyclinB1表达较对照组增加(P＜0.05).DADS处理对照组后,Cdc25C和CyclinB1表达较未处理组降低(P＜0.05).DADS处理Chk1沉默组Cdc25C和CyclinB1表达较Chk1沉默下调(P＜0.05).结论:Chk1沉默可通过促进Cdc25C和CyclinB1表达减弱DADS阻滞G2/M的作用,DADS阻滞G2/M的检查点是Chk1.
关键词： 人胃癌BGC823细胞 二烯丙基二硫 chk1 基因沉默 G2/M期 -
白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用
目的观察白屈菜红碱(chelerythrine)对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法通过MTT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果MTT实验显示白屈菜红碱抑制BGC823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期.结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性.
关键词： 白屈菜红碱 增殖抑制 凋亡诱导 人胃癌BGC823细胞 -
干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响
背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关.但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道.该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制.方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况.结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达.RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降.细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制.结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移.
关键词： LASP1 人胃癌BGC823细胞 增殖 迁移和侵袭 -
顺铂与三甲氧基二苯乙烯对胃癌BGC823细胞作用的研究
目的:研究三甲氧基二苯乙烯与顺铂对人胃癌BGC823细胞的抑制作用.方法:设空白对照组、顺铂治疗组、三甲氧基二苯乙烯治疗组、顺铂及三甲氧基二苯乙烯联合治疗组.用MTT法测定顺铂和三甲氧基二苯乙烯对细胞的抑制作用;用电镜、流式细胞仪观察其细胞变化.结果:顺铂与三甲氧基二苯乙烯合用,细胞存活率较单用时明显降低.顺铂100 μg/L细胞存活率为(67.23±8.91)％,三甲氧基二苯乙烯100 μg/L细胞存活率为(51.42±9.56)％;细胞存活率在合并用药时细胞存活率明显下降,顺铂10 μg/L和三甲氧基二苯乙烯10 μg/L的细胞存活率为(43.62±8.34)％,浓度150 μg/L时细胞存活率低为(17.33±7.93)％.联合用药后,顺铂使用量的IC50是(110.0±9.8) μg/L,三甲氧基二苯乙烯使用量的IC50是(18.0± 10.0) μg/L,增效倍数分别为2.51、4.03合并指数CI50是0.58,CI50＜0.95.细胞生长多停滞在S期(58.0±4.0)％.结论:顺铂对胃癌BGC823细胞有抑制作用,少量的顺铂与三甲氧基二苯乙烯合用后可达到大剂量顺铂单药化疗的效果,产生了协同作用.
关键词： 胃肿瘤/病理学 顺铂 三甲氧基二苯乙烯 人胃癌BGC823细胞 -
沉默Chk2基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响
细胞周期检测点激酶1/2(Chk1/2)在参与G2/M期起着重要作用,本研究探讨沉默Chk2基因对二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞的影响.采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk2基因,q-PCR与Western blot检测Chk2 mRNA与蛋白表达.流式细胞术检测DADS与Chk2沉默BGC823细胞周期分布情况.Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达.流式细胞术显示,DADS作用BGC823细胞后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P<0.05).Chk2沉默BGC823细胞Chk2 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05).Chk2沉默组G2/M期细胞较对照组差异无显著性(P>0.05).DADS处理Chk2沉默组与对照组后,两者G2/M期细胞差异无显著性(P>0.05),而较未处理前有明显差异(P<0.05).Chk2沉默后,CDC25C和CyclinB1表达较对照组无明显差异(P>0.05).但是,DADS处理对照组与Chk2沉默组后,CDC25C和CyclinB1表达较处理前明显降低(P<0.05).表明Chk2沉默对DADS阻滞BGC823细胞G2/M作用没有影响,DADS阻滞G2/M的检查点可能不是Chk2.
关键词： 人胃癌BGC823细胞 二烯丙基二硫 Chk2 基因沉默 G2/M期 -
Chk1和Chk2高表达人胃癌BGC823细胞的建立与鉴定
细胞周期检测点Chkl和Chk2在参与G2/M期起着重要作用,本研究构建Chk1/2的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌BGC823细胞,进一步证明Chk1/2高表达对BGC823细胞G2/M期的影响.根据NCBI GenBank Chk1/2基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点.从人胃癌细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序对重组质粒进行鉴定.用脂质体将重组质粒转染BGC823细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物.结果显示,菌落特异性PCR表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,经测序与NCBIBLAST分析证实为Chk1和Chk2基因.稳定转染空载体pcDNA3.1的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的BGC823细胞,经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在BGC823细胞中的表达较对照组与空载体组明显增加(P<0.05).流式细胞术检测显示,Chk1转染组G2/M细胞较对照组与空载体组明显增加(P<0.05),而Chk2转染组G2/M细胞无明显差异(P>0.05).上述结果表明,成功构建pcDNA3.1/Chk1与pcDNA3.1/Chk2真核表达载体和Chk1与Chk2高表达的BGC823细胞,Chk1高表达可阻滞BGC823细胞于G2/M.
关键词： Chk1/2基因 真核表达载体 转染 人胃癌BGC823细胞 -
β-榄香烯对胃癌细胞Akt通路活化和凋亡相关蛋白表达的影响
目的:旨在探讨β-榄香烯对人胃癌BGC823细胞Akt通路的活化和凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2和PARP 表达的影响.方法:实验分为对照组和β-榄香烯处理组,采用 四甲基偶氮唑盐(MTT)试验法检 测β-榄香烯对人胃癌BGC823细胞的药物敏感性,采用Western blot检测蛋白表达,应用SPSS(13.0软件包)进行统计学分析.结果:β-榄香烯处理胃癌BGC823细胞24h的IC50为46.56μg/ml,选用50μg/ml和200μg/ml的β-榄香烯处理24h,BGC823细胞凋亡率分别为12.33%和42.59%,与对照组相比有统计学差异(P<0.05).与对照组相比,β-榄香烯处理组Bcl-2与Bax的比值显著下调、伴有PARP裂解.进一步检测发现β-榄香烯处理组明显下调了Akt的磷酸化水平,从而有效抑制Akt信号转导通路.结论:β-榄香烯可以通过抑制Akt信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值和诱导PARP裂解,进而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡.
关键词： β-榄香烯 人胃癌BGC823细胞 Akt通路 细胞凋亡
