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小陷胸汤通过G2/M期阻滞抑制A549和H1299细胞增殖并抑制其侵袭和转移
目的:从体内体外实验共同着手,探讨祛痰剂小陷胸汤对非小细胞肺癌的抑制作用.方法:采用细胞增殖抑制、侵袭和转移以及细胞周期分析等进行体外研究.裸鼠异体移植A549肿瘤模型用于体内实验研究.MTT和软琼月旨克隆形成实验用于细胞增殖测定;划痕和Transwell检测肺癌细胞的侵袭和转移能力;流式和PCR用于细胞周期分析.结果:通过细胞活力的丧失,形态变化以及G2/M周期阻滞的分析,发现A549和H1299细胞在小陷胸汤的干预下发生生长阻滞.PCR结果显示细胞周期相关基因GADD45A上调,CCNB1和CCNB2下调.此外,在小陷胸汤的作用下,A549和H1299细胞侵袭和转移能力呈剂量依赖性下降.通过小鼠右侧腋部皮下接种A549细胞建立肺癌小鼠异体移植模型,小陷胸汤处理后能够抑制肿瘤的生长.结论:小陷胸汤干预后肺癌细胞生长阻滞以及细胞的周期阻滞阐明小陷胸汤可以作为一种新的治疗肺癌的药物.小陷胸汤在体内外实验中减少肿瘤发生及转移潜能,这对临床治疗肿瘤至关重要.
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松针提取物α-蒎烯对肝癌HepG2细胞miR-221及其下游靶基因表达的影响
为探讨松针提取物α-蒎烯的抗肝癌作用及机制,该实验首先使用流式细胞技术检测α-蒎烯对HepG2细胞周期的影响,然后选取与G2/M期调控相关的miR-221,采用荧光定量PCR技术检测α-蒎烯干预对其表达的影响,同时通过TargetScan等在线生物信息学软件分析miR-221的靶基因,后对相关靶基因的表达用定量PCR进行检测.结果显示,α-蒎烯呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,可阻滞细胞于G2/M期(P＜0.05),显著下调HepG2细胞内miR-221的表达(P＜0.05),生物信息学分析显示CDKN1 B/P27和CDKN1 C/P57可能是miR-221的下游靶基因,荧光定量PCR显示α-蒎烯处理后二者的表达显著上调(P＜0.001,P＜0.05).上述结果表明,α-蒎烯可能通过阻滞细胞周期于G2/M期从而发挥抗肝癌作用,其对G2/M期的调控可能与下调miR-221表达和上调其靶基因CDKN1 B/P27和CDKN1C/P57的表达有关.
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Chk1与Chk2高表达对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响
目的:在建立Chk1/2基因高表达人胃癌BGC823细胞的基础上,探讨Chk1/2基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用.方法:采用流式细胞术检测DADS作用于Chk1/2高表达BGC823细胞周期分布情况.Western blot检测Chk1、p-Chk1、Chk2、p-Chk2、Cdc25C与Cyclin B1表达变化.结果:流式细胞术显示,Chk1高表达组G2/M期细胞较对照组与空载体组增加(P<0.05).而15 mg·L-1 DADS处理后,各组G2/M期细胞较处理前增加,Chk1高表达组较空载体组差异有统计学意义(P<0.05).Chk2高表达组G2/M期细胞较对照组与空载体组差异无统计学意义(P>0.05).而DADS处理Chk2高表达组后,G2/M期细胞较对照组与空载体组差异有统计学意义(P<0.05).Western blot显示,Chk1/2蛋白及p-Chk2表达水平不受DADS的影响,但p-Chk1呈时间依赖性上调(P<0.05).DADS处理Chk1高表达BGC823细胞12、24、36、48 h后,Cdc25C磷酸酶与Cyclin B1表达较对照组呈时间依赖性下降(P<0.05).结论:DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期与激活Chk1/Cdc25C/Cyclin B1通路有关.Chk1高表达可增强DADS阻滞G2/M期细胞的作用,而Chk2高表达对DADS无影响.
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沉默Chk1基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响
目的:探讨沉默Chk1基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用.方法:采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk1基因,q-PCR与Western blot检测Chk1 mRNA与蛋白表达.流式细胞术检测DADS作用与Chk1基因沉默BGC823细胞周期分布情况.Western blot检测Cdc25C与cyclinB1表达.结果:流式细胞术显示,15 mg·L-1DADS作用BGC823细胞12、24、36、48 h后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P＜0.05).Chk1沉默BGC823细胞Chk1 mRNA与蛋白表达下调(P＜0.05).沉默Chk1后,G2/M期细胞较对照组降低(P＜0.05).DADS处理后,对照组G2/M细胞高于Chk1沉默组(P＜0.05).Chk1基因沉默后Cdc25C和CyclinB1表达较对照组增加(P＜0.05).DADS处理对照组后,Cdc25C和CyclinB1表达较未处理组降低(P＜0.05).DADS处理Chk1沉默组Cdc25C和CyclinB1表达较Chk1沉默下调(P＜0.05).结论:Chk1沉默可通过促进Cdc25C和CyclinB1表达减弱DADS阻滞G2/M的作用,DADS阻滞G2/M的检查点是Chk1.
关键词： 人胃癌BGC823细胞 二烯丙基二硫 chk1 基因沉默 G2/M期 -
细胞周期蛋白B1在卵巢癌中的研究进展
细胞周期蛋白B1(cyclin B1)是细胞周期G2/M期的重要调控因子,主要促进细胞有丝分裂和卵母细胞的成熟.生理情况下,eyclin B1在S期合成,G2期达高峰,M期进入胞核促进细胞分裂增殖.许多研究显示,eyelin B1含量的增加通常出现在永生化的肿瘤细胞,cyclin B1参与卵巢细胞网络调控系统,其改变与卵巢癌的发生及恶性生物学行为密切相关.cyclin B1蛋白在卵巢癌细胞周期中异常表达,呈现出癌基因的特性,cyclln B1过表达与定位的改变受多个基因的调节,而且与卵巢癌的发生发展、预后、诊断和治疗密切相关.
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诺维本联合放疗对肺腺癌细胞株A549凋亡的影响
诺维本(NVB)是新型抗癌生物碱,可对G2/M期细胞产生阻滞作用,且具有放射增敏性 [1].笔者自2006年9月至2008年6月于中国医大放疗科学习期间,在中国医大中心实验室实验观察了诺维本对肺腺癌细胞株A-549放射后存活曲线的影响,旨在探讨诺维本的放射增敏效应及其作用机理.
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紫杉醇配合三维适形放疗治疗非小细胞肺癌患者的护理
紫杉醇是一种新型的抗微管药物,与微管蛋白结合通过促进细胞在其分裂间期被阻止微管正常的生理解聚,使快速分裂的肿瘤细胞在有丝分裂期间被阻止在G2/M期,后因复制受到阻断而死亡[1].而射线对G2/M期作用明显,因此紫杉醇也被选用为细胞周期特异性的放射增敏剂,与放疗合用可以使亚致死损伤修复能力下降,加速肿瘤细胞的死亡,具有协同作用[2].我科2005年8月-2007年6月采用小剂量紫杉醇化疗配合三维适形放疗治疗非小细胞肺癌16例,现报道如下.
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紫杉醇对小鼠T细胞的影响
为研究抗癌药紫杉醇(PTX)对T细胞行为的影响及其分子机制,利用流式细胞术分析多克隆刺激剂Con A刺激下T细胞行为:羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记技术分析T细胞增殖相关指数;碘化丙锭染色分析细胞周期分布;Annexin V-PI染色检测T细胞凋亡;荧光标记的单克隆抗体染色检测T细胞活化表达CD25的百分率.结果显示,PTX对ConA刺激下小鼠T细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.该浓度范围PTX阻滞T细胞于G2/M期,诱导凋亡及抑制CD25表达.25 nmol/L的PTX与10 nmol/L的环孢素A(CsA)具有明显的协同抑制效应.以上结果表明PTX可明显抑制多克隆刺激剂ConA诱导的T细胞体外增殖,是G2/M期阻滞、凋亡诱导和CD25表达抑制等多种机制共同作用的结果.
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不同浓度Nocodazole对Hela细胞G2/M期同步化的调节作用
目的 观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响.方法 分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h.于Nocodazole撤除后0(处理18 h)、3、6、9 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G2/M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白(α-tubulin)排列.以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组.结果 Nocodazole处理18 h.Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组Hela细胞G2/M期细胞百分比分别为55.95%、51.09%和47.8l%,均显著高于对照组的9.54%(P<0.05).在Nocodazole撤除后3、6、9 h时问点,Nocodazole 3.0μmol/L和1.0μmol/L处理组G2/M期细胞百.分比无明显变化;而Nocodazole 0.3 μmol/L处理组G2/M期细胞百分比下降明显(30.43%、12.91%、10.23%),撤除后6 h时间点的G2/M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义(P>0.05).α-tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Nocodazole撤除后Nocodazole 0.3μmol/L处理组G2/M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰.结论 Nocodazole对Hela细胞G2/M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0.3 μmol/L Nocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响小.
关键词： Nocodazole Hela细胞 细胞周期 纺锤体 G2/M期 -
DADS对Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞G2/M期的影响
目的：在建立Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞基础上,探讨DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞G2/M期的作用。方法分别采用集落形成实验、流式细胞术、RT-PCR、Western blot 等方法,检测 DADS 对 Chk1/2高表达MGC803细胞增殖、细胞周期分布、Chk1与Chk2 mRNA与蛋白、p-Chk1与p-Chk2及CDC25C与cyclinB1的表达。结果软琼脂集落形成实验显示,30 mg · L-1 DADS作用Chk1与Chk2高表达MGC803细胞组集落形成率均明显低于对照组与空载体组(P <0．05)。流式细胞术显示,30 mg·L-1 DADS作用12、24、36、48 h后,Chk1/MGC803细胞G2/M期分别为41．3%、57．4%、68．9%、42．9%,较MGC803细胞与Chk2/MGC803细胞明显增加( P<0．05)。而Chk2/MGC803细胞与MGC803细胞差异没有显著性( P>0．05)。 RT-PCR显示, Chk1/MGC803与 Chk2/MGC803细胞 Chk1与 Chk2 mRNA水平较对照组无明显变化；并且, Western blot显示, Chk1与 Chk2总蛋白及 p-Chk2的表达无明显改变,但 p-Chk1呈时间依赖性上调,CDC25C与cyclinB1呈时间依赖性下调( P<0．05)。结论 DADS可阻滞Chk1/MGC803细胞于G2/M期,与上调磷酸化Chk1和下调CDC25C与cyclinB1有关。
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二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响
目的 研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响.方法 流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Western blot与免疫细胞化学检测DADS 处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达.结果 流式细胞术分析显示,30 mg·L-1 DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期 (P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性 (P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1 与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05).结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关.
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冬凌草甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡及对G2/M细胞周期的阻滞作用
目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌PANC-1细胞生长抑制以及促进凋亡的机制.方法 采用MTT还原法检测冬凌草甲素对PANC-1细胞生长的抑制作用;碘化丙啶(PI)染色和Hoechst 33342染色法观察细胞形态学的变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期分布;膜联蛋白V(Annexin V)/pI双标流式细胞术测定凋亡细胞比率;分光光度法检测Caspase-3 酶活性;Western blotting 法测定 Caspase-3酶原(pro-caspase-3)、Bax和Bc1-2蛋白的表达变化.结果 冬凌草甲素对胰腺癌细胞PANC-1具有明显的生长抑制作用,并呈现明显的剂量依赖性;细胞形态学观察发现,冬凌草甲素可诱导PANC-1细胞凋亡;细胞周期被阻滞在G2/M期,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加;Caspase-3酶原被激活;Bax蛋白表达量增加,Bc1-2蛋白表达无明显变化.结论 冬凌草甲素可通过G2/M细胞周期阻滞和诱导凋亡抑制胰腺癌细胞PANC-1的生长,其分子机制可能是通过改变Bax/Bcl-2的表达比率,激活Caspase-3,从而促进PANC-1细胞发生凋亡.
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STK15在眼睑鳞状细胞癌中的表达及临床意义
近年的研究表明,细胞有丝分裂的启动与维持除了受熟知的细胞周期素依赖激酶l( cyclin dependent kinase 1,CDK1)调控外,还受到其他的一些激酶,如保罗样激酶1( polo like kinasel,plk1)、丝氨酸/苏氨酸激酶15(serine/threonine kinasel5,STKl5)的调节,STKl5通过磷酸化特定下游底物影响细胞G2/M期转换,促进细胞进入M期后中心体成熟及双极纺锤体建立;STKl5在恶性肿瘤中的过表达与中心体的异常扩增、非整倍体形成及细胞恶性转化密切相关[1-2].本研究应用免疫组织化学法检测STKl5在眼睑鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)的表达,旨在探讨二者的相关性.
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细胞分裂周期素25A影响放射线照射后HEp-2细胞的G2/M期阻滞及凋亡
目的:研究放射线照射后HEp-2细胞的G2/M期阻滞与细胞分裂周期素(CDC)25A表达的相关性及过表达CDC25A蛋白对细胞周期及凋亡的影响.方法:通过流式细胞仪和Western blot方法检测4GyX线照射后在不同时间点细胞周期及CDC25A蛋白含量；经脂质体转染pEGFP-N1-CDC25A质粒的HEp-2细胞为CDC25A组,转染pEGFP-N1质粒的为空载对照组,通过实时荧光定量PCR法检测这两组细胞中CDC25A的mRNA含量以鉴定转染效率；通过流式细胞仪检测CDC25A组和空载对照组细胞经4 Gy放射线照射后细胞周期和细胞凋亡率；通过MTT法检测两组细胞的存活曲线.结果:放射线照射后G2/M期在细胞周期中的比例与CDC25A蛋白含量成正相关；CDC25A组细胞的CDC25A mRNA含量为空载对照组的15倍；过表达CDC25A联合4 Gy放射线照射可废除G1/S关卡阻滞,促进G2/M期聚集和提前进入有丝分裂,可导致细胞凋亡增加和细胞存活率降低.结论:CDC25A的含量与G2/M期的比例正相关,调控CDC25A的表达可影响放射线照射后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡水平.
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细胞周期G2/M期调控与神经变性疾病
神经变性疾病是一种进行性神经功能缺失及严重影响生活质量的神经系统疾病,主要病理特征为神经元变性丢失,病因未明.近来神经元的细胞周期异常调控机制引起广泛重视,尤其细胞周期停滞在G2/M期走向凋亡,该机制有助于对神经变性疾病细胞周期机制的理解以及为其提供治疗靶点.变性神经元在细胞周期G2/M期会发生阻滞,并与CDK家族和cyclin B等调控蛋白密切相关,从而揭示G2/M期阻滞、核内复制及相关细胞周期蛋白调控异常导致神经元变性死亡的病理过程.
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沉默Chk2基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响
细胞周期检测点激酶1/2(Chk1/2)在参与G2/M期起着重要作用,本研究探讨沉默Chk2基因对二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞的影响.采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk2基因,q-PCR与Western blot检测Chk2 mRNA与蛋白表达.流式细胞术检测DADS与Chk2沉默BGC823细胞周期分布情况.Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达.流式细胞术显示,DADS作用BGC823细胞后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P<0.05).Chk2沉默BGC823细胞Chk2 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05).Chk2沉默组G2/M期细胞较对照组差异无显著性(P>0.05).DADS处理Chk2沉默组与对照组后,两者G2/M期细胞差异无显著性(P>0.05),而较未处理前有明显差异(P<0.05).Chk2沉默后,CDC25C和CyclinB1表达较对照组无明显差异(P>0.05).但是,DADS处理对照组与Chk2沉默组后,CDC25C和CyclinB1表达较处理前明显降低(P<0.05).表明Chk2沉默对DADS阻滞BGC823细胞G2/M作用没有影响,DADS阻滞G2/M的检查点可能不是Chk2.
关键词： 人胃癌BGC823细胞 二烯丙基二硫 Chk2 基因沉默 G2/M期 -
二烯丙基二硫对人结肠癌SW480细胞周期的阻滞作用
背景与目的:前期研究表明,二烯丙基二硫(diallyl disulfide.DADS)能有效在体内外抑制人结肠癌细胞增殖,并将细胞阻滞于G2/M期.本实验旨在进一步探讨DADS对人结肠癌SW480细胞周期阻滞作用的可能机制.方法:采用MTT、细胞计数法检测DADS对SW480细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DADS对SW480细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测DADS作用后PCNA、P53表达情况,蛋白印迹法分析P21WAF1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)表达的改变.结果:不同浓度DADS作用SW480细胞24、48、72 h后.对细胞增殖的抑制作用及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加.流式细胞仪分析结果显示,DADS作用SW480细胞后,G0/G1期细胞含量降低.S期细胞比例变化不大,而G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加和处理时间的延长,其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).DADS作用后.免疫细胞化学检测显示,PCNA、P53蛋白表达明显下降.蛋白印迹分析显示,DADS作用SW480细胞后,Cyclin BI蛋白表达明显下降,P21WAF1蛋白的表达明显升高,均呈时间效应关系.结论:DADS可能通过下调PCNA、P53、Cyclin B1蛋白表达.上调P21WAF1蛋白表达引起SW480细胞G2/M期阻滞.
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土曲霉酮对人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9的作用
目的 观察土曲霉酮对人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9的影响.方法 不同浓度的土曲霉酮处理SCC9细胞后,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,用Annexin V/PI试剂盒及碘化丙啶分别检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果 土曲霉酮对SCC9细胞有抑制增殖的作用,抑制作用随着药物浓度的增大(P＜0.05)及给药时间的延长而增强(P＜0.05).此外,与不给药组相比,5 μmol/L和10 μmol/L土曲霉酮处理,可引起处于G2/M期的SCC9细胞比例由(24.8±0.6)％分别增加到(26.2±0.4)％和(34.2±1.2)％ (F=132.13,P＜0.01),但对SCC9细胞凋亡没有明显的影响.结论 土曲霉酮通过引起G2/M期阻滞来抑制人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9细胞的增殖,提示土曲霉酮有望在舌鳞状细胞癌的治疗中发挥作用.
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PPAR-γ抑制剂T0070907对人鼻咽癌细胞的生长抑制作用
[目的]探讨PPAR-γ选择性抑制剂T0070907影响鼻咽癌(NPC)细胞体外生长的作用机制.[方法]通过RT-PCR和Westem blotting检测PPAR-γ受体在5株NPC细胞株(CNE1、CNE2、HONE1、SUNE1和5-8F)中mRNA和蛋白水平的表达:MTT法检测T0070907对NPC细胞生长情况的影响;流式细胞术和Western blotting检测T0070907对NPC细胞的细胞周期和细胞周期相关蛋白表达的影响.[结果]PPAR-γ在5株NPC细胞中均有表达;T0070907对NPC细胞株有明显生长抑制作用,并呈浓度、时间依赖性;T0070907作用于NPC细胞CNEI和CNE2后,G2/M期细胞比例则逐渐增加,且随着处理浓度的增加而增加,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).此外,随着T0070907处理浓度的增加,NPC细胞的细胞周期相关蛋A Cyclin A、Cyclin B1、Cdc2、Cdk2蛋白的表达逐渐下降,无活性的pCdc2蛋白表达则逐渐增强.[结论]PPAR-γ抑制剂T0070907能够抑制NPC细胞PPAR-γ的蛋白表达,并通过对细胞周期相关蛋白Cyclin A、Cyclin B1、Cdc2、Cdk2、pCdc2等蛋白的调控导致细胞周期G2/M期阻滞,从而抑制NPC细胞的生长.
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检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制
目的 探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.方法 实验分4个组,对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组.采用流式细胞仪分析G2/M期分布比例及凋亡百分比,Western-Blotting检测CyclinB1的表达,改良的荧光染色法观察核碎片形态.结果 联合处理组G2/M期分布比例较高,CvclinB1表达较高,并产生更多的核碎片,放射诱导的凋亡百分比并不增加.结论 G2/M 期分布比例增高,CyclinB1表达增加是温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.
关键词： 放射增敏 温和性高温 G2/M期 cvclinB1 鼻咽癌细胞系CNE-2Z
