首页 > 文献资料
-
力达霉素在体内外抑制小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0移植成瘤
目的 研究力达霉素(LDM)体内外抗小鼠骨髓瘤的作用及机制.方法 用MTS法检测细胞增殖,PI单染结合流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,用Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白水平,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/0移植成瘤模型观察力达霉素在不同剂量下的治疗效果.结果 结果力达霉素通过降低NF-κB、BCL-2和Survivin的表达抑制SP2/0细胞增殖,并诱导其凋亡,通过上调P27蛋白的表达,使细胞周期阻滞于G2/M期.同时力达霉素对小鼠SP2/0细胞移植瘤的生长有显著抑制作用,且呈剂量依赖性.结论 力达霉素在体内外均具有显著抗小鼠骨髓瘤作用,具有一定的临床应用前景.
-
力达霉素诱导人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡和周期阻滞
目的 研究力达霉素(LDM)的抗骨髓瘤作用,并探讨抗骨髓瘤的作用机制.方法 处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞随机分为空白对照组及0.1、0.5和1 nmol/L LDM组,用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖率、细胞周期分布和凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达量.结果 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组细胞增殖数显著低于空白对照组数(P＜0.05),LDM组S期和G2/M期的细胞数显著高于对照组数(P＜0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组数(P＜0.05),LDM的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性.不同浓度LDM组细胞caspase-3、caspase-7、caspase-9和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的蛋白被切割明显高于对照组(P＜0.05),P21和P27蛋白的表达量明显高于对照组数(P＜0.05).结论 LDM能诱导人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞凋亡并诱导S期和G2/M期阻滞,其诱导凋亡和周期阻滞的机制有待于进一步深入研究.
-
单链抗体与力达霉素融合蛋白在链霉菌中的表达
目的 构建可表达力达霉素(LDM)辅基蛋白基因与抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(scFv)融合蛋白的重组菌株,获得既具有靶向性、又具有抗肿瘤活性的scFV-LDM.方法 以大肠埃希菌-链霉菌穿梭质粒pBS03 为基础构建同源双交换质粒pBS-scFv,利用接合转移将该质粒转入球孢链霉菌(S. Globisporus)C-1027,根据抗性差异筛选获得重组菌株.用PCR、DNA 印迹法对重组菌株进行验证.用SDS-PAGE 检测重组菌株中目的融合蛋白的表达.用抑菌圈试验检测重组菌株发酵液的抑菌活性.结果 经同源重组得到重组菌株S. Globisporus C-1027-scFv.PCR 显示重组菌株扩增产物与预期一致,DNA 印迹分析显示重组菌株得到与预期吻合的杂交片段,表明scFv-LDM 融合蛋白基因已经成功取代LDM 辅基蛋白基因.SDS-PAGE 结果显示重组菌株不再产生辅基蛋白.抑菌圈试验显示重组菌株发酵液在第5 天能够检测到抑菌活性.初步结果表明,重组菌株可产生scFv-LDM 融合蛋白.结论 成功构建了可产生scFv-LDM 融合蛋白且具有分泌活性的重组菌株.这对改造和研发新型单抗导向药物有实际意义.
-
抗明胶酶单链抗体与力达霉素融合蛋白抗肿瘤作用机制及疗效研究
目的：探讨抗明胶酶单链抗体 Fv 与力达霉素（LDM）融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。方法采用三联径向加压 C4柱制备 LDM 发色团 AE，体外分子重建将其装入融合蛋白 Fv-LDP 中，Superdex 75层析获得 Fv-LDP-AE。反相 HPLC 测定纯度或相对含量。流式细胞术测定 DNA 含量；采用 SA-β-gal 染色、Western blot 和细胞伤口愈合实验分别检测药物对细胞衰老、蛋白表达和迁移的影响；通过动物模型评价药物疗效。结果 Fv-LDP-AE 承袭了 LDM 诱导肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和裂亡的作用特点，并显示出更强的诱导衰老和抗迁移作用。Fv-LDP-AE 诱导凋亡和抑制迁移依次与 caspases 通路激活和 MMP-2降调节有关。Fv-LDP-AE 可抑制小鼠和裸鼠移植瘤生长，抑制率分别可达到86.6%和82.5%。结论 Fv-LDP-AE 对小鼠和裸鼠移植瘤有效，可能与其对细胞周期阻滞、凋亡、裂亡和衰老的诱导以及迁移的抑制有关。
-
力达霉素抗人大细胞肺癌的分子机制研究
目的 研究抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)对于人大细胞肺癌H460细胞增殖、细胞周期与凋亡、侵袭转移、血管生成等的影响并探讨其分子作用机制,并通过体内H460裸鼠移植瘤实验,观察LDM体内抗瘤作用.方法 体外实验:采用MTT法观察LDM对细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342荧光染色、固定细胞PI单染、活细胞Annexin V-FITC/PI双染法及TUNEL法检测LDM对细胞凋亡及周期的影响;采用Western blot法检测LDM对增殖相关信号通路蛋白、细胞周期及凋亡相关蛋白表达的影响;通过明胶酶谱法、Transwell实验检测LDM对细胞侵袭和迁移的影响;体内实验:H460细胞接种于无胸腺裸鼠,比较吉非替尼与LDM对于肿瘤增殖的抑制作用.结果 LDM能够明显抑制人大细胞肺癌H460细胞的增殖,其IC50值为3.65x10-12±2.94x10-12M,比常用抗肿瘤药物丝裂霉素、紫杉醇、阿霉素、长春新碱、5氟尿嘧啶、顺铂、吉西他滨对H460的IC50值低104～108倍.不同浓度LDM作用细胞48h后,细胞凋亡比例逐渐增高,0.5nM、1nM、2nM LDM的早期凋亡诱导率分别为43.30±4.26%、46.54±2.40%、69.87±3.29%;0.1nM、0.5nM的LDM可引起G2/M期阻滞,2nM可引起S期阻滞.Hoechst33342荧光染色及TUNEL法检测也验证了LDM的剂量依赖的凋亡诱导作用.Transwell实验结果显示,LDM有显著地抑制细胞迁移和侵袭的作用.明胶酶谱法结果显示LDM可显著抑制MMP-2的活化及MMP-9的分泌,进一步证实了LDM的抗侵袭转移的能力.Western bloting法结果显示LDM可下调H460细胞p-EGFR、p-HER2、p-AKT、p-JNK的水平,对p-P38无明显影响,对p-ERK则是剂量依赖的上调作用.LDM还可通过减少EGF、VEGF、COX-2、EGFR,、KDR、NF-kB、MMP-9、MMP-2、K-RAS等的分泌和表达达到抑制细胞增殖、抗血管生成及侵袭转移的作用;LDM通过上调P53、P21蛋白的表达,下调CyclinB1、p-RB、Bcl-2的水平,增强PARP切割片段、激活caspase-3,caspase-7蛋白酶活性等起到诱导凋亡和周期阻滞作用.此外,LDM能够明显抑制H460裸鼠移植瘤的生长,其中0.025mg/kg及0.05mg/kg LDM剂量组的抑瘤率分别为52.7%和72.7%,与对照组相比有显著性差异.50mg/kg的吉非替尼的抑瘤率为69.1%,与0.05mg/kg LDM组抑制作用接近.结论 烯二炔类抗生素LDM通过抑制人大细胞肺癌多条信号通路靶点蛋白的表达及活化而发挥抗增殖、诱导凋亡、周期阻滞、抑制血管生成、抗侵袭转移的作用,并能显著抑制大细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长,大剂量下与肺癌靶向药物吉非替尼的抑制作用相当.
-
应用组织芯片技术研究力达霉素辅基蛋白与结肠癌及正常结肠粘膜组织的结合作用
目的 研究力达霉素辅基蛋白与结肠癌及正常结肠粘膜组织的结合作用,并进一步研究与VEGF在结肠癌中表达的相关性,探讨抗肿瘤抗生素力达霉素在结肠癌治疗中的意义.方法 制备抗力达霉素的鼠单克隆抗体,利用免疫组织化学技术,检测力达霉素辅基蛋白在结肠癌及边缘组织组合芯片上的免疫染色,并在多种病理类型结肠癌组织芯片上,平行检测VEGF的表达及力达霉素辅基蛋白的免疫染色,分析两者的相关性.结果 在结肠癌及边缘组织组合芯片上,力达霉素辅基蛋白与结肠癌组织结合的阳性率为66.7%(36/45),明显高于正常结肠组织23.8%(10/32)(P<0.05);在多种病理类型结肠癌组织芯片上,可计数比例为88%(62/70),其中,在力达霉素辅基蛋白免疫染色为阳性的病例中,VEGF表达阳性率为76%(29/38),两者呈正相关(P=0.033,r=0.271).结论 力达霉素辅基蛋白可以与结肠癌组织结合,并与VEGF表达有相关性.在结肠癌的临床个体化治疗中,免疫组织化学技术可为力达霉素与其他靶向药物的联合用药提供一定的参考价值.
-
EGFR靶向HBD-1强化融合蛋白构建及其抗肿瘤活性研究
目的 人β-防御素1(human defensin-β-1,HBD-1)由上皮细胞分泌,在肿瘤细胞中极少表达,新研究表明它可作为肿瘤的抑制基因.本研究制备以人表皮生长因子受体-1(human epidermal growth factor receptor-1,EGFR-1)为靶点、HBD-1(Db)的力达霉素(lidamycin,LDM)组成的强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db,并探讨其抗肿瘤活性.方法 采用基因工程方法制备融合蛋白基因并将其表达纯化得到融合蛋白Ec-LDP-Db.ELISA和细胞免疫荧光法检测Ec-LDP-Db与肿瘤细胞表面EGFR亲和活性;采用CCK-8法测定Ec-LDP-Db对人肿瘤细胞A431、A549、H460和PG-BE1体外杀伤活性,纯化的Ec-LDP-Db蛋白与LDM发色团(AE)在体外进行组装,构建强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db.采用MTT法检测Ec-LDP(AE)-Db对肿瘤细胞杀伤活性,A431细胞裸鼠移植瘤实验检测Ec-LDP(AE)-Db体内抗肿瘤活性.流式细胞仪检测Ec-LDP(AE)-Db作用后肿瘤细胞的细胞周期变化.结果 成功构建并表达融合蛋白Ec-LDP-Db,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,目的蛋白Ec-LDP-Db经纯化、复性后,每升发酵液可以获得30 mg,检测纯度达到88％.Ec-LDP-Db可与高表达EGFR的A431细胞表面结合.不同浓度的HBD-1和Ec-LDP-Db对A431和H460具有增殖抑制作用,其中10μmol/L Ec-LDP-Db组A431细胞抑制率为(67.3±6.9)％,高于HBD-1组抑制率(13.2±3.7)％,差异有统计学意义,t=1.585,P=0.023;Ec-LDP-Db组H460细胞抑制率为(65.3±2.0)％,高于HBD-1组抑制率(20.5±0.5)％,差异有统计学意义,t=1.895,P=0.045.Ec-LDP-Db蛋白与LDM发色团在体外组装成功后为强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db.MTT法检测结果显示,Ec-LDP(AE)-Db对肿瘤细胞的杀伤作用比顺铂(cisplatin,DDP)强,DDP对A431的IC50值为(303.2±55.6)×10-10 mol/L,而Ec-LDP(AE)-Db对A431的IC50值为(1.9±2.2)×10-10 mol/L,P=0.043.A431裸鼠移植瘤实验同样证实Ec-LDP(AE)-Db在体内也具有更高的抗肿瘤活性,其抑瘤率为77.8％,P=0.008.流式细胞术检测发现,A431细胞Ec-LDP(AE)-Db给药组1 nM时G2期为(79.1±8.7)％,与对照组(2.9±0.8)％相比,差异有统计学意义(P=0.018),因此Ec-LDP(AE)-Db可以促使A431肿瘤细胞G2/M期阻滞.结论 本实验制备的EGFR靶向强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db可以与高表达EGFR的A431癌细胞结合,对肿瘤细胞具有强烈的杀伤活性,具有发展为抗肿瘤靶向药物的潜能.
-
力达霉素经肝动脉介入治疗或静脉化疗作用于兔肝癌 VX2移植瘤的实验研究
目的：探讨力达霉素经肝动脉介入治疗和静脉化疗两种给药途径对 VX2兔肝癌的影响。方法开腹方法将 VX2瘤组织块分别植入12只新西兰大白兔的肝左叶，建立 VX2兔肝癌模型，B 超检测肿瘤生长情况后随机分为两组：A 组为力达霉素肝动脉介入组，B 组为力达霉素静脉化疗组（6只／组）。A 组在数字减影血管造影（DSA）引导下经肝固有动脉注入力达霉素（1 ml，0．05 mg／kg），B 组通过耳缘静脉注入力达霉素（1 ml，0．05 mg／kg），给药10 d 后活杀两组动物，取肝肿瘤组织4％多聚甲醛固定，免疫组化方法测定 CD34、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达；应用 Cobas 8000检测血清生化丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平；计算并比较两种不同给药方式的肿瘤生长抑制效果。结果给药10 d 后两组肿瘤均有增大，但与 B 组相比，A 组肿瘤生长率明显降低（P ＜0．05）；免疫组化结果显示，介入途径给药更能下调 CD34、PCNA 表达水平。结论在治疗兔肝癌 VX2中，力达霉素经肝动脉介入给药治疗效果优于静脉化疗给药。
-
力达霉素辅基蛋白-FITC偶联物的制备
目的 构建荧光衍生化的LDM辅基蛋白为日后研究LDM对肿瘤组织的靶向性打下基础. 方法 采用FITC直接标记法对LDM辅基蛋白进行标记,用Sephadex G15葡聚糖凝胶柱和透析法去除未标记上的FITC,用MALDI-TOF质谱检测连接效果. 结果 LDM辅基蛋白与FITC偶联的分子比为1:1. 结论 LDM辅基蛋白可以标记上FITC荧光物质.
-
力达霉素对人结肠癌HCT-8细胞侵袭调节基因表达的影响
目的研究抗肿瘤抗生素力达霉素对人结肠癌HCT-8细胞侵袭调节基因表达的影响。方法利用cDNA排列(cDNA arrays)、Northern杂交、RT-PCR技术。结果力达霉素可以促进TIMP-1的表达，抑制MMP-9的表达，cDNA排列、Northern杂交、RT-PCR检测得到了同样的结果。结论力达霉素可能通过抑制IV型胶原酶的产生，同时诱导金属蛋白酶抑制因子的产生，从而表现出抗侵袭活性。
关键词： 抗肿瘤抗生素 力达霉素 cDNA排列 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制因子 -
抗癌抗生素力达霉素与抗IV型胶原酶单链抗体的基因工程组装融合蛋白
目的以IV型胶原酶为靶点,研制兼具有抗肿瘤侵袭转移和强烈杀伤肿瘤细胞的新型单抗导向药物.方法力达霉素(LDM)分子由力达蛋白(LDP)和力达发色团(LDC)两部分组成.从基因工程转化菌中提取融合蛋白(LDP-Fv)并与LDC 组装重建,制备高效抗癌抗生素力达霉素与单链抗体的组装融合蛋白(LDM-Fv).通过ELISA、酶谱分析、Boyden 小室体外侵袭实验及克隆形成测定,观察其生物学活性.结果 LDM-Fv能特异性与肿瘤细胞的IV型胶原酶结合并抑制其活性,LDP-Fv有阻断肿瘤细胞侵袭的能力,但无细胞毒性,加入LDC制成的组装融合蛋白LDM-Fv对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,并明显强于丝裂霉素和阿霉素.结论 LDM-Fv可能成为一种新型高效、小型化抗肿瘤导向药物.
-
力达霉素辅基蛋白与人体乳腺癌结合作用的组织芯片研究
观察力达霉素辅基蛋白LDP与乳腺癌及乳腺正常组织的结合作用,并进一步研究与VEGF和HER2在乳腺癌中表达的相关性.采用免疫组织化学方法和结合组织芯片技术.研究LDP与乳腺癌组织及相应正常乳腺组织的结合:进而在多种病理类型乳腺癌组织芯片上,平行检测VEGF和HER2的表达,并与LDP和乳腺癌组织的结合进行比较,分析相关性.应用免疫细胞化学方法观察LDP与人乳腺癌MCF-7细胞的结合作用.结果显示,在乳腺癌及相应正常乳腺组织芯片上.LDP与乳腺癌组织结合的阳性率为73.2%(30/41),明显高于正常乳腺组织48.3%(15/31),两者有显著差异(χ~2=4.63,P<0.05).在多种病理类型乳腺癌组织芯片上,考察LDP与乳腺癌结合阳性的病例表明,VEGF表达阳性率为88.9%(48/54),两者呈正相关(P<0.001,r=0.389);HER2表达阳性率为84.0%(42/54),两者呈正相关(P<0.01,r=0.287).激光共聚焦显微镜检测表明,LDP可与人乳腺癌细胞MCF-7结合.上述结果表明,LDP可与乳腺癌组织结合,并与VEGF、HER2在乳腺癌组织中的表达有相关性.LDP与乳腺癌组织结合作用的研究,有可能为力达霉素与其他靶向药物的联合用药提供依据;也提示LDP作为肿瘤靶向药物导向载体的可能性.
-
抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素偶联物的抗肿瘤作用
目的观察抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素(LDM)偶联物的抗肿瘤作用.方法用MTT法测定其对肿瘤细胞的增殖抑制作用;用小鼠移植性肝癌H22观察体内抗肿瘤作用.结果 3G11-LDM偶联物保留了单抗3G11与IV型胶原酶和靶细胞H22细胞的结合能力,体外试验H22细胞显示比游离LDM更强的细胞增殖抑制作用.体内3G11-LDM偶联物0.05和0.10 mg*kg-1对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率分别为87.8%和97.2%,而游离LDM 0.05 mg*kg-1的抑瘤率为67.1%, 且3G11-LDM偶联物组小鼠的中位生存时间比LDM组明显延长.结论 3G11-LDM偶联物对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用比LDM强,可能成为抗肿瘤靶向药物.
-
抗癌抗生素力达霉素诱导人肝癌BEL-7402细胞死亡的特征
目的研究抗癌抗生素力达霉素(LDM)诱导人肝癌BEL-7402细胞死亡的特征。方法用荧光染料Hoechst 33342和PI联染；琼脂糖凝胶电泳检测；流式细胞术检测等。结果 LDM 1 μmol.L-1处理该细胞后6 h，可观察到一种有别于典型凋亡的染色质凝集方式：核膜一直保持完整，细胞仍贴壁，无凋亡小体形成；琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带。流式细胞术检测到的G1亚峰，仅在LDM处理BEL-7402细胞后24 h出现。LDM处理BEL-7402细胞后6 h，caspase-3，6的活性分别增高5，4倍。染色质开始凝集的时间比caspase-6活性达到高峰的时间早。结论力达霉素诱导人肝癌BEL-7402细胞死亡的特征有别于典型的凋亡，此结果可能有助于解释其极高活性地杀死肿瘤细胞的分子机制。
-
力达霉素-单抗Fab'片段不同连接偶联物的抗肿瘤作用比较
研究力达霉素与抗Ⅳ型胶原酶单抗的不同连接键的小型化免疫偶联物的抗肿瘤作用.制备长短链的二硫键以及硫醚键抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11的Fab'片段连接的免疫偶联物,ELISA法测定偶联物的免疫活性,体外细胞克隆形成测定和体内荷瘤裸小鼠模型观察两种偶联物的抗肿瘤作用.体外研究显示,Fab'-LDM偶联物部分保留了抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11对抗原的亲和力,硫醚键偶联物对体外培养的人纤维肉瘤HT-1080细胞的杀伤作用强于LDM和二硫键偶联物.实验结果显示,LDM等剂量条件下硫醚键偶联物Fab'-SSMPB-LDM和Fab'-SMBS-LDM组的抑瘤率分别为87.7%和78.0%,二硫键偶联物Fab'-SPDP-LDM和Fab'-LCSPDP-LDM组分别为74.8%和72.3%,游离LDM组为70.9%,相比较长连接键的硫醚键偶联物抑瘤作用显著增强.Fab'-SSMPB-LDM和Fab'-SMBS-LDM组动物的平均生存时间延长为165.8%和145.2%,Fab'-SPDP-LDM和Fab'-LCSPDP-LDM组分别为82.2%和107.5%,LDM组为71.9%.与二硫键偶联物组比较,硫醚键偶联物组能显著延长荷瘤鼠的生存期;长硫醚键偶联物抗肿瘤作用和对荷瘤动物生存期延长作用强于短硫醚键偶联物.长链硫醚键偶联物Fab'-SSMPB-LDM肿瘤生长抑制作用提高,荷瘤动物生存期显著延长,有望开发为新的肿瘤治疗药物.
-
力达霉素增强顺铂诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡作用及机制研究
目的研究抗肿瘤抗生素力达霉素与顺铂的体外协同抗肿瘤作用及其机制.方法采用克隆形成法、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33342和PI双荧光染色法、Western blot等方法.结果力达霉素与顺铂联合对人肝癌BEL-7402细胞有很强的协同杀伤作用;可以使BEL-7402细胞的DNA 出现明显的梯状断裂;可以使阻滞于S期的BEL-7402细胞减少而使凋亡细胞比例明显增多;联合用药后BEL-7402细胞核出现明显的凋亡形态变化;使BEL-7402细胞内Bcl-2的表达显著降低.结论力达霉素可以增强顺铂的抗肿瘤作用,提示力达霉素与顺铂联合有望应用于肿瘤联合化疗.
-
用生物检定法研究力达霉素在小鼠和犬的药代动力学
目的用生物检定法测定力达霉素活性浓度和研究其药代动力学.方法体外细胞毒检测法测定血清力达霉素浓度.结果方法学确证基本符合药代动力学研究要求.小鼠iv力达霉素100,50和10μg·kg-1后浓度曲线符合二房室模型,α和β相T1/2分别是0.77～1.8 min和5.6～7.2 min.AUC分别是2 851.3,887.8和166.4μg·min·L-1,随剂量非线性增加.AUC增加和抑瘤疗效增长趋势相似.犬iv力达霉素12μg·kg-1后浓度低并迅速下降,AUC仅16μg·min·L-1,比小鼠浓度低和消除快.首次给药后15 d进行第2次给药,第2次给药浓度低于首次.结论用生物检定法成功测定血清力达霉素浓度和研究其药代动力学.力达霉素药代动力学存在种属、单次及多次给药差别.
-
两种测定小鼠体内力达霉素药代动力学方法的比较
目的对测定小鼠血清浓度的总放射性方法和经过高效液相色谱分离后再测定放射性的两种方法进行比较.方法首先对力达霉素进行同位素标记并且分离纯化.给小鼠尾iv 125I-力达霉素(100μg·kg-1),采集血样,样品经两种方法测定.对得到的药代动力学参数进行统计学处理.结果两种方法测定得到的药代动力学参数(Vd,T1/2α,T1/2β,K21,K10,K12,AUC和CL)存在显著性的差异(P＜0.05).结论采用色谱分离后再测定125I-力达霉素原形的放射性较为合理和准确.
-
力达霉素联合利妥昔单抗对人B细胞淋巴瘤的治疗作用
研究力达霉素与利妥昔单抗联合抗人B细胞淋巴瘤的作用和机制.采用MTS法检测细胞的增殖抑制率,采用Annexin V-FITC/PI法进行细胞凋亡检测,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白的表达量变化,后用人B细胞淋巴瘤裸鼠模型验证该联合方案对淋巴瘤的体内抑制作用.结果表明,利妥昔单抗与力达霉素联合效果显著,增殖抑制作用和细胞凋亡比率显著多于单独用药组,信号通路分析表明凋亡相关蛋白表达升高,凋亡抑制蛋白表达下降.联合用药组荷瘤小鼠生存时间明显高于对照组和单独用药组,体内脾脏转移程度低于对照组和单独用药组.研究表明力达霉素与利妥昔单抗对人B细胞淋巴瘤的体内、体外增殖有协同抑制作用,这种联合协同机制可能与增加肿瘤细胞的凋亡有关.
-
抗Ⅳ型胶原酶抗体Fab'片段力达霉素偶联物的抗肿瘤侵袭转移作用
本研究拟阐明力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗小型化免疫偶联物Fab'-LDM的抗肿瘤侵袭转移作用.采用Boyden小室体外侵袭实验,检测Fab'-LDM免疫偶联物对人纤维肉瘤HT-1080细胞侵袭能力的影响；进一步采用明胶酶谱实验研究其对MMP-2和MMP-9分泌的影响,以及RT-PCR法检测其对TIMP-1 mPNA表达水平的影响；应用裸鼠体内移植人纤维肉瘤HT-1080模型,探讨Fab'-LDM对肿瘤的生长抑制作用.Boyden 小室体外侵袭结果表明,Fab'-LDM对HT-1080侵袭转移存在剂量依赖性抑制作用:Fab'-LDM(5和10 nmol·L-1)的侵袭抑制作用分别达到(60±12)％和(79±11)％.明胶酶谱实验证实,Fab'-LDM偶联物(5和10 nmol·L-1)对MMP-2和MMP-9型明胶酶分泌的抑制作用达到(42±8)％、(54±6)％和(57±3)％、(87±1)％.同时RT-PCR检测显示,10 nmol·L-1 Fab'-LDM显著提高TIMP-(1) mRNA表达水平.体内实验显示,与对照相比,Fab'片段组、LDM组和Fab'-LDM组的肿瘤生长抑制率分别为:(30±13)％、(74±22)％和(86±26)％,对HT-1080移植瘤的生长均具有显著抑制作用；其中,Fab'-LDM偶联物的抑瘤率高,与LDM组相比有显著差异(P=0.045).Fab'-LDM偶联物在体内和体外均对肿瘤侵袭转移有抑制作用,有望成为新型抗肿瘤侵袭转移的生物治疗剂.
