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血卟啉衍生物-癌胚抗原单抗偶联物抗肿瘤特性的研究
目的研究血卟啉衍生物-癌胚抗原单抗偶联物对表达癌胚抗原(CEA)的肿瘤细胞的特异性杀伤作用. 方法将血卟啉衍生物(HPD)与一种癌胚抗原单克隆抗体--C50单抗,通过碳二亚胺(EDCI)偶联,制备HPD-C50单抗偶联物.以表达CEA的SW1116细胞株和不表达CEA的Hep-2细胞株用MTT法进行体外肿瘤细胞的杀伤实验. 结果被鉴定偶联物的免疫活性与标准单抗差异无显著性(P＞0.01).偶联物较游离HPD对表达CEA的肿瘤细胞杀伤效果明显增强(P＜0.05);显微镜下可见CEA阳性细胞死亡,对非表达CEA细胞,二者的作用无明显差异.对各摩尔比的偶联物进行测定,发现摩尔比为66∶1时,杀伤效果好,其HPD的半数杀伤浓度＜2.2μg/ml. 结论 HPD-C50单抗免疫偶联物可特异性地杀伤CEA阳性细胞.
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抗癌抗生素力达霉素与抗IV型胶原酶单链抗体的基因工程组装融合蛋白
目的以IV型胶原酶为靶点,研制兼具有抗肿瘤侵袭转移和强烈杀伤肿瘤细胞的新型单抗导向药物.方法力达霉素(LDM)分子由力达蛋白(LDP)和力达发色团(LDC)两部分组成.从基因工程转化菌中提取融合蛋白(LDP-Fv)并与LDC 组装重建,制备高效抗癌抗生素力达霉素与单链抗体的组装融合蛋白(LDM-Fv).通过ELISA、酶谱分析、Boyden 小室体外侵袭实验及克隆形成测定,观察其生物学活性.结果 LDM-Fv能特异性与肿瘤细胞的IV型胶原酶结合并抑制其活性,LDP-Fv有阻断肿瘤细胞侵袭的能力,但无细胞毒性,加入LDC制成的组装融合蛋白LDM-Fv对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,并明显强于丝裂霉素和阿霉素.结论 LDM-Fv可能成为一种新型高效、小型化抗肿瘤导向药物.
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抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素偶联物的抗肿瘤作用
目的观察抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素(LDM)偶联物的抗肿瘤作用.方法用MTT法测定其对肿瘤细胞的增殖抑制作用;用小鼠移植性肝癌H22观察体内抗肿瘤作用.结果 3G11-LDM偶联物保留了单抗3G11与IV型胶原酶和靶细胞H22细胞的结合能力,体外试验H22细胞显示比游离LDM更强的细胞增殖抑制作用.体内3G11-LDM偶联物0.05和0.10 mg*kg-1对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率分别为87.8%和97.2%,而游离LDM 0.05 mg*kg-1的抑瘤率为67.1%, 且3G11-LDM偶联物组小鼠的中位生存时间比LDM组明显延长.结论 3G11-LDM偶联物对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用比LDM强,可能成为抗肿瘤靶向药物.
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平阳霉素与单克隆抗体Fab'片段偶联物的抗肿瘤作用
目的研制一种以单抗Fab'片段为基础的抗肿瘤导向药物.方法制备单抗3A5 Fab'片段及其与平阳霉素(PYM)偶联物Fab'-PYM后,测定Fab'-PYM与肿瘤细胞的免疫反应性、偶联物中PYM的抑菌活性、对肿瘤细胞的杀伤作用和体内抑瘤作用.结果 Fab'及Fab'-PYM保持了与靶细胞C26的免疫反应性;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的15%;Fab'-PYM对C26细胞的杀伤作用强于PYM;对非靶细胞KB的杀伤作用与PYM相似;ip和iv给药,Fab'-PYM对小鼠皮下接种的肠癌26生长抑制作用均强于3A5-PYM和PYM.结论 Fab'-PYM具有比PYM及3A5-PYM更强的体内外抗肿瘤作用.
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抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用
目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用.方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用.结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM.动物实验中PYM 10 mg·kg-1对H22肝癌的抑制率为60.6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90.8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间.结论 3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物.
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抗Ⅳ型胶原酶抗体Fab'片段力达霉素偶联物的抗肿瘤侵袭转移作用
本研究拟阐明力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗小型化免疫偶联物Fab'-LDM的抗肿瘤侵袭转移作用.采用Boyden小室体外侵袭实验,检测Fab'-LDM免疫偶联物对人纤维肉瘤HT-1080细胞侵袭能力的影响；进一步采用明胶酶谱实验研究其对MMP-2和MMP-9分泌的影响,以及RT-PCR法检测其对TIMP-1 mPNA表达水平的影响；应用裸鼠体内移植人纤维肉瘤HT-1080模型,探讨Fab'-LDM对肿瘤的生长抑制作用.Boyden 小室体外侵袭结果表明,Fab'-LDM对HT-1080侵袭转移存在剂量依赖性抑制作用:Fab'-LDM(5和10 nmol·L-1)的侵袭抑制作用分别达到(60±12)％和(79±11)％.明胶酶谱实验证实,Fab'-LDM偶联物(5和10 nmol·L-1)对MMP-2和MMP-9型明胶酶分泌的抑制作用达到(42±8)％、(54±6)％和(57±3)％、(87±1)％.同时RT-PCR检测显示,10 nmol·L-1 Fab'-LDM显著提高TIMP-(1) mRNA表达水平.体内实验显示,与对照相比,Fab'片段组、LDM组和Fab'-LDM组的肿瘤生长抑制率分别为:(30±13)％、(74±22)％和(86±26)％,对HT-1080移植瘤的生长均具有显著抑制作用；其中,Fab'-LDM偶联物的抑瘤率高,与LDM组相比有显著差异(P=0.045).Fab'-LDM偶联物在体内和体外均对肿瘤侵袭转移有抑制作用,有望成为新型抗肿瘤侵袭转移的生物治疗剂.
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不同力达霉素与抗VI型胶原酶单抗偶联物的抗肿瘤作用
研究不同偶联方法制备的力达霉素(LDM)与抗IV型胶原酶单抗3G11免疫偶联物的选择性抗肿瘤作用.采用SPDP和SMBS作为偶联剂,将LDM辅基蛋白69位赖氨酸与2-亚氨基四氢噻吩修饰的单抗3G11连接,制备免疫偶联物;ELISA法测定偶联物的免疫活性,克隆形成法及人HT-1080细胞免疫缺陷小鼠移植模型观察两种偶联物的抗肿瘤作用.偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,3G11-SMBS-LDM对体外培养的HT-1080细胞的杀伤作用强于LDM和3G11-SPDP-LDM.动物实验显示, LDM在等摩尔剂量条件下3G11-SMBS-LDM的抑瘤率为86.1%, 游离的LDM组为71.2%, 3G11-SPDP-LDM组为77.1%, 3G11-SMBS-LDM的抑制作用显著增强.3G11-SMBS-LDM组动物的平均生存时间延长为163.7%, 3G11-SPDP-LDM组为125.3%, LDM组为71.9%, 3G11-SMBS-LDM能显著延长荷瘤鼠的生存期,两个偶联物之间有显著性差异.3G11-SMBS-LDM偶联物更具有选择性抗肿瘤作用,疗效显著提高,荷瘤动物生存期延长,毒性明显降低,可能成为新的肿瘤治疗药物.
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大分子为载体的抗体偶联药物研究进展
抗体偶联药物与肿瘤相关靶点结合有特异性,对肿瘤细胞有选择性杀伤作用,临床上已开始用于治疗肿瘤.综述了抗体与抗癌药物偶联物的偶联方式和药物释放的靶向机制,以及采用大分子聚合物做载体(如葡聚糖、人血清白蛋白、聚N-2羟丙甲基丙烯酰胺)的抗体偶联药物的研究现状.
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治疗性单克隆抗体的研究进展及其免疫偶联物的抗肿瘤应用
目前正在研究的生物技术药物有1/4是单克隆抗体类药物,治疗性抗体已成为生物制药业发展快的领域之一,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、心血管疾病、病毒感染等.在发展初期,鼠源单克隆抗体为人类疾病的研究起到了重大的推动作用,但其存在着严重的不足,单克隆抗体人源化已逐渐成为当前研究的热点.另外,将放射性物质、化疗药物以及生物毒素等与单克隆抗体偶联得到免疫偶联物,这些偶联物被单克隆抗体特异性地导向表达相应抗原细胞的表面,并发挥抗肿瘤效应,同时也降低了药物对正常组织的损伤.文中就有关单克隆抗体人源化的研究进展和抗肿瘤应用进行综述.
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力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤作用
目的研制一种具有高效、小型化特点的抗肿瘤单克隆抗体(单抗)免疫偶联物.方法以化学偶联法制备抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与单抗Fab＇片段的偶联物Fab＇LDM.以非还原型SDS-PAGE法确定偶联物的相对分子质量;ELISA法、四氮唑蓝(MTT)法、克隆形成法及小鼠移植性结肠癌26(C26)模型观察Fab＇-LDM偶联物的抗肿瘤作用.结果 Fab＇-LDM偶联物的相对分子质量(Mr)约为65 000,Fab＇与LDM的偶联分子比为1:1;偶联物与BEL-7402及C26细胞均呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;Fab＇-LDM对靶细胞BEL-7402的杀伤作用比游离LDM强13倍,对C26细胞的杀伤作用比LDM强5.5倍,但对非靶细胞KB的作用与LDM相当.动物试验结果表明,0.05 mg/kg、0.1 mg/kg和0.2 mg/kg剂量Fab＇-LDM偶联物对小鼠移植性结肠癌26的抑瘤率分别达80%、92%和94%,而0.1 mg/kg剂量游离LDM的抑瘤率为77%;同时偶联物治疗组动物生存时间较对照组延长.偶联物的抑瘤作用强于等剂量游离LDM(P＜0.01).结论以高效抗肿瘤抗生素LDM为"弹头"药物,可与单抗活性片段构建成具有良好抗肿瘤作用的小型化单抗导向药物.
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烯二炔类抗肿瘤抗生素单克隆抗体导向药物研究进展
单克隆抗体对相应的抗原有高度特异性.因此,利用单抗作为特异性载体制成导向药物(免疫偶联物),对于治疗肿瘤有巨大潜力和引人瞩目的前景.文章对烯二炔类抗肿瘤抗生素,特别对新制癌菌素、力达霉素和calicheamicins及其单克隆抗体免疫偶联物的研究进展作了概述.
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多柔比星免疫偶联物构建的研究进展
近年来,由高效的毒性药物作为“弹头”与肿瘤靶向蛋白结合形成的免疫偶联物成为靶向治疗肿瘤的研究热点.多柔比星作为经典的化疗药物,抗肿瘤机制明确,但不良反应较强,已被许多研究者用于免疫偶联物的研究中.随着偶联方式(交联剂)的不断更新,多柔比星免疫偶联物的构建方法也不断改进,对靶向治疗肿瘤的研究也取得了一定的成果.文中就多柔比星免疫偶联物构建的研究进展作一综述.
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单克隆抗体药物在乳腺癌治疗中的应用及进展
目的 介绍近年来单抗药物在乳腺癌治疗中的应用及进展.方法 检索国内外相关资料,并进行汇总、分析和综述.结果 乳腺癌的治疗中单抗药物的应用有单克隆抗体导向药物、免疫偶联物、双特异性单克隆抗体药物等多种类型.结论 单抗药物是乳腺癌治疗史上一个重要里程碑,有着广泛的前景.
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肿瘤的靶向治疗
肿瘤靶向治疗是提高肿瘤治疗效果的一条重要途径。单克隆抗体对相应的抗原具有高度特异性，可以针对特定的分子靶点，制备与之特异性结合的单抗。目前研制的抗肿瘤靶向药物大多数均属单抗制品或以单抗为靶向载体的免疫偶联物，通称单抗药物。研制单抗药物是当前生物技术药物领域甚为活跃的部分。针对新靶点，利用新型抗体与新型“弹头”药物，将可构建针对各种癌症的抗肿瘤单抗药物，在肿瘤靶向治疗中发挥重要作用。
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柔红霉素与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体偶联物的制备及其免疫学特性
目的评价柔红霉素(daunorubicin,DNR)与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体免疫偶联物对兔晶状体上皮细胞的免疫特异性.方法采用过碘酸盐氧化法将抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体LM1与柔红霉素结合;Bradford蛋白检测法和紫外吸收光谱法检测偶联物中LM1与DNR的克分子比;ELISA法检测LM1与DNR偶联后抗体活性的变化;免疫组织化学法检测偶联物在兔眼组织的免疫特异性.结果偶联物表现出单抗LM1和DNR的生物学活性及紫外光谱特征,偶联产物中DNR与LM1的克分子比约为12∶1,即每个抗体分子可以携带约12个药物分子.偶联后抗体的活性保持为原有活性的76.5%以上.免疫组化显示偶联物仅在兔晶状体上皮细胞呈阳性表达,在其他眼组织为阴性表现.结论抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体与柔红霉素的免疫偶联物在体外可以选择性地结合到兔晶状体上皮细胞并保持特异的免疫活性.
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抗CEA单抗-胞嘧啶脱胺酶偶联物体内活性研究
目的 观察抗CEA单抗-胞嘧啶脱胺酶偶联物体内激活5-氟胞嘧啶靶向杀伤大鼠人结直肠癌细胞的效果.方法 建立人直肠癌及人乳腺癌荷瘤裸鼠模型共24只,将其中18只直肠癌荷瘤裸鼠模型分为A、B、C、D四组,每组6只.A组:先给予抗CEA单抗-胞嘧啶脱胺酶偶联物以1000U/kg自尾静脉注射,72h后按50mg/kg给予5-氟胞嘧啶前药,每周1次,共3次.B组:按50mg/kg给予5-氟胞嘧啶,每周1次,共3次.C组:尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS).7周后计算肿瘤体积、瘤重及抑制率.D组:剩下6只人乳腺癌荷瘤裸鼠尾静脉注射抗CEA单抗-胞嘧啶脱胺酶偶联物,给药方法 同A组.结果 A组肿瘤重量、体积抑制率分别为54.28%、52.67%,与C组相比较,P<0.05,B组、C组及D组无明显抑制.结论 抗CEA单抗-胞嘧啶脱胺酶偶联物在体内能特异地识别直肠癌细胞并能有效激活5-氟胞嘧啶前药发挥抗肿瘤作用.
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紫杉醇与抗HER2单抗Sc7301偶联物对肿瘤细胞株的体外杀伤效应
目的:研究紫杉醇(TAX)与抗HER2单抗Sc7301偶联物对HER2表达阳性肿瘤细胞的特异性杀伤作用,为进一步研究卵巢癌靶向治疗奠定基础.方法:采用活化酯法制备紫杉醇与抗HER2单抗Sc7301的免疫偶联物;ELISA法检测TAX与Sc7301偶联后抗体活性的变化;四氮唑蓝(MTT)法观察TAX-Sc7301偶联物的抗肿瘤作用;流式细胞仪检测凋亡细胞比率.结果:偶联后抗体的活性保持为原有活性的54.8%以上,抗体的活性基本保持;偶联物MTT试验中,对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的抑制作用为相同剂量TAX与Sc7301的混合物的2～3倍,而对HER2表达阴性的人肝癌细胞株HepG2的作用则较混合物相差不大;流式细胞仪观察随偶联物浓度的升高,细胞的亚二倍体凋亡峰越明显.结论:TAX与Sc7301的偶联物在体外可选择性杀伤HER2表达阳性的肿瘤细胞.
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Photofrin-Herceptin偶联物对肿瘤细胞株的体外杀伤效应
目的研究Photofrin-Herceptin偶联物对HER-2表达阳性肿瘤细胞的特异性杀伤作用,为进一步的光免疫治疗奠定基础.方法用碳二亚胺(EDCD将光敏剂Photofrin与单抗Herceptin偶联,并分别对SK-BR-3、MCF-7、A549这3种HER-2表达程度不同的肿瘤细胞进行体外杀伤实验,用MTT法检测.结果偶联物的免疫活性较Herceptin降低,但其对HER-2表达阳性的肿瘤细胞的杀伤作用较Photofrin、Herceptin及Herceptin与Photofin混合物明显增强(P＜0.05),对于HER-2表达阴性的肿瘤细胞杀伤效果无明显差异.结论Photofrin-Herceptin偶联物可特异性杀伤HER-2表达阳性的肿瘤细胞.
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以Endoglin为靶点的新型免疫偶联物的抗肿瘤作用
目的 观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用.方法 采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果.结果 等细胞毒性剂量的偶联物END-ADM与ADM对体外培养的肝癌细胞杀伤作用差异不大.动物实验中ADM 0.4 mg/kg对H22肝癌的抑制率为29.33%,而等细胞毒性剂量的END-ADM偶联物的抑瘤率达到86.67%,抑制作用显著增强(P<0.05),与ADM相比,偶联物还可显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间(P<0.05).结论 END-ADM偶联物对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的抑制作用比ADM显著增强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物.
关键词： 阿霉素 Endoglin单抗 免疫偶联物 抗肿瘤 -
平阳霉素与单克隆抗体3D6及其Fab＇片段偶联物对肝癌的实验治疗
单抗3D6是抗Ⅳ型胶原酶单克隆抗体.以葡聚糖T-40(Dextran T-40)为中介体制备3D6和平阳霉素(PYM)的偶联物3D6--PYM.采用间接ELISA法、TTC抑菌效价检测法、克隆形成法、MIT法及动物移植性肿瘤模型测定偶联物的生物学活性与体内外抗肿瘤作用.实验表明,3D6-PYM偶联物与PC、KB、C26及H22细胞等呈免疫学阳性反应;3D6-PYM偶联物对BEL-7402、KB和H22细胞的细胞毒作用强于游离PYM.应用小鼠移植性肝癌模型观察偶联物对肝癌生长的抑制作用及长期疗效.结果显示,3D6-PYM偶联物对肿瘤生长有较强的抑制作用且在体内作用时间延长,发挥较好的疗效.第21天时,按10mg/kg剂量比较,3D6-PYM偶联物、3I6与PYM混合物及PYM的抑瘤率分别达到99.7%、95.6%、81.5%.停止治疗后,继续观察各组动物的生存时间,对照组的中位生存期为38d,按10mg/kg剂量比较,3D6-PYM偶联物组、3D6与PYM混合物组以及PYM组的中位生存期分别为＞120、88和54d.120d时,3D6-PYM偶联物10mg/kg组未见动物死亡.以β-环糊精为中介体制备单抗3I6 Fab'片段与PYM偶联物Fab＇-PYM,小鼠移植性肝癌模型皮下接种后第7天给药,Fab'-PYM偶联物组与PYM抑瘤率分别为81.0%和29.1%.以上研究结果表明,3D6-PYM及Fab＇-PYM偶联物具有比游离PYM更强的抑制肝癌生长作用.特别是长期观察,其差别更为显著.
