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血卟啉衍生物-癌胚抗原单抗偶联物抗肿瘤特性的研究
目的研究血卟啉衍生物-癌胚抗原单抗偶联物对表达癌胚抗原(CEA)的肿瘤细胞的特异性杀伤作用. 方法将血卟啉衍生物(HPD)与一种癌胚抗原单克隆抗体--C50单抗,通过碳二亚胺(EDCI)偶联,制备HPD-C50单抗偶联物.以表达CEA的SW1116细胞株和不表达CEA的Hep-2细胞株用MTT法进行体外肿瘤细胞的杀伤实验. 结果被鉴定偶联物的免疫活性与标准单抗差异无显著性(P＞0.01).偶联物较游离HPD对表达CEA的肿瘤细胞杀伤效果明显增强(P＜0.05);显微镜下可见CEA阳性细胞死亡,对非表达CEA细胞,二者的作用无明显差异.对各摩尔比的偶联物进行测定,发现摩尔比为66∶1时,杀伤效果好,其HPD的半数杀伤浓度＜2.2μg/ml. 结论 HPD-C50单抗免疫偶联物可特异性地杀伤CEA阳性细胞.
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血啉甲醚体外光敏反应机制研究
目的探讨血啉甲醚(HMME)及血卟啉衍生物(HpD)体外光敏化反应的机制.方法采用HMME及HpD光敏引起还原型辅酶I(NADH)氧化为中介的鲁米诺(luminol)化学发光法(CL),探讨HMME及HpD光敏反应特点.选择性应用单态氧(1O2)及活性氧物质(ROS)的专一清除剂,研究1O2及ROS在HMME及HpD光敏反应中的作用.结果 1O2专一清除剂几乎完全抑制了HMME和HpD的化学发光,ROS清除剂对化学发光没有明显影响.HMME化学发光值高可达509 595 mV,反应持续时间48 s,1O2的总产量12 230 280.HpD的化学发光值高49 000 mV,反应时间235 s,1O2的总产量5 757 500.结论 HMME及HpD的光敏化产物主要是1O2.HMME光敏化产生1O2的光量子产率高于HpD,1O2生成速度比HpD快,HMME自敏光氧化速度也比HpD快.在鲜红斑痣的治疗中,当血供正常时,HMME光敏损伤作用可能更强,组织选择性可能更好.
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光动力疗法治疗鲜红斑痣的基础研究——血啉甲醚与血卟啉衍生物吸收特性的比较
目的 观察新型光敏剂——血啉甲醚(HMME)在鸡冠皮肤组织和血管内皮细胞(EC )的吸收特点。方法 莱亨鸡12只，分为HMME组和血卟啉衍生物(HpD)组，每组6只。分别静脉 注射HMME或HpD 10 mg/kg，每隔10 min取血2.5 ml 和鸡冠皮肤组织2.5 g。培养新生儿脐带EC，培养液中加入HMME或HpD，孵育浓度分 别为20、40、60、80和100μg/ml，孵育时间为即刻、15、30、60、120、180和240 min。 采用荧光分析法 测定光敏剂含量，并绘制EC吸收光敏剂的浓度—含量和时间—含量关系曲线。结果 静脉注射HMME或HpD后，其血清浓度的峰值出现在注射后10 min，以后随 时间迅速下降，二者的曲线形态基本一致。HMME在鸡冠组织中的含量于注射后10 min显著高 于HpD（P＜0.01），以后虽然下降速率较快，但在注射后8 0 min仍显著高于HpD（P＜0.05）。培养EC可迅速吸收HMME 和HpD，30 min达峰值的89%以上；其吸收量与孵育浓度呈线性关系，对HMME的吸收量显著高 于HpD（P＜0.01）。结论 HMME较HpD更容易被皮肤微血管EC摄取，这将有利于鲜红斑痣的治疗。
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光动力疗法治疗鲜红斑痣1 216例临床分析
目的 分析比较血啉甲醚(HMME)与血卟啉衍生物(HpD)为光敏剂行光动力治疗(PDT)鲜红斑痣的临床疗效及副反应。材料与方法 鲜红斑痣患者1 216例，粉红型13.2%，紫红型68.3%，增厚型18.4%。静脉注射HpD或HMME 3～7 mg/kg后给予铜蒸气激光、KTD/532激光或氩离子激光照射，功率密度50～100 mW/cm2，能量密度90～540 J/cm2，随访观察。结果 HMME-PDT和HpD-PDT对各型鲜红斑痣均能有效地消除病变颜色，所随访的1 632个病灶在2个月至9年的随访期内未见复发。治疗后反应有：局部水肿5～7天，部分患者有结痂或一过性色素沉着，皮肤暂时性光过敏反应。HpD-PDT组避光期30～90天，HMME-PDT组避光期7～14天。与HpD-PDT相比，HMME-PDT具有反应轻、愈合快、不良反应少、安全度大、避光期短、色素沉着轻、护理容易、重复治疗间隔期短的特点。结论 HMME-PDT与HpD-PDT都能有效治疗各型鲜红斑痣，但HMME-PDT具有不良反应少、安全度大、避光期短、护理容易、重复治疗间隔期短等优点。
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两亲性光敏剂血卟啉单甲醚在不同溶液体系中的存在状态
目的测定血卟啉单甲醚(HMME)在不同浓度、不同溶液体系中的存在状态,以分析其对HMME-光动力学疗法(PDT)的影响.方法按所用溶剂实验分为以下4种溶液体系:HMME-磷酸盐缓冲液(PBS)、HMME-二甲基亚砜(DMSO)、HMME-白蛋白缓冲液和HMME-细胞悬液,每种溶液配成2、4、8、10、20、40、60、80和100 μmol/L等9个浓度.首先分别测定其吸收光谱和荧光激发光谱,根据光谱形态特征定性分析HMME在前述9个浓度的4种溶液体系中的存在状态,然后对形成聚集体的溶液利用公式定量分析HMME的缔合数、聚集平衡常数及各浓度下的缔合度.结果通过光谱特征的定性分析发现,浓度为2～10 μmol/L时,HMME在DMSO、白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中均以单体为主;浓度为20～100 μmol/L时,除DMSO溶液外在其他3种溶液中都有HMME聚集体出现.通过绘制浓度为20～100 μmol/L的HMME在PBS、白蛋白缓冲液和细胞悬液中的状态图,聚集数取2时,状态图线性关系较好,HMME在此3种溶液中形成二聚体.缔合度计算结果显示:浓度为20 μrmol/L的PBS、细胞悬液和白蛋白缓冲液中部分HMME分子开始形成聚集体,但整个溶液仍以单体为主(HMME单体百分数分别为92.3%、90.7%和95.5%);40～100 μmol/L溶液中HMME单体含量随浓度增加而减少,100μmol/L的PBS溶液和细胞悬液中70%～75%HMME为单体,近30%的HMME分子发生了聚集,而白蛋白缓冲液中83%的HMME为单体,20%的HMME分子发生了聚集.HMME在PBS和细胞悬液中的聚集平衡常数近似,而且大于在白蛋白缓冲液中的聚集平衡常数,说明HMME的聚集程度在PBS溶液和细胞悬液中比在白蛋白缓冲液中大.与疏水性血卟啉衍生物(HpD)比较结果显示,在PBS溶液中HMME在60 μmol/L开始出现明显聚集,而疏水性HpD在20μmol/L即开始出现明显聚集;定量比较各溶液体系中HpD的聚集平衡常数均明显大于HMME,且各浓度时的单体含量明显小于HMME,说明HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中的聚集趋势明显小于HpD.结论两亲性光敏剂HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中聚集性显著低于疏水性的HpD.浓度低于20μmol/L HMME在4种溶液中均以单体为主,HMME在40～100μmol/L的白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中都有不同比例HMME分子发生聚集,且都形成二聚体.HMME在不同溶液中的聚集程度不同,按由难到易依次为:DMSO、白蛋白缓冲液、PBS≈细胞悬液.在常规给药条件下,HMME在体液中的存在形式以单体为主,但在高浓度给药时,部分HMME会聚合成聚集体,应注意聚集对HMME-PDT的影响.
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光动力治疗肝癌远期疗效及影响因素探讨
目的 分析光动力治疗肝癌的临床表现和远期疗效,探讨疗效影响因素和治疗适应证,为临床推广应用提供参考数据.方法肝癌患者70例,其中小肝癌2例,大肝癌68例.均经B超、CT定位,甲胎蛋白(AFP)定量,病理组织学确诊.治疗前48 h,患者行血卟啉衍生物(HpD)皮试,阴性者按每公斤体重5 mg静脉给药.治疗时,在B超引导下,用18G肝穿针经皮穿刺将石英光纤引导入肝肿瘤内进行光辐照.激光器为氩离子激光泵浦染料激光器系统,激光波长630 nm,光纤末端为1 cm长柱状弥散头,输出功率300～350 mW,每一照射点能量累积约220 J,肿瘤内实行多点照射.治疗后1周,检查血常规、肝功能、AFP及B超,一个月后,行肝穿活检.多次治疗间歇时间为1个月.结果 70例肝癌行170次治疗,其中接受1次治疗30例,多次治疗40例 .1次治疗组1年生存率10%,无生存2年者;2次治疗组1年生存率50%,2年以上生存率8%;3次以上治疗组1年生存率82%,2年生存率50%,3年生存率32%,其中3例存活5年以上.全组只有18%的患者出现治疗后短期内一过性ALT、AST轻度升高(＜50 U)和TBIL轻度升高,余未见明显异常.随访患者1～5年,未见肝功能远期受损.病人接受治疗后,只有17%出现低热3～4天,30%的患者需口服少量止痛药3～5天.未出现肝穿大出血、胆汁性腹膜炎、肝功能衰竭等严重并发症.结论光动力治疗肝癌疗效确切,安全简便,创伤小,副作用少,生存质量高,值得进一步研究和推广应用.
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金蒸汽激光光动力疗法治疗上消化道癌的临床研究
目的 探讨金蒸汽激光用于光动力疗法治疗进展期或术后复发的上消化道癌 的近期疗效及毒副反应。方法 进展期或术后复发上消化道癌患者35例，男性27例，女性8例，平均65岁 。采用IEAu-3型金蒸汽激光治疗机，激光波长为627.8 nm，脉冲频率5.5～6.0 kHz，脉 宽40×10-9～5×10-9 s，脉冲能量70～80 kW，柱状光纤末端输出功率密度为 400～420 mW/cm2，能量密度290～300 J/cm2。HpD为光敏剂，按5 mg/kg体重于激光照 射前12～24 h静脉滴注。疗效分级采用全国与国际通用标准。结果 完全效应16例（占45.7%），明显效应7例（占20.0%），稍有效应7例 （占20.0%），无效5例（占14.3%）。总有效率（CR+PR）为65.7%。3例出现较明显局部 疼痛，3例有局部刺激症状，其余患者未出现明显毒副反应。结论 金蒸汽激光光动力疗法治疗进展期或术后复发的上消化道癌疗效肯定 ，毒副反应轻，耐受性好，是一种较好的姑息治疗手段。
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血管平滑肌细胞对血啉甲醚吸收特性的研究
目的:探讨血管平滑肌细胞(SMC)对光敏剂血啉甲醚(HMME)的吸收特点及影响因素,为进一步建立动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄的光动力治疗方法提供实验依据.方法:培养兔主动脉SMC并接种至96孔培养板.首先,培养液中分别加入HMME和血卟啉衍生物(HpD),浓度分别为20、40、60、80、100 μg/ml,孵育时间分别为0、15、30、60、120、180、240 min,采用荧光分析法测定细胞内光敏剂含量,绘制SMC吸收光敏剂的浓度-含量和时间-含量关系曲线.其次,将SMC分成血小板生长因子组、胎牛血清组和对照组,前两组培养液中分别加入10 ng/ml血小板生长因子或10%胎牛血清,12 h后进行光敏剂含量测定、细胞计数,并用MTT比色法测定琥珀酸脱氢酶活性.结果:SMC对HMME和HpD的吸收量随孵育浓度的增高和孵育时间的延长而增加,但HMME的曲线上升斜率明显大于HpD.SMC对HMME的吸收量可较HpD高130%～170%(P＜0.05).血小板生长因子或胎牛血清作用12 h后,两组SMC数量与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05),但SMC琥珀酸脱氢酶活性血小板生长因子组较对照组增加62.1%(P＜0.05),胎牛血清组较对照组增加119.4%(P＜0.05);同时,SMC吸收HMME的浓度-含量和时间-含量关系曲线均明显上移,其关系为胎牛血清组＞血小板生长因子组＞对照组(P＜0.05).结论:SMC对HMME的摄取量呈孵育浓度和孵育时间依赖性,并显著高于HpD;SMC代谢状态影响其对IMME的吸收.
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血啉甲醚与血卟啉衍生物对鸡冠皮肤光敏损伤特点的比较研究
目的 采用形态学方法观察比较国产新型光敏剂——血啉甲醚（HMME）与传统光敏剂——血卟啉衍生物(HpD)对鸡冠表皮层、真皮乳头层毛细血管网、乳头下网状层和真皮深层组织的光敏损伤特点。方法 成年莱亨鸡234只，随机分为对照组42只，实验组192只。实验组动物静脉注射HMME或HpD 1、5、10或20 mg/kg，于给药后即刻、1、2、3或4 h对鸡冠进行激光照射，波长为488.0和514.5、510.6、578.2或627.8 nm，功率密度为50、100或150mW/cm2，能量密度为30、60、90、120、150、180或270 J/cm2，于照射后即刻、1、3、7、14和28天取材，进行大体和光镜观察。结果 PDT作用区的红色鸡冠完全变白，乳头层毛细血管网内皮细胞(EC)坏死、管壁破坏及血管数量减少，其作用程度与光敏剂给药量和激光照射量相关。HMME和HpD对乳头层毛细血管网的损伤程度相似；HMME组未见表皮及乳头下各层损伤，而部分HpD组见表皮基底细胞层有局灶性坏死、乳头下网状层有微血管及结缔组织损伤和淋巴细胞浸润。结论 HMME和HpD对鸡冠真皮乳头层毛细血管网的损伤程度相似，但HMME的组织选择性优于HpD。
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血卟啉衍生物静脉注射后在皮肤中分布的实验研究
目的探讨鲜红斑痣光动力学疗法中血卟啉衍生物(HpD)的理想剂量和理想照光时间.方法 5组实验用新西兰白兔(每组6只)分别按2、3、5、7、10 mg/kg静脉注射HpD,采用快速冰冻切片技术,于荧光显微镜下观察不同时间HpD在真皮血管内、真皮血管外间质和表皮的分布情况.结果 HpD在真皮浅层血管内出现时间,2、3 mg/kg二组为15 min,5、7、10 mg/kg三组为5 min;HpD在真皮血管外间质出现时间,各组依次为60、60、30、15、5 min;HpD在表皮出现时间,3、5、7、10 mg/kg各组依次为90、60、30、5 min,2 mg/kg组观察至120 min未出现.结论运用光动力学疗法治疗鲜红斑痣的剂量应掌握在3～5 mg/kg之间,注射完毕后即可开始照光,3 mg/kg时照光时间不宜超过90 min, 5 mg/kg时不宜超过60 min.
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HpD光动力效应对裸鼠视网膜超微结构的影响
我们在注入血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative, HpD)后激光照射裸鼠眼球，用电镜观察其视网膜病理变化。现将结果报告如下。 材料与方法 进口倍频Nd∶YAG激光仪，波长532 nm。Balb/c裸鼠18只，体重20～25 g，雌雄各半，随机分成6组，每组3只鼠，均以右眼为实验眼。A、B和C组注入HpD(北京制药工业研究所制备)后，以激光照射右眼。照射时间均为15 min，功率密度分别是：A组50 mW/cm2、B组150 mW/cm2、C组300mW/cm2。D组仅注入HpD不经激光照射。E组不注入HpD，仅用激光照射、功率密度为300 mW/cm2，照射时间15 min。F组不作任何处理。实验过程：A、B、C和D组裸鼠尾静脉注射HpD 5 mg/kg，暗室环境72 h。A、B、C和E组裸鼠腹腔注射4.3%水合氯醛430 mg/kg麻醉后，用倍频Nd∶YAG激光照射裸鼠眼球，激光输出功率为50 mW，通过调整激光束在角膜水平光斑大小来改变功率密度。激光束在角膜水平光斑直径分别为1.13、0.65和0.46 cm，其相应的功率密度则分别为50(A组)、150(B组)和300 mW/cm2(C组及E组)。激光照射后24 h处死动物。立即摘下右眼球用2.5%戊二醛-多聚甲醛液固定，取后极部眼球壁切成1 mm×2 mm大小组织块，PBS磷酸缓冲液洗，1%锇酸后固定，经各级丙酮脱水，Epon-812渗透包埋，半薄切片，1%甲苯胺蓝染色进行视网膜定位后再行超薄切片，切片厚60 nm，醋酸铀及柠檬酸铅双重染色，H-600透射电镜观察。
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光动力学疗法的免疫作用
光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)又称光敏疗法、光化学疗法,是一种发展迅速、很有前途的新型医疗技术.从Dougherty[1]提出用血卟啉衍生物加光辐射治疗恶性肿瘤至今,PDT在恶性肿瘤和其他多种良性疾病,如眼科疾病、皮肤疾病等的治疗中发挥越来越重要的作用[2].对于PDT作用机制,人们开始由其单纯的单态氧的杀伤作用,逐渐认识到其免疫反应的长期效应.国内外对PDT免疫作用的研究越来越受到关注.
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光动力疗法治疗眼科疾病研究进展
光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)不是一个新概念,早在1900年就有光敏细胞毒反应的记载[1].20世纪70年代,人们应用血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HpD)治疗人和动物的恶性肿瘤获得成功,从而成为现代PDT的开端.之后人们对PDT的作用机制及临床应用进行了大量研究,并取得了令人瞩目的进展.
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线粒体光损伤与光动力诱导细胞凋亡
在分子水平上研究光动力治疗的作用机制是近年来的进展.但临床上常用的光敏剂血卟啉衍生物HpD是一种混合物,很难用以研究光敏损伤部位与细胞死亡之间的确切关系.
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应加强光动力疗法治疗食管癌的基础与临床研究
光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗肿瘤的原理是利用生物合成的光敏剂停留在肿瘤组织中,然后使用特定波长的光照射,依次产生光化学及光生物学反应,引起肿瘤组织不可逆损伤的一种微创性治疗方法.20世纪70年代以来,国内外进行的临床前期及临床期研究结果表明,PDT内镜能到达的癌肿是有肯定作用的.1996年,美国食品药品监督管理局(FDA)批准部分纯化的血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HPD)Photofrin作为PDT治疗食管癌,此后,法国、荷兰、日本、德国等先后批准Photofrin治疗早晚期食管癌、胃癌.近年来,PDT广泛用于多器官、多部位的肿瘤及非癌症状的治疗,取得了一定的疗效[1-2].
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血卟啉衍生物光动力治疗人胰腺癌细胞的实验研究
目的 研究血卟啉衍生物光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人胰腺癌细胞株PANC1的杀伤效应及其规律.方法 以Biolitec PDT 630半导体激光治疗仪为光源,用不同浓度的血卟啉衍生物Photosan(0.5、1、2、4 mg/L)作为光敏剂孵育PANC1细胞8 h后,分别给予不同剂量(1、5、10 J/cm~2)630nm激光照射,用MTT法测定PDT后各组的A_(492)值,以流式细胞仪测定10 J/cm2光照后细胞凋亡情况.结果 不加光敏剂Photosan或不进行光照,对细胞均无杀伤效应;添加1 mg/LPhotosan时,10 J/cm~2 的光照对细胞产生杀伤效应(0.140±0.013对0.213±0.008,P＜0.05);添加2 mg/L Photosan时,5 J/cm~2 和10 J/cm~2 的光照对细胞产生杀伤效应(0.081±0.024和0.049±0.013对0.211±0.031,P＜0.05和P＜0.01);添加4 mg/L Photosan时,所有光照剂量均对细胞产生明显的杀伤效应.但5 J/cm~2与10 J/cm~2光照对细胞的杀伤效应无显著差异.用10J/cm~2光照,0、2、4mg/LPhotosan时的细胞凋亡率分别为(13.8±1.8)%、(40.9±1.6)%、(62.5±2.0)%,差别具有统计学意义(P＜0.05).结论 单纯给予光敏剂或光照对PANC1均不产生PDT效应.光敏剂达到一定浓度,光照达到一定剂量后,PDT效应随其增加而增强.
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血卟啉光动力作用杀伤人胆管癌细胞的实验研究
目的 研究血卟啉化衍生物(hematoporphyrin derivative,HPD)光动力作用(photodynamic therapy,PDT)对人胆管癌细胞QBC939的杀伤效应.方法 以人胆管癌细胞系QBC939为研究对象,采用血卟啉化合物作为光敏剂,半导体激光治疗仪为光源.实验分为对照组(空白对照组、单纯光动力组、单纯光敏剂组)和光动力作用组,以系列浓度的血卟啉经不同强度光照后,用MTT法测定PDT对QBC939细胞的相对抑制率和筛选佳PDT参数.结果 光动力作用组的吸光度(OD值)与对照组间的差异具有统计学意义(P＜0.01),随着HPD浓度的增加和光照强度的增大,光动力作用对细胞的相对抑制率逐渐增大.不同的光敏剂浓度和光照强度间组合能达到相同的抑制率,如以10 mg/L HPD经5 J/cm2光照强度或以4 mg /L HPD经15 J/cm2光照强度对QBC939均可以达到92%相对抑制率.在佳光照能量密度条件下,设计三组功率-时间组合,组间没有显著差异.结论 1)PDT对人胆管癌细胞QBC939具有明确的杀伤作用,其对细胞的抑制率具有显著的剂量效应关系.光敏剂浓度和光照强度间存在交互关系,从临床角度考虑,采用较低的光敏剂浓度经较大的光照强度照射是理想的PDT治疗方案.2) 改变功率时间的组合不会影响光动力对胆管癌细胞杀伤作用, 采用在光纤承受范围内的大功率短时间的照射方式可达到安全快捷的目的 .
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光动力诊断和荧光指导切除脑恶性胶质瘤15例
目的研究光动力诊断(PDD)和荧光指导的肿瘤切除在脑恶性胶质瘤治疗中的作用.方法对手术治疗的原发和复发的15例恶性脑胶质瘤患者,在手术中进行荧光波谱诊断及其指导下的肿瘤切除.光敏剂为血卟啉衍生物,剂量为2 mg/kg体重.应用激光电子波谱分析系统,光纤尖端激发激光波长632.5 nm.手术前48 h静脉注射光敏剂,注射后患者进行避光.手术为常规开颅手术,显微镜下切除肿瘤.在手术医师认为肿瘤完全切除后用光纤探头在瘤腔各壁进行多于4个点的光动力诊断,同时取该点样本送常规病理.如光动力诊断发现肉眼未发现的肿瘤则进一步切除.直至瘤腔各壁均确认为正常脑组织.分别记录肉眼辨别,光动力诊断和病理诊断结果,计算光动力诊断的敏感率,特异率和准确率.术后复查CT或MRI确定切除程度,记录手术死亡率和致残率.结果 15例肿瘤标本均表现特异肿瘤波谱图形,其中有2例患者在光动力诊断后发现肿瘤,继续切除肿瘤.有1例显微镜下可疑肿瘤组织,经光动力诊断为脑组织,未切除,取病理证实为脑组织.2例(胶质肉瘤和胶质母细胞瘤)离体肿瘤组织和正常脑组织进行光动力诊断,均获得和术后病理诊断相一致的诊断.在瘤腔各壁取样标本106份,根据病理诊断,光动力诊断的敏感率90.6%,特异率96.8%,准确率94.3%.15例患者无手术死亡,1例术后偏瘫失语加重.9例患者肿瘤全切,6例患者肿瘤未全切,其中5例患者因肿瘤位于功能区,为保护功能未能全切肿瘤,并被手术后MRI或CT证实.有1例术中肉眼辨认和PDD均未提示肿瘤,但样本病理提示仍为肿瘤边缘组织.结论荧光波谱分析的光动力诊断具有比较快速准确、简单客观等特点,对于提高脑恶性胶质瘤的切除程度和减少手术损伤具有积极意义.
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血卟啉光动力对人胆管癌细胞转移潜能影响实验研究
目的:探讨血卟啉衍生物介导的光动力疗法(hematoporphyrin derivative,HPD-PDT)对人胆管癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:体外培养人胆管癌细胞系QBC939,经系列浓度的HPD处理,并应用半导体激光治疗仪给予不同强度的光照,CCK-8试剂盒检测HPD-PDT对人胆管癌细胞增殖的影响；Transwell小室(Matrigel侵袭实验)检测HPD-PDT对人胆管癌细胞体外侵袭能力的影响；酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中分泌的VEGF-C浓度变化；RT-PCR检测细胞中VEGF-C mRNA的表达变化；SP免疫组化染色观察细胞中VEGF-C蛋白的表达变化.结果:CCK 8检测结果显示,HPD-PDT在体外能够抑制QBC939细胞生长,当HPD质量浓度4 μg/mL和光照剂量5 J/cm2时,实验组A450值为1.541 7±0.098 3,明显低于空白对照组的2.027 8±0.198 6,P＜0.01;细胞生长抑制率达到23.97％,且随着激光能量密度及光敏剂浓度的增加,其抑制作用也越明显.体外侵袭实验结果显示,实验组穿过Matrigel胶的细胞数为13.33±1.155,明显少于空白对照组的31.67±2.517,P＜0.01；ELISA结果显示,实验组上清液中分泌的VEGF-C浓度为(1 558.241 7±97.114 3) ng/L,低于空白对照组的(1 716.375 0±45.047 2)ng/L,P＜0.05；RT-PCR结果显示,实验组VEGF-C mRNA/ hGAPDH的比值为0.7009±0.1872,明显低于空白对照组的1.542 5±0.107 8,P＜0.01；SP免疫组化染色结果显示,实验组VEGF-C蛋白表达阳性的细胞百分率为24.52％±2.22％,明显低于空白对照组的56.94％±3.38％,P＜0.01.结论:HPD-PDT能够抑制人胆管癌细胞QBC939的增殖活性及体外侵袭能力,并有可能通过下调VEGF-C因子的表达进一步抑制胆管癌的生长和转移.
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不同条件下光动力治疗对C6胶质瘤细胞的作用
目的 分析不同条件下应用血卟啉衍生物(HpD)的光动力学疗法(PDT)对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法 MIT法检测PDT后C6细胞的生存率:(1)不同HpD浓度组(0、2、5、10、20、30及40 mg/L)C6细胞PDT(628 nm、20 mW/cm2、照光5 min)后的生存率;(2)C6细胞分别与不同浓度HpD(0、5、10、20、30及40 mg/L)孵育不同时间(0.5、1、3、6、12及24 h)行PDT(628nm,20 mW/cm2)后的生存率;(3)不同照光强度下(10、20及30 mW/cm2)PDT后C6细胞的生存率.结果 不同条件下PDT治疗对C6细胞的作用不同:(1)当HpD浓度低(2mg/L)、HpD与细胞孵育时间短(<3 h)时不能对细胞产生抑制或杀伤效应;(2)PDT后C6细胞的生存率随着HpD浓度的升高而降低,随着细胞与HpD孵育时间的延长而降低(>12 h后各组间差异无统计学意义),随着照光强度的增强而下降(20与30 mW/cm2之间差异无统计学意义).结论 HpD介导的PDT对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用与HpD浓度、HpD与细胞孵育时间及照光强度等有关,在不同条件下可表现为促进肿瘤细胞生长或杀伤肿瘤细胞的作用.
