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血卟啉单甲醚和声诺维在超声辐照下诱导三阴乳腺癌细胞凋亡的协同效应
目的 探讨血卟啉单甲醚(HMME)和声诺维(SonoVue)在超声辐照下对MDA-MB-231细胞凋亡的影响.方法 将处于对数生长期的MDA-MB-231细胞分为5组(对照组、U、UM、UH组和UHM组).采用优化后的实验参数,50 Hz脉冲波照射60 s.采用流式细胞仪检测照射后MDA-MB-231细胞的线粒体膜电位和凋亡率.结果 对照组、U、UH、UM、UHM组的几何平均荧光强度值分别为(85.1±17.3)、(89.0±13.8)、(146.4±12.8)、(97.3±23.2)、(154.8±19.6).对照组、U、UH、UM、UHM组的细胞凋亡率分别为(1.62±0.49)％、(14.16±3.34)％、(26.03±5.79)％、(53.08±12.71)％、(69.53±9.79)％,经过N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后,UH+ NAC组、UM+NAC组、UHM+ NAC组的细胞凋亡率分别为(14.15±4.17)％、(24.36±6.66)％、(47.21±5.00)％.结论 SonoVue和HMME在超声辐照下能够相互协同诱导MDA-MB-231细胞凋亡,活性氧参与该过程.
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载HMME微球对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制研究
目的 探讨自制载血卟啉单甲醚(HMME)的聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)高分子微球HMME/PLGA对卵巢癌SKOV3细胞的急性细胞毒作用及增殖能力的影响.方法 实验分为5组:(Ⅰ)单纯细胞(对照组),(Ⅱ)超声+细胞,(Ⅲ)超声+ PLGA+细胞,(Ⅳ)超声+HMME+细胞,(Ⅴ)超声+ HMME/PLGA+细胞.超声辐照声强0.50 W/cm2,频率1 MHz,Ⅳ组和Ⅴ组HMME浓度为20μg/ml.以CCK8法检验各组不同超声处理时间(10 s、30 s、60 s、90 s)对卵巢癌SKOV3细胞存活率的影响,并于上述实验基础上检测各组对SKOV3细胞12 h、24 h、36 h、48 h增殖能力的影响.结果 急性细胞毒实验及抑制增殖实验显示:Ⅴ组(US+ HMME/PLGA+ cell)较其余各组能明显降低SKOV3细胞的存活率(P＜0.05),抑制肿瘤细胞的增殖活性(P＜0.05).结论 自制的HMME/PLGA高分子微球,对卵巢癌SKOV3细胞有明显的杀伤、抑制功能,有望应用于体内的卵巢癌治疗.
关键词： 血卟啉单甲醚 卵巢癌SKOV3细胞 细胞毒性 增殖 -
HMME在不同溶液中光漂白反应动力学规律
目的 分析国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)在不同溶液中光漂白反应动力学规律,加深对光漂白反应复杂反应过程的理解,并为HMME-PDT治疗微血管病变的数学建模研究提供实验依据和参数.方法 根据光化学反应动力学原理,从理论上推导出在单纯溶液和复杂溶液(含可被光氧化的底物)中,单态氧介导的光漂白反应动力学方程,通过对实验测定的漂白数据(不同时间点的HMME浓度)进行拟合,进一步验证理论推导出光漂白反应动力学方程.结果 HMME在单一溶液体系(PBS、DMSO)中的光漂白符合1级反应动力学过程,在含底物的复杂体系(白蛋白缓冲液、细胞悬液)中符合2级反应动力学过程.结论 HMME在不同溶液体系中的光漂白遵循不同的反应动力学规律.根据化学反应动力学原理进行光漂白等复杂光化学反应过程的数学模拟是可行的,并有利于对复杂光化学反应过程的深入理解.
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不同参数HMME-PDT对兔耳增生性瘢痕的生物效应
目的 观察不同参数的血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)对兔耳增生性瘢痕的生物学效应,为临床应用HMME-PDT防治增生性瘢痕提供实验依据.方法 建立兔耳增生性瘢痕模型后,将150个增生性瘢痕块随机分为HMME-PDT治疗组和对照组.PDT治疗组给予HMME10 mg/kg,分别在给药后即刻、30min、1和3 h行半导体激光照射,波长630nm,能量密度分别为5、10和20 J/cm2.观察瘢痕生长情况,术后28 d取材行常规HE染色,计算各组瘢痕增生指数,分析HMME-PDT对瘢痕的影响.结果 静脉注射HMME 10 mg/kg后,以功率密度为20 mW/cm2,能量密度为5 J/cm2的半导体激光在给药后即刻和30 min照光时能对瘢痕增生块产生抑制效应,其中以时间间隔为30 min时的作用更加显著,而能量密度为20 J/cm2的激光照射瘢痕增生指数仍然较高,甚至超过空白对照组.结论 HMME-PDT对兔耳增生性瘢痕的生物学效应与光敏剂的剂量和激光照光时间、给药后至照光的时间间隔和能量密度密切相关.
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细胞种类及孵育时间对血卟啉单甲醚在细胞内分布的影响
目的探讨细胞种类和孵育时间对光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)在细胞内分布的影响.方法传代培养小鼠肺内皮细胞(1H11)和A549肺癌细胞,分别与光敏剂HMME孵育2 h和12 h.应用由荧光显微镜及CCD组成的高分辨率荧光显微成像系统,结合荧光探针标记技术,采用细胞器-细胞荧光强度比值法研究HMME在不同条件下的亚细胞分布情况.结果在2 h和12 h 2个孵育时间点高尔基体的J1/J2值都高;随着孵育时间延长,A549细胞的4种细胞器的J1/J2值都升高且溶酶体幅度大,而小鼠肺内皮细胞只有溶酶体的J1/J2值呈升高趋势,高尔基体、内质网和线粒体等细胞器的J1/J2值均呈下降趋势;A549细胞溶酶体的J1/J2值升高的幅度明显高于鼠肺内皮细胞.结论HMME在不同种类细胞内的亚细胞分布是不同的.孵育时间对HMME亚细胞分布的影响显著.随着孵育时间的延长,A549肺癌细胞各细胞器吸收HMME能力逐渐增强,尤以溶酶体显著;小鼠肺内皮细胞中除溶酶体外各细胞器吸收HMME能力逐渐减弱.孵育12 h后,A549肺癌细胞各细胞器吸收HMME能力均强于鼠肺内皮细胞.
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线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用
目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚( HMME)- PDT诱导 HeLa细胞凋亡中的作用. 方法膜联蛋白 (annexin)V- PI双染法检测 HMME- PDT处理后 6 h HeLa细胞的凋亡率和坏死率. Rh123染色法检测 PDT后 2 h内 HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψ m)变化. Western 杂交法检测 PDT后 6 h内细胞质内细胞色素 C( Cyt C)的含量变化. 结果 HMME- PDT后 6 h HeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为 11.48%± 3.42%和 17.68%± 1.05%. PDT后 2 h内△Ψ m无显著改变. PDT后即刻( 0 h)细胞质内未检测到 Cyt C,而在 PDT后 2、4和 6 h均可检测到 Cyt C,且含量有增高的趋势. 结论线粒体内的 Cyt C转位于细胞质,是 HMME- PDT导致 HeLa细胞凋亡的机制之一.
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血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响
目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响.方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40 μg/ml的HMME孵育1 h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30 min、1和2 h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2.5、5、10、20和40 μg/ml的HMME孵育2 h,用532 nm的倍频Nd:YAG激光以20 mW/cm2的功率密度分别照射0、2.5、5、10、20 min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24 h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率.结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多.单独照光或以高达40 μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P＞0.05).在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性.结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用.
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HMME-PDT对C666-1和CNE2细胞杀伤效应的实验研究
目的 比较在血卟啉单甲醚(HMME)介导下C666-1和CNE2鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NTC)细胞对光动力疗法(pho-todynamic therapy,PDT)的杀伤效应和引起差异的可能因素.方法 利用荧光光谱测量技术和激光扫描共聚焦显微技术分别检测HMME在c666-1和CNE2细胞中的潴留浓度和亚细胞分布;用细胞克隆形成方法评估C666-1和CNE2细胞的PDT疗效.结果 C666-1和CNE2细胞中HMME的潴留浓度随着细胞和光敏剂的孵育时间增加而增大,但CNE2细胞对HMME的吸收明显高于C666-1细胞;随着孵育时间的增加,细胞对HMME的吸收趋于饱和.HMME主要分布在c666-1和CNE2细胞的细胞核外周.在相同实验条件下,HMME.PDT对C566-1和CNE2细胞杀伤效果存在显著差异,CNE2的细胞存活率小于C666-1细胞.结论 HMME-PDT作用下C666-1细胞存活率明显高于CNE2细胞,其主要原因是CNF2细胞对HMME的吸收高于C666-1.细胞内光敏剂的潴留浓度是决定PDT疗效的一个关键要素.
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不同活性氧成分在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用
目的探讨不同活性氧成分在血卟啉单甲醚 (HMME)-PDT诱导 HeLa细胞死亡中的作用. 方法将接种人宫颈癌 HeLa细胞的培养皿随机分成单纯 HMME-PDT组、 HMME-PDT加叠氮钠 (单线态氧淬灭剂 )与 HMME-PDT加甘露醇 (羟自由基淬灭剂 )组.以功率密度为 15 mW/cm2,能量密度为 5.4 J/cm2、波长为 510.6 mm的激光照射.用膜联蛋白 (annexin)V-碘化丙啶 (PI)双染法检测激光照射后第 6和 24 h三组中 HeLa细胞的凋亡率和坏死率. 结果 PDT后第 6小时,单纯 HMME-PDT组和 HMME-PDT加入叠氮钠组的坏死率 17.68%± 1.05%和 4.15%± 2.19%( P=0.0006),单纯 HMME-PDT组和 HMME-PDT加 D 甘露醇组的 HeLa细胞凋亡率分别为 11.48%± 3.42%和 3.19%± 1.01%( P=0.0158). PDT后第 24小时,单纯 HMME-PDT组的 HeLa细胞凋亡率和坏死率分别为 48.51%± 2.85%和 19.26%± 1.57%,加入叠氮钠组为 40.45%± 3.56%和 13.12%± 2.75%,加入 D 甘露醇组为 39.43%± 4.37%和 21.00%± 4.31%. 结论 HMME-PDT产生的单线态氧以导致 HeLa细胞坏死为主,而羟自由基则以导致细胞凋亡为主.
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HMME-PDT对兔耳增生性瘢痕块成纤维细胞增殖能力及其超微结构的影响
目的 观察血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)-光动力学疗法(photodynamie therapy,PDT)对兔耳增生性瘢痕块中成纤维细胞增殖能力及细胞超微结构的影响.方法 建立兔耳增生性瘢痕模型后,将24个瘢痕块随机分为HMME-PDT治疗组和对照组(n=12).造模后28 d取材行银染色,计算瘢痕成纤维细胞核内AgNORs颗粒数,并在透射电镜下观察细胞超微结构改变,分析HMME-PDT对瘢痕的影响.结果 HMME-PDT治疗后,银染成纤维细胞核内AgNORs颗粒数显著下降,细胞内粗面内质网萎缩且数量减少;核糖体脱颗粒、解聚;线粒体肿胀,嵴溶解;并出现部分细胞凋亡现象.结论 在瘢痕形成早期,HMME-PDT能够抑制兔耳瘢痕成纤维细胞的增殖能力,破坏前胶原蛋白合成的场所,减少胶原蛋白的合成与分泌,并能诱导部分成纤维细胞进入凋亡途径,HMME-PDT有可能成为瘢痕防治的有效方法.
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钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用
目的了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后 HeLa细胞中的变化和作用.方法 Fura-2/AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度 [Ca2+ ]i的变化,MTT法分析 PDT及钙离子对 HeLa细胞存活率的影响,Western 印迹法分析 HMME-PDT后 HeLa细胞的肌浆 /内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况.结果 HMME-PDT处理后即刻 HeLa细胞内 [Ca2+ ]i就开始增高,且与 PDT剂量成正相关用,BAPTA/AM拮抗 [Ca2+ ]i的升高可增加 HeLa细胞的存活率.同时 HMME-PDT可引起 SERCA2蛋白的降解.结论 HMME-PDT处理后 HeLa细胞内 [Ca2+ ]i可迅速增高,[Ca2+ ]i 升高可能与 SERCA2蛋白的降解相关,并可促进 HeLa细胞的死亡.
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血卟啉单甲醚在生理盐水溶液中光漂白的研究
目的 观察在光动力学反应过程中血卟啉单甲醚(HMME)的光漂白现象,探讨其影响因素.方法 通过本研究建立的光敏剂荧光分析系统,应用光学多通道分析仪对生理盐水溶液中HMME介导的光动力反应过程中光漂白的情况进行监测.HMME的浓度分别为1、10μg/ml.Nd:YAG倍频532 nm激光作为光动力的照射光源,同时利用其作为荧光激发光源.在光动力反应过程中采集溶液的荧光光谱,并进行分析处理.结果 光敏剂HMME在一定的浓度范围内,初始浓度越高,光漂白的速率越快.在HMME的光漂白过程中于639 nm处出现新的荧光峰.根据漂白造成的自体背景的变化,HMME的光漂白可以分为两个阶段:(1)在0～45 min阶段,随着照光过程的持续,HMME在613 nm与674 nm处的荧光特征峰强度下降,同时在639 nm处出现新的荧光峰,且其强度持续增强,自体背景强度起伏很小,稳定在HMME初始荧光强度的0.16倍左右;(2)而45～90min阶段,随着照光时间延长,在613、674和639 nm处荧光峰的强度均下降,自体背景强度呈接近于线性持续增强,到照光结束时增至HMME初始荧光强度的约0.45倍.结论 HMME的光漂白是一个较复杂的过程,初始浓度影响其漂白的速度,并伴有光漂白产物的生成及其再漂白的现象.
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激光功率密度对HMME-PDT的视网膜和脉络膜生物学效应的影响
目的观察激光功率密度对血卟啉单甲醚(HMME)的视网膜和脉络膜的光动力效应的影响.方法以新西兰兔正常脉络膜毛细血管层为实验对象,HMME注射剂量为5 mg/kg,波长532 nm激光作为激发光源,眼底光斑能量密度为20 J/cm2,功率密度分别为100、200、300和400 mW/cm2,相匹配的照射时间分别为200、100、66和50 s,照光时机为注射药物结束后5 min之内.在PDT后第6小时和12小时,1、3和5天进行眼底观察、荧光眼底造影,并在眼底造影出现脉络膜毛细血管闭塞时取照光部位进行组织学检查.结果激光功率密度为100 mW/cm2,PDT后第5天出现脉络膜毛细血管的选择性闭塞;功率密度为200 mW/cm2时,PDT后第3天出现脉络膜毛细血管的选择性闭塞;功率密度为300 mW/cm2时,PDT后第1天出现视网膜的非选择性损伤,PDT后第3天视网膜恢复正常,脉络膜毛细血管闭塞;功率密度为400mW/cm2时,PDT后第6 h出现视网膜的非选择性损伤,PDT后第5天视网膜恢复正常,脉络膜毛细血管和大部分脉络膜大血管的闭塞.结论在激光能量密度相同时,其功率密度是影响生物学效应的重要因素.即随着功率密度的增加,生物学效应出现的时间提前,照射部位的视网膜和脉络膜大血管受累的可能性越大.
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光动力药物血卟啉单甲醚HPLC-荧光检测法的建立及其药代动力学研究
目的建立测定血浆中血卟啉单甲醚(HMME)的HPLC-荧光检测法,并用以进行HMME在犬体内的药代动力学研究.方法血浆中的HMME采用乙酸乙酯液-液萃取,荧光素为内标.选用C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),0.02 mol/L 醋酸钠(用冰醋酸调pH 6.0)-四氢呋喃(60∶40)组成为流动相,荧光检测器激发波长为 395 nm,发射波长为 613 nm.结果 HMME血药浓度的范围为0.025～5.000 μg/mL,采用两条标准曲线定量的方法,两条标准曲线的线性范围分别为:0.025～0.500 μg/ml(r=0.9973)和0.25～5.00 μg/ml(r=0.9999),提取回收率92.1%～99.2%,日内、日间RSD分别为3.3%～8.4%和3.8%～8.5%. 静脉给药后,HMME在犬体内的药代动力学符合开放二房室模型.其主要药代动力学参数:T1/2α(分布半衰期) =(0.18±0.16)h,T1/2β(消除半衰期) =(14.24±3.41)h, Vd(中央室表观分布容积)=(6.37±3.70)L/g,CL(清除率) =(0.31±0.17)L·kg-1·L-1,AUC(0-tn)(血药浓度-时间曲线下面积)=(27.40±11.72)mg·h-1L·-1.结论 HPLC-荧光检测法准确、灵敏,适用于HMME药代动力学研究.HMME在犬体内的药代动力学过程符合开放二室模型,其在犬体内可以迅速消除,可很好地消除光动力学疗法的主要副作用--正常组织的持久光毒反应.
关键词： 血卟啉单甲醚 药代动力学 光动力治疗药 HPLC-荧光检测法 -
血卟啉单甲醚在血管内皮细胞和角质形成细胞的亚细胞定位及光动力治疗作用点
目的 探讨血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)在血管内皮细胞系ECV304和角质形成细胞系HaCaT的亚细胞定位及光动力疗法的作用点.方法 HMME与ECV304和HaCaT分别孵育1和18 h,选择特异性细胞器荧光探针分别标记线粒体、核膜、细胞膜和过氧化物酶体,应用共聚焦显微镜观察孵育1和18 h时HMME与细胞器的结合率;HMME与ECV304和HaCaT分别孵育20h,细胞器荧光探针选择同前,给予532 nm连续激光照射,分别在照光前后采集上述细胞器中HMME的荧光强度,比较照光前后HMME的漂白率.结果 HMME与细胞器的结合率结果示,ECV304孵育1 h时线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体HMME的结合率分别为1.18±0.18、0.72±0.21、0.95±0.24、0.68±0.15,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.35±0.13、0.83±0.11、0.73±0.13、0.91±0.15;HaCaT 1 h组孵育1 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.09±0.12、0.66±0.20、0.92±0.24、0.77±0.16,孵育18h时上述4种细胞器HMME的结合率1.13±0.13、0.86±0.12、0.72±0.14、1.1±0.20.HMME在线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体的漂白率结果显示,ECV304分别为(18.22±3.53)%、(10.77±2.06)%、(7.44±1.06)%、(8.56±3.51)%,HaCaT分别为(11.90±1.46)%、(5.02±1.48)%、(3.82±0.54)%、(8.90±2.30)%.结论 ECV304中HMME主要定位于线粒体,HaCaT定位于的线粒体和过氧化物酶体;ECV304光动力疗法的主要作用点可能为线粒体,而HaCaT的主要作用点为线粒体和过氧化物酶体.
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体外超声激活血卟啉单甲醚抗C6胶质瘤细胞的研究
目的 研究超声激活血卟啉单甲醚(HMME),对C6胶质瘤细胞的生物效应,为声动力疗法(sonodynamic therapy,SDT)治疗脑胶质瘤奠定实验基础. 方法实验分为SDT组(超声+HMME组)、超声组、HMME组及仅加入肿瘤细胞的对照组.HMME终浓度为10 μg/ml,SDT组、超声组进行超声照射(频率:1.0 mHz,声强度:0.5 W/cm2,时间:120 s)处理.采用噻唑蓝比色分析法(MTT法)观察SDT处理后6、12、24、48和72 h的抑瘤率;流式细胞学检测SDT处理后6 h C6细胞凋亡率及细胞周期百分比.结果 SDT组抑瘤率显著增高;超声组也有一定的抑瘤率;HMME组抑瘤率与对照组无明显差别.SDT后凋亡率升高,G0/G1期、G2/M期百分比降低,S期百分比升高、凋亡增殖比(APR)升高.结论 SDT能显著杀伤C6胶质瘤细胞,并诱导其凋亡,使细胞阻滞于S期→G2期.
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血卟啉单甲醚-光动力学疗法治疗实验性脉络膜新生血管
目的 观察光敏剂血卟啉单甲醚-630 nm半导体激光器光动力学疗法对实验性脉络膜新生血管的疗效及影响疗效的因素.方法 BN大鼠共21只,随机分为空白对照组?和PDT治疗组(T1～T6).氪激光光凝诱导BN大鼠建立脉络膜新生血管动物模型后14～21d,T1～13组大鼠股静脉注射血卟啉单甲醚15 mr/ks后20 min,分别以400、600、1 000 mW/cm2功率密度,波长630 nm半导体激光照射90s,即能密度36、54、90 J/cm2;T4～T6组大鼠在给予血卟啉单甲醚30mg/kg后,以波长630 nm半导体激光分别照射60、90、150 s,即能量密度分别为36、54、90 J/cm2.眼底光斑直径皆为800～1 000μm.治疗后24 h、7 d行荧光素眼底血管造影检查和组织病理学检查,治疗后7 d行脉络膜平片的免疫组化检查.结果 荧光素眼底血管造影显示各治疗参数的CNV闭合率不同,随能量密度的增加和光敏剂剂量的增加而提高.T1、T2、T3组PDT后第24小时CNV闭合率分别为39.1%、65.2%、87.5%,PDT后第7天闭合率分别为O%、5.6%、45.5%.T4、T5、T6组PDT后第24小时CNV闭合率分别为56.5%、78.3%、90.9%,PDT后第7天闭合率分别为25.0%、68.8%、93.3%.PDT后第24小时除T1组外,其余各组均可见不同程度的CNV和脉络膜毛细血管闭合及血栓形成;T2组视网膜毛细m管和脉络膜大血管未闭合;T4、T5组部分视网膜毛细血管有附壁红细胞聚集未堵塞管腔;T3、T6组视网膜毛细血管、CNV、脉络膜毛细血管及大部分脉络膜大血管闭合.PDT后第7天各组闭塞的视网膜血管和脉络膜大血管未见完全开放.脉络膜平片的免疫组化分析显示对形成血管腔和未形成血管腔的内皮细胞均有特异性表达,用方差分析统计方法结果显示C组与T1～T6组问差异有统计意义(P<0.01).结论 血卟啉单甲醚—光动力学疗法治疗实验性脉络膜新生血管疗效确切.
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血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用
目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚( HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用. 方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型,将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组,每组 4只兔.光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚 HMME( 15μg/ml)溶液充盈在移植静脉段,再以 532 nm波长半导体激光器在吻合口 (每只兔 2处吻合口 )附近进行血管外照射 5 min,功率密度 100 mW/cm2,能量密度 30 J/cm2;单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段,再用激光照射;单纯光敏剂灌注组仅用 HMME( 15μg/ml)溶液充盈移植静脉段 5 min;空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段 5 min.术后第 4周于各实验组移植静脉的动静脉连接部及其两侧 0.5 cm处的动脉端、静脉端取材,常规石蜡包埋切片 HE染色,组织病理观察,采用 IMAGE- Pro Plus生物医学图像分析系统,观察不同处理组内膜增生程度的差异. 结果在移植静脉吻合口的动静脉连接部、动脉端及静脉端,光动力学治疗组与其他各组相比内膜增生程度明显减低. 结论光动力学疗法对移植静脉早期阶段的再狭窄有明显的抑制效应.
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两亲性光敏剂血卟啉单甲醚在不同溶液体系中的存在状态
目的测定血卟啉单甲醚(HMME)在不同浓度、不同溶液体系中的存在状态,以分析其对HMME-光动力学疗法(PDT)的影响.方法按所用溶剂实验分为以下4种溶液体系:HMME-磷酸盐缓冲液(PBS)、HMME-二甲基亚砜(DMSO)、HMME-白蛋白缓冲液和HMME-细胞悬液,每种溶液配成2、4、8、10、20、40、60、80和100 μmol/L等9个浓度.首先分别测定其吸收光谱和荧光激发光谱,根据光谱形态特征定性分析HMME在前述9个浓度的4种溶液体系中的存在状态,然后对形成聚集体的溶液利用公式定量分析HMME的缔合数、聚集平衡常数及各浓度下的缔合度.结果通过光谱特征的定性分析发现,浓度为2～10 μmol/L时,HMME在DMSO、白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中均以单体为主;浓度为20～100 μmol/L时,除DMSO溶液外在其他3种溶液中都有HMME聚集体出现.通过绘制浓度为20～100 μmol/L的HMME在PBS、白蛋白缓冲液和细胞悬液中的状态图,聚集数取2时,状态图线性关系较好,HMME在此3种溶液中形成二聚体.缔合度计算结果显示:浓度为20 μrmol/L的PBS、细胞悬液和白蛋白缓冲液中部分HMME分子开始形成聚集体,但整个溶液仍以单体为主(HMME单体百分数分别为92.3%、90.7%和95.5%);40～100 μmol/L溶液中HMME单体含量随浓度增加而减少,100μmol/L的PBS溶液和细胞悬液中70%～75%HMME为单体,近30%的HMME分子发生了聚集,而白蛋白缓冲液中83%的HMME为单体,20%的HMME分子发生了聚集.HMME在PBS和细胞悬液中的聚集平衡常数近似,而且大于在白蛋白缓冲液中的聚集平衡常数,说明HMME的聚集程度在PBS溶液和细胞悬液中比在白蛋白缓冲液中大.与疏水性血卟啉衍生物(HpD)比较结果显示,在PBS溶液中HMME在60 μmol/L开始出现明显聚集,而疏水性HpD在20μmol/L即开始出现明显聚集;定量比较各溶液体系中HpD的聚集平衡常数均明显大于HMME,且各浓度时的单体含量明显小于HMME,说明HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中的聚集趋势明显小于HpD.结论两亲性光敏剂HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中聚集性显著低于疏水性的HpD.浓度低于20μmol/L HMME在4种溶液中均以单体为主,HMME在40～100μmol/L的白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中都有不同比例HMME分子发生聚集,且都形成二聚体.HMME在不同溶液中的聚集程度不同,按由难到易依次为:DMSO、白蛋白缓冲液、PBS≈细胞悬液.在常规给药条件下,HMME在体液中的存在形式以单体为主,但在高浓度给药时,部分HMME会聚合成聚集体,应注意聚集对HMME-PDT的影响.
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照射时机和能量对HMME-PDT的视网膜脉络膜生物学效应的影响
目的观察不同照射时机,不同激光剂量血卟啉单甲醚(HMME)光动力学疗法(PDT)对家兔正常视网膜和脉络膜生物学效应.方法以新西兰兔为实验动物,耳缘静脉注射血卟啉单甲醚,波长532nm激光为激发光源,眼底光斑直径1 500～2000μm,功率密度200、300和400mW/cm2,能量密度16、30和40J/cm2,分别在注射光敏剂结束后10 s,5、10和15min行PDT操作,每组PDT方案10个光斑.在实验后第6、12 h,1、3和5 d进行荧光眼底造影观察,并在出现脉络膜毛细血管闭塞或视网膜损伤时于照射部位取标本行组织学检查.结果注射光敏剂距照光时间10 s、5、10和15 min,能量密度16、30和40 J/cm2的情况下,脉络膜毛细血管出现选择性闭塞的发生率分别为100%(10/10),100%(10/10),0%(0/10),0%(0/10);100%(10/10),100%(10/10),20%(2/10),0%(0/10);100%(10/10),100%(10/10),40%(4/10),0%(0/10).在用药至照光时间间隔10 s,能量密度16J/cm2,在PDT后第3天开始出现脉络膜毛细血管闭塞.能量密度提高到30 J/cm2,照射后第1天开始出现脉络膜毛细血管闭塞.能量密度提高到40 J/cm2,照射后第6 h出现视网膜非选择性损伤,照射后第5天视网膜结构恢复,清晰可见脉络膜毛细血管闭塞.结论HMME-PDT可引起脉络膜毛细血管的闭塞,光动力效应出现时间和照射时机及照射光剂量有关.在HMME耳缘静脉内注射结束后5 min之内开始照光是佳照射时机,并随着照射光剂量的增加,光动力效应出现时间提前.
