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血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用
目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚( HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用. 方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型,将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组,每组 4只兔.光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚 HMME( 15μg/ml)溶液充盈在移植静脉段,再以 532 nm波长半导体激光器在吻合口 (每只兔 2处吻合口 )附近进行血管外照射 5 min,功率密度 100 mW/cm2,能量密度 30 J/cm2;单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段,再用激光照射;单纯光敏剂灌注组仅用 HMME( 15μg/ml)溶液充盈移植静脉段 5 min;空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段 5 min.术后第 4周于各实验组移植静脉的动静脉连接部及其两侧 0.5 cm处的动脉端、静脉端取材,常规石蜡包埋切片 HE染色,组织病理观察,采用 IMAGE- Pro Plus生物医学图像分析系统,观察不同处理组内膜增生程度的差异. 结果在移植静脉吻合口的动静脉连接部、动脉端及静脉端,光动力学治疗组与其他各组相比内膜增生程度明显减低. 结论光动力学疗法对移植静脉早期阶段的再狭窄有明显的抑制效应.
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可降解镁支架对移植静脉吻合口再狭窄内膜增生及内皮化的影响
目的 评价可降解镁支架(BMAS)与316L不锈钢支架对移植静脉吻合口再狭窄的治疗效果,并探索其对内膜增生及内皮化的影响.方法 27只雄性新西兰白兔随机分为可降解镁支架组(BMAS组)、316L不锈钢支架组(316L组)、对照组(NC组),每组9只.3组实验动物均行颈静脉-腹主动脉移植术,术后1个月,BMAS组与316L组经颈动脉入路于静脉桥处分别置入BMAS与316L不锈钢支架,NC组无支架置入.支架置入1、2、3、4个月后观察吻合口管腔直径变化,评价吻合口再狭窄情况;4个月时获取3组移植静脉标本,行EVG染色评价管腔形态及新生内膜面积;Evans blue染色,分光光度仪中测量620 nm波长的OD值,评价血管再内皮化情况.结果 两种支架均可有效支撑吻合口,改善吻合口管腔直径丢失,BMAS力学支撑效果可媲美不锈钢支架,且4个月时BMAS导致的血管新生内膜面积与对照组类似[(4.80±0.58)mm2,vs.(4.17±0.56)mm2,P=0.112],明显少于不锈钢支架[(6.97±0.78)mm2,P<0.001];Evans Blue染色结果显示,4个月时316L组OD值明显高于其他2组[316L vs.NC:(0.19±0.03)vs.(0.09±0.01),P=0.001;316L vs.BMAS:(0.19±0.03)vs.(0.08±0.01),P=0.001],而BMAS组与对照组无差别[(0.08±0.01)vs.(0.09±0.01),P=0.940].结论 BMAS可以有效支撑狭窄的移植静脉吻合口,力学支撑效果不弱于316L不锈钢支架,同时在减少新生内膜增殖及促进内皮化方面明显优于316L不锈钢支架,可作为未来防治移植静脉再狭窄的潜在性方法.
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生物蛋白胶外支架预防移植静脉早期损伤的实验研究
目的 以生物蛋白胶作为外周支持,研究其对兔移植静脉的影响,从而寻找更适合临床的外支架材料.方法 24只雄性新西兰大耳白兔随机分为非支架组(NS组n=12)和生物蛋白胶支架组(FS组n=12).建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型.FS组给予生物蛋白胶作为外支架.术后28天取出移植静脉,进行超微结构、组织病理分析和免疫组织化学分析.结果 超微结构显示与NS组相比,FS组移植静脉损伤程度明显减轻.免疫组化结果显示与NS组相比,FS组移植静脉细胞增殖核抗原表达明显受到抑制;NS组内皮层损伤严重,有淋巴细胞侵润,而FS组内皮层则几乎完好无损(P＜0.01);在NS组平滑肌细胞增殖活跃且向内膜迁移,FS组平滑肌细胞增殖受到抑制,且向外膜迁移;在FS组移植静脉外膜有丰富的成熟微小血管网形成,但是在NS组,微小血管数量则非常少.结论 生物蛋白胶外支架能给兔移植静脉提供足够的外周支持,明显缓解移植静脉植入动脉循环后的早期损伤.该作用与保护血管内皮完整、抑制增殖细胞核抗原表达、促使平滑肌细胞向外膜迁移和形成外膜新生血管网有关.
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内皮型一氧化氮合酶基因转染防治移植静脉再狭窄的实验研究
移植静脉再狭窄是影响冠状动脉旁路移植 (CABG)术后远期疗效的主要因素.许多研究表明,CABG术后血管桥再狭窄的发生与一氧化氮(NO)的功能异常相关[1-4],2004年7月至9月本研究采用兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,应用含人内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS) 基因重组腺病毒(AdCMVeNOS)转染移植静脉的方法,探讨eNOS基因防治静脉移植血管再狭窄的作用及其机制,为移植静脉再狭窄的防治提供实验和理论依据.
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bFGF缓释微胶囊对移植静脉桥影响的实验研究
目的通过移植静脉桥旁植入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释微胶囊,观察其对移植静脉桥的影响.方法 24只新西兰大白兔随机分为对照组(I组),空白胶囊组(II组),1μg bFGF缓释微胶囊组(III组),每组8只,建立颈部动脉旁路移植术模型.II,III组分别于移植静脉桥旁埋藏空白微胶囊,bFGF缓释微胶囊各5只.术后5周,测定移植静脉桥新内膜面积/(新内膜面积+中膜面积)(I/M),内皮依赖性大舒张反应(Emax),免疫组化PCNA阳性细胞计数,移植静脉桥内皮面积.结果与I、II组相比,III组I/M(I组0.53±0.03,II组0.48±0.05,III组0.28±0.03,P＜0.001)明显减小;Emax明显改善(I组0.13±0.03,II组0.12±0.02,III组0.36±0.04,P＜0.001);PCNA阳性细胞计数减少(I组20.75±3.37,II组20.50±3.85,III组8.38±1.69,P＜0.001);内皮面积明显增多[I组(4.08±1.61)mm2,II组(3.93±1.54)mm2,III组(12.93±2.03)mm2,P＜0.001].结论 bFGF缓释微胶囊对移植静脉桥有明显的促进内皮修复,抑制平滑肌细胞增生,恢复内皮细胞功能,抑制内膜增生的作用.
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应用自体颈外静脉重建颈总动脉的实验研究
颈动脉损伤或颈动脉被肿瘤侵及而被手术切除造成的缺损,往往需用血管替代物进行修复.虽然自体静脉移植物作为血管代用品已有近百年的历史,但其通畅率并不十分理想.Lore和Boulos[1]报道10例颈动脉重建术患者,7例选用自体大隐静脉,观察9个月～4.25年,大隐静脉仅1/3通畅.我们以羊为模型,以自体颈外静脉重建颈总动脉缺损,对移植静脉的近期通畅率、组织学改变进行观察,旨在评价以自体颈外静脉重建颈动脉的可行性,了解动脉循环状况下自体静脉及吻合口的结构变化,以期为临床开展颈动脉重建术提供依据.
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雷帕霉素纳米粒局部处理兔离体静脉对防治其移植后狭窄的作用
目的 研究用纳米缓释技术处理的雷帕霉素(RPM-NP)对移植静脉狭窄的防治作用.方法 选取家兔40只,建立兔颈外静脉间位移植至颈总动脉的移植静脉模型,按处理方式不同,分为4组:药物纳米局部干预组(RPM-NP局部处理颈外静脉,n=10,A组)、药物纳米全身干预组(RPMNP周围静脉滴注,n=10,B组)、空白纳米局部干预组(空白纳米粒局部处理颈外静脉,n=10,C组)和未干预组(不做上述处理,n=10,D组).术后28 d,切取各组移植静脉和对侧正常静脉,病理学检测移植静脉内膜厚度、内径、内膜/中膜厚度比以及胶原容积指数.结果 移植静脉的组织病理学检测结果表明,A、B、C、D组移植静脉和对侧正常静脉的内膜/中膜厚度比分别为0.26±0.02、0.73±0.05、0.71 ±0.04、0.69±0.03、0.24±0.01,胶原容积指数比分别为0.24±0.03、0.56±0.06、0.53±0.07、0.49±0.08、0.21 ±0.01.B、C、D组的组织病理学(移植静脉内膜厚度、内径、内膜/中膜厚度比以及胶原容积指数)与对侧正常静脉组比较,均出现明显的病理学改变,差异均有统计学意义(均P＜0.05)；3组之间移植静脉的组织病理学结果比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).而A组移植静脉的组织病理学结果与对侧正常静脉比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；与其他3组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用纳米缓释技术处理的雷帕霉素,对离体的移植静脉行管腔内局部处理,能抑制移植静脉内膜增生,防治移植静脉狭窄.
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细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达
目的 研究细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达变化及其与内膜增生的关系.方法 雄性Wistar大鼠36只,8周龄,体质量140 g.建立颈静脉-腹主动脉移植模型,分别于术后14 d、28 d各处死18只大鼠,取材移植血管,免疫荧光检测Gli2蛋白在移植血管新生内膜中的表达,Western印迹法观察Gli2及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,RT-PCR检测Gli2-mRNA的表达;以对侧颈静脉作为对照.结果 免疫组化结果显示,正常静脉、术后14 d和术后28 d移植静脉Gli2+细胞数比例分别为(3.2±0.4)%、(41.3±0.6)%和(58.3±0.6)%,正常静脉与移植静脉差异有统计学意义(P＜0.01).Western印迹法显示术后Gli2表达水平增加并与PCNA表达呈正相关(r=0.826,P＜0.01).RT-PCR结果显示术后14 d组和术后28 d组的Gli2 mRNA表达增加,分别为对照组含量的8.9和13.6倍.结论 自体静脉移植术后,Gli2在新生内膜中高表达并可能与细胞增殖相关.
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卡托普利对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响
自体静脉移植被广泛应用于治疗动脉闭塞性疾病,但血管内膜增生及粥样硬化导致的再狭窄严重影响了远期疗效.已有资料[1,2]证明,平滑肌细胞(SMC)过度增殖与移行是导致内膜增生的主要因素.而血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对血管SMC增殖有抑制作用[3].我们通过建立大鼠自体静脉移植模型,应用卡托普利(captopril)观察其对内膜增殖的影响,现报告如下.
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动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄机理研究现状
动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄是亟待解决的问题.移植桥静脉的再狭窄是一个受到多种机制调控、多因素影响的连续变化的病理过程,发生机理非常复杂.血流动力学的改变和移植静脉管壁损伤是导致再狭窄的始动因素.移植静脉过度扩张导致管壁损伤,引起多种细胞因子和生长因子分泌,促进血管平滑肌细胞增生并向内膜迁移,进而细胞外基质沉积、血管壁重构和再塑,终导致移植静脉再狭窄.
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卡托普利对自体移植静脉内膜增殖的影响
目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利对自体移植静脉内膜增殖的影响.试图为临床静脉移植修复血管损伤提供理论依据和新的治疗方法.方法:将大鼠自体颈静脉外侧分支通过显微外科技术移植于股动脉,术前1周开始给口服药卡托普利100 mg/(kg@d)至术后1周和2周.应用组织形态学、透射电镜及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学方法,通过计算机图像定量分析,观察其对自体移植静脉内膜平滑肌细胞增殖的影响.结果:卡托普利治疗组和空白对照组移植静脉内膜增厚程度术后1周无显著差异,术后2周治疗组卡托普利对移植静脉内膜增殖有明显抑制作用,两组差异显著;PCNA阳性细胞指数术后1周、2周均有显著差异.结论:卡托普利对移植静脉内膜增殖有明显抑制作用,我们认为可以在临床显微外科血管移植术中早期应用,以提高血管移植的成功率.
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自体移植静脉模型中环氧化酶2表达及其与移植静脉狭窄的关系
背景:环氧化酶2是与炎症反应密切相关的酶,其表达程度可能与移植静脉的狭窄相关.目的:观察环氧化酶2在移植静脉中的表达情况,分析环氧化酶2的表达与移植静脉血管狭窄的相关性.方法:实验分为2组,实验组在建立兔自体颈外静脉-颈总动脉移植模型后应用环氧化酶2抑制剂干预,对照组建模后正常喂养,于静脉移植后2,8,12周观察移植静脉血管壁增生情况及血管中环氧化酶2表达的差异.结果与结论:术后各移植静脉均保持通畅.正常静脉无明显环氧化酶2表达,移植静脉环氧化酶2表达明显增高.实验组移植静脉中环氧化酶2 mRNA表达较对照组低,移植静脉内膜及中膜增厚程度也低于对照组.结果表明,环氧化酶2在移植静脉中出现明显的表达增高,抑制移植静脉中环氧化酶2的表达可以减缓移植静脉血管壁的增生.
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纳米粒子介导Egr-1DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生
背景 应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题.目的 观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA 酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响.方法 构建Egr-1 DNA 酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA 酶,制备纳米级粒子混合物.建立自体静脉移植模型210 只,随机分成3 组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA 酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理.结果与结论 转基因组内膜中Egr-1 基因的mRNA 及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P < 0.05);在术后7,14,28 d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少(P < 0.01);转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高(P < 0.05).结果 表明Egr-1 DNA 酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡.
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纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄
背景:前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率.目的:验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用.方法:建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组.后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒.结果与结论:移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少(P < 0.01),纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05).纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05),纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组(P < 0.05).提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用.
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移植静脉中基质金属蛋白酶-9的表达对内膜增生的作用
目的: 探讨移植静脉中基质金属蛋白酶-9的变化对内膜增生的作用.方法: 建立大鼠颈静脉-腹主动脉自体静脉移植模型,分别在术后3,7,14 d进行取材.采用免疫组织化学方法及明胶酶谱方法观察基质金属蛋白酶-9的表达,计算机图像分析仪观测内膜厚度的变化.结果: 静脉移植后基质金属蛋白酶-9活性增高,伴有内膜显著增生,二者呈现平行关系.施加基质金属蛋白酶-9抑制剂强力霉素后,内膜受到明显抑制,呈现量效关系.结论:基质金属蛋白酶-9是内膜增生的重要因素之一.强力霉素可以抑制内膜增生.
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自体移植静脉中早期生长反应基因1的表达及意义
目的:研究自体静脉移植后早期生长反应基因1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用.方法:Wistar大鼠80只,建立自体静脉移植模型.应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mtRNA的表达,应用Western蛋白印迹和免疫组化方法检测Egr-1蛋白表达情况,同时进行组织形态学研究.结果:自体静脉移植后,Egr-1mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化.移植1 h,Egr-1 mRNA阳性率为(35±7)%,6 h和24h时下降,7 d时重新升高,4周达高峰(45±6)%.移植早期2 h即有Egr-1蛋白的表达,阳性率为(30±5)%,并持续至6h,24 h～3 d表达下降,移植4周Egr-1蛋白的阳性表达率达到高峰(40±9)%.结论:Egr-1的激活及表达与自体移植静脉内膜增生关系密切,Egr-1可能成为防治移植静脉内膜增生及狭窄、闭塞的一个新的干预靶点.
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腺病毒载体携外源基因转染人培养静脉的实验研究
目的: 探讨经腺病毒载体介导的标记基因转染人培养大隐静脉后,标记基因表达的效率、转染靶细胞表达时相.方法: 从临床手术患者取得大隐静脉后,浸于含AdCMV/LacZ或AdCMV的病毒液中(5×109 pfu),孵育1 h,将静脉剪成静脉片,分别培养2,7,14 d.对转基因静脉片进行组织学检查.结果:腺病毒载体可有效地将标记基因(LacZ基因)转入培养大隐静脉.转染后2d内皮细胞和外膜细胞即有表达,β-半乳糖苷酶组织化学染色可见胞核蓝染阳性细胞,7 d时表达高,持续表达到第14 d.对照大隐静脉无β-半乳糖苷酶表达.结论:腺病毒载体能高效转染人大隐静脉,其靶细胞以内皮细胞为主,外源性基因的表达至少维持2周左右.
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移植静脉外膜增生与兔血管再狭窄的相关性
目的 探讨冠状动脉旁路移植术后移植静脉外膜增生与血管再狭窄的相关性.方法 构建20例兔颈动脉旁路移植模型,术后当日行血管彩色多普勒检查,检测移植静脉的通畅性.术后30 d,取出移植静脉,组织病理标本切片、HE染色,测量外膜面积和管腔面积.用统计软件分析外膜面积与管腔面积的相关性.结果 术后当日,血管多普勒证明,所有20例模型移植静脉全部通畅.统计软件分析结果显示,移植静脉外膜面积与管腔面积成直线关系.结论 移植静脉外膜增生与血管管腔再狭窄有相关性.移植静脉外膜增生越重,管腔越狭窄.
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重组质粒Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3对移植静脉新生内膜的增生抑制作用
目的:观察重组质粒Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3对移植静脉内膜增生的影响,为预防冠状动脉旁路移植术后移植血管再狭窄提供新的方法.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为空质粒组和重组质粒组.每组20只.脂质体Lipofectamine 2000与该空质粒或者重组质粒混合15 min再与生物蛋白胶混合后,转染大鼠移植静脉(右颈外静脉中段),在3、7、14和28 d时,经左心室灌注4%甲醛并提取移植静脉,采用免疫组织化学方法(增殖细胞核抗原PCNA)检测移植静脉内膜血管平滑肌细胞(VSMCs)的增生及表达,以增殖指数表示.采用HE法检测移植静脉新生内膜增生病理形态学变化,在40倍镜下测量其内膜厚度.结果:免疫组织化学检测,术后7和14 d空质粒组移植血管管壁内膜层可见许多PCNA阳性细胞,重组质粒组PCNA阳性细胞数明显少于空质粒组.7 d时重组质粒组增殖指数(23.3±2.8)低于空质粒组(31.3±4.7)(P<0.05);14 d时重组质粒组增殖指数(15.6±0.4)低于空质粒组(27.2±5.7)(P<0.05).7 d时重组质粒转染组内膜厚度[(0.50±0.02)μm]明显低于空质粒组[(0.90±0.02)μm](P<0.05).结论:重组质粒Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3 对冠状动脉旁路移植术后移植静脉内膜增生有明显的抑制作用.
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多聚环氧化合物预处理异体移植静脉顺应性实验研究
目的 研究多聚环氧化合物(polyepoxy compound,PC)预处理的人离体大隐静脉的顺应性.方法 PC与戊二醛(Glutaradehyde,GA)分别对人的离体大隐静脉预处理,并记录三种静脉随内压变化的投影几何参数(面积、周长、长轴和短轴),通过对三种静脉的投影几何参数在不同内压下的变化进行研究,比较两种方法处理的血管顺应性的差异,新鲜静脉(Fresh)作为对照.结果 三种静脉在相同内压变化时的投影几何参数变化,各组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PC不影响血管的顺应性.
