首页 > 文献资料
-
硝普钠在心肺移植中对肺的保护作用
心肺移植是治疗终末期心肺联合病变的一种有效方法.其中移植肺更易受损,因而移植肺保护的好坏是心肺移植成败的重要因素之一.我们通过改良后的Kaneko兔异位心肺移植模型[1]观察一氧化氮(NO)供体硝普钠对供体肺的保护作用.
-
大鼠动脉移植慢性排斥反应模型的建立
大鼠大动脉移植模型所产生的血管壁改变与人类心脏移植出现的慢性排斥反应(chronic rejection,CR)的病理变化极其相似[1].但此模型操作复杂、并发症多,限制了其广泛应用.我们采用套管技术(cuff technique)[2]建立此模型,操作简单,成功率高.
-
荧光素酶标记A20鼠B细胞淋巴瘤移植模型的建立
目的:建立荧光素酶标记A20鼠B细胞淋巴瘤移植模型,为后期异基因造血干细胞移植中移植物抗肿瘤作用的研究提供实验工具.方法:将萤火虫荧光素酶作为标记基因导入A20鼠B细胞淋巴瘤细胞株,建立稳定表达荧光素酶的A20细胞株;将其与C57BL/6小鼠骨髓经尾静脉共同接种于辐射后的BALB/c小鼠体内,建立移植肿瘤模型;用活体荧光成像系统检测肿瘤的发生发展,并观察小鼠的活存,体重变化以及成瘤部位;取肿瘤组织和动物脏器行石蜡包埋、病理切片、HE染色观察其组织学特点.结果:经慢病毒转染和嘌呤霉素筛选获得了稳定表达荧光素酶基因的A20细胞株.活体荧光成像观察发现,在A20细胞接种第8天,即可观察到肿瘤发光,随着观察天数的增加荧光强度增强.相比较于骨髓移植(BMT)组,BMT+ A20-Luc+组小鼠存活率下降,体重降低明显.大体解剖显示,成瘤部位主要波及肝脏和脾脏,成瘤组织特征类似人弥漫大B细胞淋巴瘤.结论:成功构建了荧光素酶标记A20鼠B细胞淋巴瘤移植模型,为探讨异基因造血干细胞移植中移植物抗肿瘤作用提供了研究平台.
-
未成熟树突状细胞诱导受鼠形成异基因嵌合体与移植物存活的关系
建立异基因嵌合体可诱导形成针对供体的特异性免疫耐受,可能是克服器官移植排斥的有效途径.我们曾报道利用未成熟树突状细胞(DC)可成功诱导受体动物建立异基因嵌合体,维持时间超过100 d.但嵌合体与移植物存活的关系,目前尚无一致结论.我们通过2个移植模型观察了异基因嵌合体与移植物存活的关系.
-
抗排斥反应中睾丸Sertoli细胞与免疫抑制剂的协同作用
将表达FasL的睾丸Sertoli细胞与肾细胞共同移植,联合应用环孢素(CsA)观察抗排斥效果,以探讨一条同种异体肾移植中移植体保护的新途径。 供受体为不同种系Wistar雄性大白鼠。用酶消化法制备供体睾丸Sertoli细胞及肾细胞。采用流式细胞仪检测FasL及Fas。按以下法建立同种异体移植模型:A组10只,仅移植肾细胞;B组16只,移植2种细胞(B左),任取其中6只大鼠(B右),右侧肾包膜下同时植入肾细胞,对比观察;C组10只,植入2种细胞,但Sertoli细胞注射前已用抗FasL抗体封闭。D组10只,植入2种细胞,并且使用CsA。术后20d免疫组化及计算机图象分析观察移植物中g-PG,TUNEL法观察移植物中凋亡细胞。
-
异种胰岛移植联合应副免疫抑制剂FK506和LEF的实验研究
目的:探讨亚治疗剂量免疫抑制剂他克莫司(FK506)和来氟米特(leflunomide,LEF)联和应用预防猪对鼠异种胰岛移植排斥反应的效果.方法:实验分对照组、FK506组、LEF组、FK506+LEF组,每组7只糖尿病大鼠,将分离纯化获得的新鲜成年猪胰岛(adult pigislets,APIs)立即植入四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肾被膜下(20 000IEQ/kg),通过血糖测定、病理组织学观察和免疫组化分析,研究胰岛有功能存活及排斥反应的情况.结果:移植术后四组胰岛有功能存活时间分别为(5.4±1.3d)、(13.7±2.5 d)、(17.3±2.5 d)、(31.7±4.2 d),FK506(2 mg/(kg/d))和LEF(10 mg/(kg/d))组胰岛移植物有功能存活时间较对照组明显延长(P<0.01).FK506+LEF组较单纯用药组效果更好(P<0.01).术后第5 d移植肾脏病理组织学和免疫组化检查显示FK506+LEF组有更多的大量结构完整APIs存活,少有CD4+、CD8+T细胞及ED1+、ED2+巨噬细胞浸润,内分泌组织完整.结论:在猪对鼠异种胰岛移植模型中,亚治疗剂量的FK506和LEF单独和联合应用均明显有效地抑制异种胰岛细胞移植的排斥反应,联合应用效果更佳,表现出良好的协同作用.
-
胰腺移植物ICAM-1的表达及信号转导的因素
目的:探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂对细胞间黏附因子-l(ICAM-1)在大鼠胰腺移植物的表达及转导信号的影响.方法:采用大鼠胰十二指肠移植模型,实验组给予NE抑制剂(ONO-5046,10 mg/kg).体外实验检测NE及多种相关试剂对大鼠内皮细胞ICAM-lmRNA表达的影响及基因转导信号的调控作用.结果:对照组胰腺移植物中ICAM-]mRNA呈高水平表达,而实验组经ONO-5046处理后明显下调其表达,有显著性差异.NE刺激大鼠内皮细胞上调ICAM-lmRNA表达水平,而ONO-5046则明显抑制其表达;特异性钙离子载体增强该细胞的ICAM-1mRNA表达,相反,磷脂酶C抑制剂、钙离子螯合剂及核因子κB抑制因子则下调NE诱导的ICAM-lmRNA表达水平.结论:NE增强ICAM-l在胰腺移植物的表达与细胞钙离子内流及磷脂酶C的信号转导有关.
-
CTLA4Ig局部转基因对小肠移植急性排斥的治疗作用
目的:研究CTLA4Ig基因在移植小肠局部表达及其表达产物对急性排斥反应的治疗作用.方法:建立SD→Wistar的大鼠异位小肠移植模型,并随机分为实验组(CTLA4Ig转基因组)和对照组(非转基因组).实验组供肠移植前经肠系膜上动脉注入脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA,术后应用免疫组织学检查移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达.移植术后3,7,10 d分别获取各组的移植小肠进行组织学检查及细胞凋亡测定.结果:经CTLA4Ig cDNA处理的小肠在移植术后可见大量的CTLA4Ig表达.对照组移植肠在术后7,10 d分别出现Ⅰ,Ⅱ度急性排斥反应,同时凋亡细胞数量显著增加.实验组移植肠术后未见排斥反应的病理学证据,凋亡细胞偶见.结论:CTLA4Ig基因可在移植小肠局部转染表达,其表达产物可防止移植术后急性排斥反应的发生.
-
1缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸对新生血管形成的抑制作用
目的:研究缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸对肿瘤血管形成的影响.方法:通过将腺病毒包装的反义HIF-1α(Ad-antiHIF-1α)和腺病毒包装的lacZ标志基因(Ad-lacZ)注射入人大肠癌鸡胚移植模型的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)中,观察他们对鸡胚移植瘤新生血管形成的影响.结果:注射Ad-antiHIF-1α组血管稀疏、纤细,一级血管数(16.8±1.6 vs 45.2±2.8,t=2.42,P=0.02<0.05)及二级血管数(34.8±3.6 vs 58.4±5.3,t=2.97,P=0.005<0.01)均明显少于注射Ad-lacZ组.结论:Ad-antiHIF-1α能有效抑制鸡胚移植瘤新生血管的形成.
-
三氧化二砷对鸡胚移植胆管癌生长的抑制作用
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鸡胚移植胆管癌生长的抑制作用及其机制.方法:建立胆管癌QBC939细胞株鸡胚移植模型,接种癌细胞后9d切取标本,比较As2O3作用组和对照组中瘤生长、血管生成情况,原位末端标记法检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组化检测核增生抗原(PCNA)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:AS2O3作用组肿瘤生长和血管生成受到抑制,细胞凋亡增多、PCNA和VEGF表达减弱.结论:As2O3有抗胆管癌的作用.其机制与诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增生、癌组织VEGF表达以及肿瘤血管生成有关.
-
热休克蛋白70与IL-2对小鼠肝癌移植模型的治疗比较
目的:比较分析肿瘤热休克蛋白70(HSP70)与IL-2对小鼠肝癌移植模型的治疗作用,评价HSP70的疗效,为应用HSP70治疗人类恶性肿瘤提供有重要参考价值的实验依据.方法:细胞培养、蛋白质纯化技术、电泳技术、Western-blot法、动物实验等.结果:IL-2及HSP70对小鼠肝癌移植模型均有治疗作用,其中IL-2 10万U、HSP70 10μg效果佳,IL-2 5万U及HSP70 5μg有部分治疗作用,10万U的IL-2与5μgHSP70治疗效果相当,HSP70 10μg治疗后有40%小鼠移植肿瘤全部消退,长期生存790 d,与对照组及其他各组相比,差异具有显著性(P<0.01,P<0.05).结论:HSP70具有良好的抗肿瘤免疫活性,其疗效明显优于IL-2,本研究对于应用HSP70治疗人类的恶性肿瘤有十分重要的借鉴意义.
-
携带mIL-12基因的增生型腺病毒对小鼠移植胃癌的治疗作用
目的:研究携带mIL-12基因的增生型腺病毒对小鼠移植胃癌的治疗效果及其作用机制,探讨胃癌治疗的新思路及途径.方法:以ElB55KDa缺失的增生型腺病毒ONYX-015、带有小鼠IL-12(mIL-12)基因的增生型腺病毒CNHK200-mIL-12以及非增生型腺病毒Ad-mIL-12治疗SGC-790lBALB/C裸鼠及MFC 615小鼠胃癌移植模型,从肿瘤大小及动物生存期等方面评价治疗效果;并检测各治疗组的CD4+和CD8+淋巴细胞水平及NK和CTL细胞的杀伤活性,探讨其免疫学作用机制.结果:实验证实增生型腺病毒(ONYX-015,CNHK200-mIL-12)可以有效地杀伤裸鼠体内的SGC-790l胃癌细胞,但是不足以使其完全消退,仅起到延缓生长的作用.荷瘤615小鼠在注射Ad-mIL-12后部分(3/10)肿瘤消退,余者(7/10)生长明显减慢,肿瘤无破溃,生存期明显延长;CNHK200-mIL-12治疗组部分肿瘤(4/10)停止生长,1wk后开始缩小,10-14 d完全消退,其余小鼠肿瘤(6/10)生长明显减慢,肿瘤无破溃,生存期明显延长.免疫学检测发现各腺病毒治疗组的CD4+和CD8+细胞水平以及NK、CTL细胞的杀伤活性均高于对照组,尤以携带IL-12基因者明显(P<0.001).结论:以增生型腺病毒为载体携带IL-12基因可大量杀伤肿瘤细胞并与增生型腺病毒协同发挥抗肿瘤活性.
-
同种大鼠颈部脾脏异位移植模型的建立
目前,虽然我国临床脾脏移植在国际相关领域处于领先地位,但是在实验动物模型方面却缺乏同种大鼠带血管异位脾移植模型建立成功的报道.这里我们借鉴Bitter-Suermann[1]和Li等[2]建立的同种大鼠异位脾脏移植模型的经验,建立了同种大鼠颈部脾脏异位移植模型.此模型操作简单、创伤小、观察取材方便、可以再次手术、便于推广和应用,现报道如下.
-
L-精氨酸对大鼠移植胰腺再灌注损伤的保护作用
我们应用同系大鼠异位全胰十二指肠移植模型,外源性应用L-精氨酸(L-Arg),研究是否可以增加胰腺组织NO含量,是否可以通过抑制中性粒细胞活化而减轻胰腺再灌注损伤,现将结果报告如下.
-
磁压榨吻合技术在大鼠肝移植模型建立中的应用
目的 采用磁压榨吻合(MCA)技术代替传统缝合法,建立一种无缝线快速吻合肝移植模型,为临床肝移植相关问题研究搭建一个良好的技术平台.方法 SPF级健康雄性SD成年大鼠300只,体重为250~280 g,供、受体各150只.以"双袖套"法为基础,采用MCA行大鼠肝上下腔静脉(SHVC)重建建立大鼠原位肝移植模型.练习分3个阶段,分为前期40对,中期40对,后期70对.观察并记录各阶段大鼠肝移植术手术时间及术后1、5 d存活率;分析手术失败的原因并改良手术技巧.结果 供体手术时间从前期(45.0±5.0)min减少至后期(22.0±3.0)min,无肝期从(28.5±5.0)min减少至(11.8±3.1)min,受体手术时间从(76.1±7.0)min减少至(47.7±2.9)min.前期、中期、后期的术后1、5 d存活率分别为25%(10/40)、80%(32/40)、97%(68/70)和5%(2/40)、45%(18/40)、83%(58/70).前期大鼠肝移植手术失败主要是由于无肝期长、门静脉(PV)-肝下下腔静脉(IHVC)吻合失败、术中出血多,受体多数未完成手术或术后2~4 h死亡.中、后期大鼠肝移植手术失败主要是由于PV-IHVC吻合失败.结论 采用改良的MCA可快速吻合SHVC,提高移植成功率,为初学者减少练习难度与周期,建立了一种理想的肝移植模型.
-
异基因大鼠胰-脾-十二指肠联合移植模型的制作
为研究供体脾脏对胰腺移植的影响,我们制作异基因大鼠胰-脾-十二指肠联合移植模型,改进了部分手术技术,取得了良好效果,现报告如下.
-
小肠移植关键技术的发展
小肠移植是肠衰竭患者为理想的治疗方式.自1988年德国Deltz成功进行首例人体小肠移植以来,经过20年的发展,小肠移植的关键技术有了突破性的发展.小肠移植的患者和移植物的存活率大大提高,国际上已将小肠移植作为肠衰竭患者的常规治疗方式,而国内小肠移植仍处于临床起步阶段.我们在20世纪90年代初成功建立大动物小肠移植模型的基础上,1994年完成亚太地区第1例小肠移植,在小肠移植起步阶段的环孢霉素A时代取得了存活近1年的疗效,成为当年国家十大医药新闻之一[1],2003年我们又完成国内首例肝小肠联合移
-
内皮型一氧化氮合酶基因转染防治移植静脉再狭窄的实验研究
移植静脉再狭窄是影响冠状动脉旁路移植 (CABG)术后远期疗效的主要因素.许多研究表明,CABG术后血管桥再狭窄的发生与一氧化氮(NO)的功能异常相关[1-4],2004年7月至9月本研究采用兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,应用含人内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS) 基因重组腺病毒(AdCMVeNOS)转染移植静脉的方法,探讨eNOS基因防治静脉移植血管再狭窄的作用及其机制,为移植静脉再狭窄的防治提供实验和理论依据.
-
羟乙基淀粉对兔心肺联合保存的作用
应用Kaneko兔异位心肺移植模型[1],在晶体心肺保存液中添加5%羟乙基淀粉(HES)以研究胶体物质HES对兔心肺联合保存的作用及机制.现报告如下:
-
同种异体角膜缘移植术后免疫排斥反应的实验研究
目前导致异体角膜缘移植失败的主要原因是术后免疫排斥反应造成的干细胞永久性破坏.本研究通过建立大鼠同种异体角膜缘移植模型,分析了同种异体角膜缘移植术后免疫排斥反应的特征性表现,并初步探讨了其免疫排斥反应的机制.