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静电法制备小微囊包裹成年猪胰岛的实验研究
目的探索用静电法制备小微囊包裹成年猪胰岛细胞.方法用自制的静电微囊发生装置、制备海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊(微囊直径<350μm),包裹成年猪胰岛,体外检测APA小微囊猪胰岛生物活性及微囊膜的通透性.结果静电法制备的APA微囊直径300~350μm,大小相对均一.小微囊包裹成年猪胰岛后,每个微囊内可见1~2个胰岛团,表面光滑.囊内胰岛组织学结构完整,体外培养微囊化胰岛素分泌良好,葡萄糖刺激释放明显,显示了良好的细胞活力及微囊膜通透性.结论用我们自制的静电微囊发生装置能制备APA微囊包裹成年猪胰岛细胞,微囊直径300~350μm,表面光滑,囊内猪胰岛生物活性良好.
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异种胰岛移植联合应副免疫抑制剂FK506和LEF的实验研究
目的:探讨亚治疗剂量免疫抑制剂他克莫司(FK506)和来氟米特(leflunomide,LEF)联和应用预防猪对鼠异种胰岛移植排斥反应的效果.方法:实验分对照组、FK506组、LEF组、FK506+LEF组,每组7只糖尿病大鼠,将分离纯化获得的新鲜成年猪胰岛(adult pigislets,APIs)立即植入四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肾被膜下(20 000IEQ/kg),通过血糖测定、病理组织学观察和免疫组化分析,研究胰岛有功能存活及排斥反应的情况.结果:移植术后四组胰岛有功能存活时间分别为(5.4±1.3d)、(13.7±2.5 d)、(17.3±2.5 d)、(31.7±4.2 d),FK506(2 mg/(kg/d))和LEF(10 mg/(kg/d))组胰岛移植物有功能存活时间较对照组明显延长(P<0.01).FK506+LEF组较单纯用药组效果更好(P<0.01).术后第5 d移植肾脏病理组织学和免疫组化检查显示FK506+LEF组有更多的大量结构完整APIs存活,少有CD4+、CD8+T细胞及ED1+、ED2+巨噬细胞浸润,内分泌组织完整.结论:在猪对鼠异种胰岛移植模型中,亚治疗剂量的FK506和LEF单独和联合应用均明显有效地抑制异种胰岛细胞移植的排斥反应,联合应用效果更佳,表现出良好的协同作用.
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成年猪胰岛分离纯化方法的改良
目的:改良成年猪胰岛分离纯化技术,以优化胰岛制备方法.方法:采用体、尾部区段猪胰腺胰管内灌注复合胶原酶震荡消化(胶原酶V+DNA酶)和改进的Dextran不连续密度梯度离心法分离纯化猪胰岛,并进行生物学活性测定和形态学观察.结果:胰腺被消化组织平均15±3.4 g,消化后胰岛获得量4 130±976 IE/g胰腺组织.纯化后胰岛获得量为2 320±669 IE/g胰腺组织,胰岛纯度80%左右.胰岛素释放试验结果显示分离纯化后胰岛功能良好.病理切片,HE染色显示细胞团结构完整,细胞核清晰可见,胞质丰富.结论:经本方法分离纯化获得的猪胰岛具有较高的产量和纯度、结构完整、功能良好,可满足大动物移植实验和临床移植的需要.