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鼠神经生长因子生物学活性测定方法的研究
目的 建立一个简单、稳定、重复性好的鸡胚背根神经节培养法测定mNGF活性的实验方法.方法 通过对鸡胚运输温度控制、神经节分离和接种时间限制、培养结果观察时间摸索、活性测定的浓度范围、重复性等试验,建立了鼠神经生长因子生物学活性的测定方法.结果 该方法具有操作简便,灵敏度高、重复性好、测试结果准确的特点.结论 采用鸡胚背根神经节培养法可有效测定鼠神经生长因子的生物学活性.
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成年猪胰岛分离纯化方法的改良
目的:改良成年猪胰岛分离纯化技术,以优化胰岛制备方法.方法:采用体、尾部区段猪胰腺胰管内灌注复合胶原酶震荡消化(胶原酶V+DNA酶)和改进的Dextran不连续密度梯度离心法分离纯化猪胰岛,并进行生物学活性测定和形态学观察.结果:胰腺被消化组织平均15±3.4 g,消化后胰岛获得量4 130±976 IE/g胰腺组织.纯化后胰岛获得量为2 320±669 IE/g胰腺组织,胰岛纯度80%左右.胰岛素释放试验结果显示分离纯化后胰岛功能良好.病理切片,HE染色显示细胞团结构完整,细胞核清晰可见,胞质丰富.结论:经本方法分离纯化获得的猪胰岛具有较高的产量和纯度、结构完整、功能良好,可满足大动物移植实验和临床移植的需要.
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斑马鱼高血脂模型在山青之片质量控制中的应用研究
目的:探讨斑马鱼高血脂模型在山青之片质量控制中的应用.方法:用高脂肪饮食诱导的斑马鱼高血脂模型对山青之片进行生物活性评价和质量稳定性检测.结果:斑马鱼高血脂模型作为降血脂药物生物学质量内控检测方法具有较好的可重复性(RSD为3.5%)及稳定性(RSD为3.6%);不同批号山青之片具有较好的质量稳定性,其血脂降低率平均值为60.8%(P<0.001),RSD为1.9%;同批次山青之片供试品溶液室温放置8 h以内质量稳定,血脂降低率平均值为60.5%(P<0.001),RSD为3.1%.结论:用斑马鱼高血脂模型评价中药山青之片的降血脂效果,方法快速、稳定可靠;应用斑马鱼模型建立中药的生物学质量标准有助于推动中药的现代化,值得尝试和推广.
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重组人表皮生长因子生物活性检测方法的建立及与其他显色方法的比较
目的 建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较.方法 参考《中国药典》三部(2015版)附录3528中3T3细胞/MTT显色法,建立rhEGF生物学活性的检测方法,去除细胞饥饿的步骤,并用10％ SDS代替DMSO,同时对培养3T3细胞的PRIM 1640培养液的胎牛血清浓度(0、2％、5％、10％)进行优化.采用优化方法及药典方法同时检测rhEGF标准品,对灵敏度、信噪比、线性及孔间变异度进行比较.分别采用优化方法、MTS显色法、CCK-8显色法、结晶紫显色法、CellTiter-Glo显色法检测同批rhEGF供试品,比较各方法的检测结果.结果 优化方法的灵敏度(半数有效浓度为2.84 IU/mL)、信噪比(1.40)、线性(R2＞0.99)和孔间变异度(95％可信区间为1.576％ ～3.334％)均优于药典方法,且实验周期由6d缩短为5d.5种显色方法对rhEGF供试品的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05),CCK-8显色法检测结果的变异系数(CV)小(16.8％),结晶紫显色法的CV值大(23.3％).结论 优化方法更适用于rhEGF制品的常规生物学活性检测,且与其他4种显色方法等效.
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骨肉瘤细胞条件培养基中骨形态蛋白的研究
骨形态蛋白(BMP)属于转化生长因子-α(TGF-α)超家族成员,由Urist于1986年应用于临床[1].我们从骨肉瘤细胞(MG-63)条件培养基中提取BMP,探索一种新的提取途径,并对提取出的BMP作了鉴定和生物学活性测定.
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肝水解肽生物学活性测定方法的应用
目的:评价近年上市的肝水解肽生物学活性质量及其活性测定方法的应用.方法:应用正常人肝L02细胞/WST-8比色法测定不同厂家的肝水解肽生物学活性,比较各个厂家产品质量以及评价该生物学活性测定法的应用情况.结果:共测定了10个厂家43批肝水解肽生物学活性,其中35批产品具有促进肝细胞生长的生物学活性,4个厂家的8批产品无促进肝细胞生长的生物学活性.不合格产品中有1个厂家的2批产品已过效期,3个厂家的6批产品均在效期内.结论:该法可用于肝水解肽生物学活性的测定,是否在有效期内对样品的活性无明显影响.
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新型人干扰素α 1c的纯化和活性测定
目的在大肠杆菌中表达和纯化一种新型的人 IFNα 1c。方法首先建立了表达和纯化 IFNα 1c的实验室生产流程。根据干扰素的抗病毒、抗细胞增殖以及免疫调节特性，体外测定这种 IFN的生物学活性。结果 ELISA和 Western免疫印迹均证实，表达产物具有干扰素的免疫反应性。 VSV-WISH系统的抗病毒测活表明，表达的 IFNα 1c (3.2× 107) 的抗病毒活性较 IFNα 1b(1.0× 107～ 1.8× 107)略高 ;而抗 A549细胞的增殖能力则与后者相当。此外 IFNα 1c还能增强 NK细胞的杀伤活性。结论本系统成功地在大肠杆菌中表达了人 IFNα 1c。这种高比活性的干扰素可能成为临床治疗的侯选者。
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肝水解肽体外活性测定方法的探讨研究
目的:建立肝水解肽体外生物学活性测定方法.方法:将不同浓度肝水解肽作用于正常人肝L02细胞,WST -8比色法测定L02细胞增殖情况.同时对实验条件,包括稀释液、细胞接种密度、药物作用时间等进行探讨,建立肝水解肽体外活性测定方法,并用该方法对2个厂家生产的2批产品进行活性检测.结果:获得了比较稳定可靠的实验参数:稀释液为RPMI -1640培养液,细胞接种密度为4.0×104个·mL-1,药物作用时间为48～72 h,肝水解肽浓度为0.5,0.25,0.12,0.06,0.03,0.015 mg·mL-1.由这些实验参数建立了肝水解肽活性测定方法.用该方法检测的2批产品活性均合格,重复实验3次,每次实验结果均一致,RSD均低于10％.结论:该方法可用于肝水解肽体外生物学活性测定.
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报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性
目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性.方法:将胰高血糖素样肽-l受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞,经加压筛选和单克隆分离培养获得稳定的单克隆细胞株;使用药物反应强的单克隆细胞株建立报告基因方法;对新建方法进行条件优化,并用优化的方法对促胰岛素分泌肽融合蛋白原液和成品进行生物学活性测定.结果:经加压筛选和单克隆分离培养后获得对Byetalog强反应性的细胞株CHOglpar/crec 14;新建方法剂量反应曲线符合四参数方程,R2砰大于0.99;对促胰岛素分泌肽融合蛋白的原液和成品分别测定3次,RSD值均低于5.0％,回收率在70％～130％之间.结论:报告基因法操作简便,重复性和准确性都较高,有望作为替代方法应用于促胰岛素分泌肽融合蛋白的生物学活性测定.
