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耐碳青霉烯类肠杆菌细菌的耐药基因研究
目的：分析耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药情况及其耐药基因，为临床防治CRE感染提供依据。方法：收集肠杆菌科细菌6321株，采用PCR检测技术检测KPC、IMP、VIM，并测序分析基因型别。结果：经检测，6321株肠杆菌科细菌中含有耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌33株，检出率0.52%，在尿液、血液、痰液、胆汁、脓液中均有分布，其中痰液分布多，为12株。耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌是多药耐药菌，对不同药物具有不同程度耐药率，其对氨苄西林、头孢唑啉、舒巴坦耐药率较高，分别为100.00%、90.91%、78.79%。结论：KPC和IMP为产碳青霉烯酶主要基因型，临床加强对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的监测具有重要意义。
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宁夏地区某医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及耐药基因的分析
目的 探讨医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点、耐药情况及耐药机制,以便指导临床医生合理使用抗菌药物.方法 采用WHONET5.6软件统计医院2014年1月-2016年12月所有检出的CRE菌株,MIC法检测药敏结果,改良Hodge试验和EDTA协同试验检测是否产碳青霉烯酶;用PCR技术检测碳青霉烯酶的耐药基因并进行测序.结果 共分离CRE 70株,以阴沟肠杆菌28株和肺炎克雷伯菌23株为主;主要分布在肝胆外科;对青霉素类及头孢类抗菌药物的耐药率均＞90％;改良Hodge试验和EDTA协同试验阳性率分别为77.1％和87.1％;NDM-1耐药基因阳性率高,为75.7％,其余耐药基因KPC-2、IMP-4阳性率分别为17.1％与11.4％,其中3株同时携带两种耐药基因,未检出GES-4、VIM-2、OXA-48耐药基因.结论 碳青霉烯酶耐药基因以NDM-1为主,医院需加强细菌的耐药监测,合理使用抗菌药物,防止感染的暴发性流行.
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三甲医院近三年CRE感染特征分布及发生率变迁所带来的思考
目的：通过对医院近三年临床标本检出耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）患者进行实时监控分析，对临床经验性治疗及感染控制给予帮助。方法2013年1月1日－2015年12月31日通过院感实时监控系统进行前瞻性全面综合性监测，判定医院感染、院外感染或定植，研究标本及菌种来源、发现率变化、感染部位分布特征等。结果2013－2015年共检出CRE分离菌株111株，其中35株为医院感染菌株、59株为院外感染菌株、17株为定植菌，呼吸道标本占50．45％、血液标本占6．31％、其他无菌体液标本占13．51％；主要菌种来源：肺炎克雷伯菌占59．46％，大肠埃希菌占25．23％；2013－2015年院内CRE发现率波动在0．108‰～0．224‰，院内、院外及定植 CRE 发现率波动在0．346‰～0．734‰；院内及院外 CRE 感染部位分布主要为下呼吸道感染，占46．81％，发生7例呼吸机相关性肺炎医院感染，腹（盆）腔组织及腹水感染占12．77％，其中9例为院外感染。结论2013－2015年CRE发现率呈上升趋势，感染以下呼吸道为主，防止CRE的产生需对患者高危因素进行评估，进一步降低感染风险，同时合理使用抗菌药物。
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2014年某教学医院碳氢酶烯类耐药肠杆菌科细菌流行性分析
目的 监测郑州大学第一附属医院2014年碳氢酶烯类耐药肠杆菌科细菌(Carbapenem Resistant Enterobacteriaceae,CRE)流行性及对常用抗菌药物的耐药情况.方法 采用法国梅里埃公司的VITEK 2 Compact仪器进行细菌鉴定及药敏检测,用WHONET5.6统计软件进行数据分析.结果 2014年郑州大学第一附属医院CRE的平均检出率11.4％,克雷伯菌属和阴沟肠杆菌中碳氢酶烯类耐药菌株分离率高,分别为21.3％和19.2％,标本来源主要为痰液、尿液和血液,分别占39.3％,18.7％和14.9％,分布科室主要为重症监护室(ICU)、泌尿外科和新生儿科,分别占30.0％,10.1％和8.4％.CRE耐药现象严重,克雷伯菌属和阴沟肠杆菌对替加环素的耐药率分别为3.0％和7.7％.结论 本次研究结果显示CRE平均检出率为11.4％,高于全国平均水平,应引起临床重视,联合用药是治疗CRE的佳选择.为遏制耐药性的增长,临床医生应结合药敏结果合理使用抗菌药物,并加强感染控制措施,防止CRE的传播.
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2011～2016年耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的分布特点和耐药性分析
目的 了解我院2011～2016年耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌(CRE)分布特点和耐药性.方法 采用纸片扩散法(K-B法)检测其耐药性,WHONET5.6软件统计数据.结果 2011～2016年共检出657株CRE菌,检出率6.8％(657/9667);CRE菌株的菌属呈多样化,其中阴沟肠杆菌(39.7％)、肺炎克雷伯菌(18.1％)、大肠埃希菌(17.8％)三种细菌的CRE检出率高.CRE细菌分布在不同临床标本中,以痰液、呼吸道标本为主(43.5％,286/657),其次为脓液、伤口分泌物(21.8％,143/657),第三为尿液(14.0％,92/657),三者占总数的83.5％.CRE细菌分布在各个临床科室中且随着年龄的增大,CRE菌株的检出率也随之增加.CRE菌对各种抗菌药物的耐药率普遍较高,甚至对亚胺培南、美罗培南均出现了不同程度的耐药性,耐药率分别为18.4％、14.9％.结论 CRE菌常对多种临床常用的抗菌药物呈现耐药,且CRE的细菌种类不同,耐药表型及耐药性也不同.临床医生应该根据细菌耐药谱选择用药所以在临床治疗.
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54例SARS患者LDH、ALT、CRE和尿液变化及其临床意义
目的探讨传染性非典型肺炎(SARS)的部分实验室检查指标及其临床意义.方法观察54例SARS病例肝、肾功能生化指标,心肌酶谱以及尿蛋白/潜血试验,分析其特征,并和同期37例普通肺炎(CP)患者的相应指标相比较.结果 SARS组多项指标与CP对照组相比较有显著性差别.54例SARS患者中,36例(66.7%)ALT升高,29例(53.7%)出现LDH升高,12例(22.2%)尿蛋白/潜血试验阳性.2组CRE均无明显升高,差别无显著性(P＞0.05).CP组有一定比例的LDH升高(27.0%),但与SARS组相比差别有显著性(P＜0.05).结论 SARS患者的部分实验室检查显示,超过半数病例的ALT、LDH出现明显的升高,相当一部分患者出现尿蛋白/潜血试验阳性,提示该病对肝、心及肾等多器官功能有损害.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建
背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法.目的:利用Cre/Loxp 高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体.方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre 重组酶的c66-SV40-cre 质粒转染Vero 细胞,构建一株带有Loxp 位点的重组HSV-1 框架载体HSVLoxp.构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES 及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT 培养基筛选出阳性毒株后用GDNF 引物做PCR 鉴定,扩增培养后测定滴度.结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP 质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01.成功构建HSV-1 框架载体HSVLoxp 及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF 基因,并将其转移到了HSV-1 基因组上,成功构建了表达GDNF 的单纯疱疹病毒HSV-1 载体,测定其滴度约为2.25×106 IU/mL.
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浅议沙河市应征适龄青年ALT、BUN和Cr生物参考区间
目的:对应征适龄青年血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、 尿素(U)和肌酐(CRE)参考区间进行评估.方法:对371名适龄青年血清ALT、U和CRE进行测定,并与国防动员部和全国临床检验操作规程所提供的参考区间进行比较,探讨其实用价值.结果:ALT、U和CRE测定结果为偏态分布,适龄青年血清ALT、U和CRE参考区间分别为7～44 U/L、2.63～6.32mmol/L和47～97umol/L.结论:应该建立本地适龄青年血清ALT、U和CRE的参考区间,供征兵时参考.
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Cre重组酶眼部动物模型研究进展
运用Cre/LoxP位点特异性重组酶系统对特定组织和器官基因进行改造是遗传操作的有效手段,该系统可以将特定的DNA片段删除,研究特定基因在生长发育过程中的功能.研究Cre/LoxP系统的工作机制,比较眼内不同组织,如视网膜色素上皮(RPE)细胞、Müller细胞及感光细胞中特异性Cre工具鼠的作用特点,获得Cre转基因小鼠模型,从而建立合适的眼科实验动物模型,可为特定组织单基因缺失的功能研究提供实验基础.就Cre/LoxP系统、Cre转基因小鼠模型的获得和眼部特异性Cre重组酶模型小鼠的研究进展进行综述.
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核蛋白CREB的转录调控机制
CREB(cAMP反应元件结合蛋白)是一重要的核转录因子,为bZIP家族成员之一.它的蛋白单体从N端到C端主要包括激酶诱导域(KID)、碱性区(basic region)和亮氨酸拉链模体(leucine zipper motif).CREB受多种信号转导通路的调控,除了经典的cAMP调控通路外,还有如Ras-Raf-MAPK通路、Ca2+-CaMK通路、应激相关的P38通路等.活化的CREB需同辅激活因子CBP相结合,才能激活转录发生.CREB为管家基因的产物,功能广泛而复杂,可诱导癌细胞凋亡,对胚胎发育具有不可或缺的作用.
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不同血尿蛋白指标在老年高血压患者不同分级与不同病程中的水平变化及临床意义
目的:探讨了不同血尿蛋白指标在老年高血压患者不同分级与不同病程中的水平变化及临床意义.方法:回顾性分析我院2010年1月～2012年6月高血压患者92例的临床资料,记录并且对比患者的各项肾功能检测指标.结果:在Ⅰ级及A 组高血压患者中,尿β2-MG检测高于正常值的比率高(P<0.05),随着血压级别增加,病程延长,BUN、CRE、血尿β2-MG、mALB 指标Ⅲ级较Ⅱ、Ⅰ级组显著增高(P<0.05),Ⅱ级较Ⅰ级显著增高(P<0.05);C组较B组、A组显著增高(P<0.05),B组较A组显著增高(P<0.05).结论:血尿β2-MG,mALB是反映老年高血压患者肾功能损害的较早期指标,对肾功能损害的程度和部位的判断具有一定的价值.
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碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯及头孢菌素类抗生素耐药机制
目的 研究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)对碳青霉烯及头孢菌素类抗生素耐药机制,为临床治疗CRE感染及医院感染的控制提供分子流行病学依据.方法 收集2014-2015年临床送检各类标本分离的细菌,使用Microscan Walkaway 40 plus进行细菌鉴定和药敏试验,对分离的CRE进行常见碳青霉烯酶的编码基因(blaNDM-1及blaKPC-2)和超广谱β-内酰胺酶编码基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-1-like、blaCTX-M-2-like、blaCTX-M-8-like及blaCTX-M-9-like)的检测,同时检测细菌多重耐药相关的I类整合子编码基因blainT-1.结果 2014-2015年共分离7株CRE,检出率为0.30%,1~6号菌株为肺炎克雷伯菌,7号菌株为弗劳地柠檬酸杆菌,7株菌株对β-内酰胺酶抑制剂复合制剂、头孢菌素类、头霉素类、碳青霉烯类抗生素均耐药,3株菌对阿米卡星及四环素敏感,2株菌对复方磺胺甲口恶唑敏感.3株菌检出blaNDM-1,2株检出blaKPC-2,5株检出blaTEM,7株均可检出blaSHV,1株检出blaCTX-M-1-like,4株检出blaCTX-M-9-like,5株检出blainT-1,未检出基因blaCTX-M-2-like及blaCTX-M-8-like.结论 blaNDM-1及blaKPC-2是导致7株CRE对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制,blaTEM、blaSHV及blaCTX-M-9-like是导致对头孢菌素类抗生素耐药的主要原因,blainT-1在CRE多重耐药及耐药基因传播中发挥着巨大的作用.
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酶法与Jaffe法测定血清肌酐结果偏倚的估计
目的 探讨酶法和Jaffe法测定血清肌酐结果的偏倚.方法根据美国临床实验标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件,每天取新鲜血清标本10份,分别用酶法和Jaffe法测定血清CRE的含量,共测定5天,经统计学处理,推导线性回归方程及决定系数,进行偏倚估计.结果 两种方法测定的回归线性方程为:Y=1.014X+43.017,r2=0.992;结果的预期相对偏倚是CRE=20μmol/L时为216.5%,CRE=100 μmol/L时为44.4%,CRE=500 μmol/L时为10.0%.结论 用酶法和Jaffe法测定血清CRE时测定结果在低浓度时偏倚较大,随浓度的增加,偏倚也减少,两法间有较好的相关性.
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应用可调控Notch1干扰载体诱导HeLa细胞增殖抑制
背景与目的:Notch信号转导途径与细胞增殖与分化的调控密切相关,它的功能失调在肿瘤细胞的增殖分化中发挥着重要的作用.本研究构建了针对Notch1的可调控RNA干扰载体,并从分子水平及细胞水平上研究其对HeLa细胞的影响.方法:利用受CRE重组调控的RNA干扰载体pSico和pSicoR构建针对GAPDH和Notch1的shRNA表达载体,以pBS185-CRE作为CRE蛋白的表达载体,将HeLa细胞分为pSico、pSico/CRE、pSicoR和pSicoR/CRE 4组,分别转染相应质粒,RT-PCR和Western blot法检测干扰效率,CBF-1荧光素酶报告载体检测细胞内活性Notch信号水平,MTS实验检测细胞增殖状态.结果:各组细胞在转染重组质粒pSico(R)-GAPDH和pSico(R)-Notch1后,EGFP的表达均表现出明显的CRE依赖性;RT-PCR和Western blot实验显示,pSico(R)-Notch1载体能在CRE蛋白的调控下抑制Notch1基因的表达,CBF-1荧光素酶报告载体实验可见,Notch1的干扰作用使细胞内Notch信号水平下降;MTS实验可见Notch1干扰引起的HeLa细胞增殖抑制.结论:由可调控RNA干扰载体介导的CRE依赖性Notch1表达降低能降低细胞内Notch信号水平并抑制HeLa细胞增殖.
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可调控STAT3干扰载体抑制BIU-87细胞侵袭的体外研究
目的 探讨可调控RNA干扰载体通过抑制STAT3信号通路对膀胱癌细胞BIU-87侵袭性的影响.方法 采用受CRE重组酶调控的RNA干扰载体pSico构建针对STAT3的shRNA表达载体,以pLVX-CRE作为CRE蛋白的表达载体,将BIU-87细胞分为pSico-shNeg、pSico-shNeg/CRE、pSico-shSTAT3、pSico-shSTAT3/CRE 4组,分别转染相应质粒,RT-PCR和Western blot法检测其干扰效率,Transwell实验检测其侵袭能力.结果 双酶切及测序证实载体构建正确；各组细胞在转染重组质粒后EGFP的表达受CRE调控；RT-PCR结果显示STAT3的表达在干扰之后有显著降低.Western blot结果显示,在无CRE时,pSico-shSTAT3组与pSico-shNeg组STAT3的表达无显著差异(P＞0.05),在有CRE时,pSico-shSTAT3组STAT3相对表达量下降为pSico-shNeg组的(43±4.2)％(P＜0.05)；体外侵袭实验显示pSico-shNeg组透膜细胞数为(203.33±12.42)/视野、pSico-shNeg/CRE组(196.33±11.85)/视野、pSico-shSTAT3组(201.00±16.64)/视野,而pSico-shSTAT3/CRE组(42.00±3.00)/视野,较其他3组显著降低(P＜0.01).结论 由可调控RNA干扰载体介导的CRE依赖性STAT3表达载体能降低细胞内STAT3信号水平,并降低BIU-87细胞体外侵袭迁移能力.
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低氧诱导因子-1α条件性敲除载体的构建
目的通过建立低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)条件性敲除载体,并在体外验证引入的LoxP介导的同源重组等情况,为终建立HIF-1α条件性敲除小鼠模型奠定基础.方法以含有neo、tk基因的pLoxPneo载体为基本骨架,用涵盖3、4、5、6号外显子的HIF-1α基因组片段(7.6kb)为构建载体的同源DNA片段,通过引入LoxP等步骤,终建立旨在条件性敲除HIF-1α第5号外显子的条件性敲除载体.结果经酶切,测序和在体外细菌中用cre介导的重组等方法证明成功地构建了HIF-1α的条件性敲除载体.结论成功地构建了HIF-1α的条件性敲除载体,为今后进一步获得HIF-1α条件性敲除小鼠打下了基础.
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重组酶Cre在体外对LoxP标记的基因组进行重组的初步研究
目的:研究逆转录病毒体系转导的重组酶Cre在体外对LoxP标记的基因组进行重组的能力.方法:用逆转录病毒表达Cre,体外感染条件性基因剔除(即LoxP标记的基因)小鼠来源的原代培养的牙乳头间充质细胞.从被感染的牙乳头间充质细胞中提取基因组DNA,用PCR的方法显示LoxP标记的基因组长度的变化,从而反映Cre在体外的重组能力.结果:被表达Cre的逆转录病毒感染的牙乳头间充质细胞,其标记的基因组长度发生了预期的变化,被标记的部分发生缺失.结论:用逆转录病毒体系转导重组酶Cre能够有效地对LoxP标记的基因组进行重组.为用这一方法在体外研究特异基因对细胞生物学行为的影响奠定基础.
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报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性
目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性.方法:将胰高血糖素样肽-l受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞,经加压筛选和单克隆分离培养获得稳定的单克隆细胞株;使用药物反应强的单克隆细胞株建立报告基因方法;对新建方法进行条件优化,并用优化的方法对促胰岛素分泌肽融合蛋白原液和成品进行生物学活性测定.结果:经加压筛选和单克隆分离培养后获得对Byetalog强反应性的细胞株CHOglpar/crec 14;新建方法剂量反应曲线符合四参数方程,R2砰大于0.99;对促胰岛素分泌肽融合蛋白的原液和成品分别测定3次,RSD值均低于5.0％,回收率在70％～130％之间.结论:报告基因法操作简便,重复性和准确性都较高,有望作为替代方法应用于促胰岛素分泌肽融合蛋白的生物学活性测定.
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探讨β2-微球蛋白检测对糖尿病病人的临床意义
目的：检测糖尿病病人血β2-微球蛋白浓度，探讨其水平变化与糖尿病病人肾脏损害程度的关系，同时与常规肾功能(尿素氮，肌酐)进行比较，确定它对诊断早期肾功损害的意义。方法：对我院肾内科2008年1-10月收治的43例糖尿病病程在2个月-20个月的病人，按病程分为两组，用免疫透射比浊法检测血β2-微球蛋白，同时进行肾功能测定，经过比对血β2-微球蛋白含量在治疗前后有明显变化，且较常规肾功能指标敏感。结果：当糖尿病组与糖尿病肾病组的血尿素，肌酐尚都在正常范围时，糖尿病组的β2-微球蛋白已经开始升高，有显著性差异（P＜0.05），随着糖尿病病情变化，β2-微球蛋白也随之发生相应的改变。结论：β2-微球蛋白检测可作为监测糖尿病病情，防治并发症的有效指标之一，可尽早发现糖尿病肾病，对于保护肾脏，减少糖尿病并发症有较高的临床价值。
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探讨β2-微球蛋白检测对糖尿病病人的临床意义
目的:检测糖尿病病人血β2-微球蛋白浓度,探讨其水平变化与糖尿病病人肾脏损害程度的关系,同时与常规肾功能(尿素氮,肌酐)进行比较,确定它对诊断早期肾功损害的意义.方法:对我院内分泌科2010年1-10月收活的43例糖尿病病程在2个月-20个月的病人,按病程分为两组,用免疫透射比浊法检测血β2-微球蛋白,同时进行肾功能测定,经过比对血β2-微球蛋白含量在治疗前后有明显变化,且较常规肾功能指标敏感.结果:当糖尿病组与糖尿病肾病组的血尿素,肌酐尚都在正常范围时,糖尿病组的β2-微球蛋白已经开始升高,有显著性差异(P＜0.05),随着糖尿病病情变化,β2-微球蛋白也随之发生相应的改变.结论:β2-微球蛋白检测可作为监测糖尿病病情,防治并发症的有效指标之一,可尽早发现糖尿病肾病,对于保护肾脏,减少糖尿病并发症有较高的临床价值.
