乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状

由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.

乙型肝炎病毒转基因小鼠

乙型肝炎病毒转基因小鼠对研究HBV基因结构和功能,基因表达的调控,HBV的复制和致肝细胞病变的关系,HBV感染和宿主免疫系统的应答以及HBV感染与肝细胞癌之间的相互关系等,都有极为重要的意义.本文对HBV转基因小鼠及其在研究HBV中的应用进用综述.

Spyda基因过表达转基因小鼠品系的建立

目的 建立Spyda基因过表达转基因小鼠品系用于深入研究Spyda基因的功能. 方法 利用Gateway技术构建Spyda表达载体,通过DNA显微注射的方式获得Spyda基因过表达的首建鼠.首建鼠与野生型鼠杂交,所得子代中的阳性鼠同窝交配,已传3代以后的阳性小鼠经SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测外源基因的起始模板量,通过与杂合子比较来预测小鼠的基因型,再用传统育种方式验证SYBR Green实时荧光定量PCR的结果. 结果 获得7只首建鼠,通过与野生型鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,传至第3代,经实时荧光定量PCR方法筛选出4只纯合子的小鼠,经测交验证,其与正常小鼠交配所生的后代均为阳性,证明实时定量PCR的结果是正确的.建立了2个独立的Spyda转基因小鼠纯合子品系. 结论 建立了稳定遗传的纯合子Spyda基因过表达转基因小鼠品系,可作为工具鼠进一步深入研究Spyda基因的功能.

秋水仙碱对小鼠肝脏的损伤作用

秋水仙碱是从百合科植物丽江山慈菇的球茎等中分离出来的一种生物碱[1].作为一种抗炎药物秋水仙碱治疗应用正受到人们的重视和研究[2,3].但是,其LD5o较低,过量秋水仙碱诱发的不良反应较多,常见的有消化道反应,对肾脏、骨髓和肝脏也有损害等[4,5].误食含有秋水仙碱的鲜黄花菜也会引起食物中毒[6].金属硫蛋白(MT)是一类广泛分布于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸巯基的金属结合蛋白质.MT被认为可能具有调节细胞内金属离子的稳态、拮抗有害重金属毒性、抗电离辐射、捕获自由基、抗过氧化应激、抗凋亡和参与细胞生长调节等功能.MT是一种抗损伤的细胞防御性的因子,对机体起到一定的保护作用,在肝脏中MT有一定的拮抗扑热息痛等药物损伤肝脏的作用[7-9].Itoh等[10]报道了秋水仙碱能够诱导雄性MT(+/+)小鼠的肝脏MT增加.本试验利用MT敲除基因小鼠观察秋水仙碱的肝脏毒性,探讨MT在肝脏保护中的可能作用.

一个评价蒽环类抗生素心脏毒性的新模型/一种评价单个细胞内细胞色素P450酶活力的新方法/应用λ/lacZ转基因小鼠研究微囊藻毒素体内遗传毒性

1 485种化学物致突变试验和致癌试验结果一致性比较/生物芯片在遗传毒理学中的应用/转基因小鼠在体内致突变研究中的应用

二乙基亚硝胺(DEN)诱发λ/lacZ转基因小鼠微核和基因突变实验研究

目的应用λ/lacZ转基因小鼠检测二乙基亚硝胺(DEN)诱发体内遗传毒性.方法小鼠腹腔注射DEN(25mg/kg),每周1次,连续4周.染毒48小时后检测外周血微核细胞率.末次染毒7天后处死动物,提取组织DNA,通过体外包装反应获得并测定肝脏、肺脏、膀胱lacZ基因突变频率.结果DEN诱发微核率与对照组无显著性差异,肝脏组织lacZ基因突变(MF)为268.4×10-6,是对照组的6.13倍,肺脏MF也明显高于对照,是其3.66倍,而膀胱组织MF则与对照无显著性差异.结论肝脏、肺脏均是DEN致突变的靶器官,但对其敏感度并不相同.

砷致癌动物模型研究现状

人类流行病学资料显示,长期暴露于砷化合物可以导致人类皮肤、肺、膀胱、肝和肾脏的癌症.近来报道指出,砷在小鼠和大鼠的相应器官也可诱发促癌或完全致癌作用,给予p53+/-和K6/ODC转基因小鼠无机砷的甲基化代谢产物二甲基胂酸(DMA)或亚砷酸盐,对转基因小鼠的皮肤或膀胱有一定程度的致癌、联合致癌或促癌作用.由于到目前为止尚无无机砷化合物致癌的动物模型,致使其致癌机制的研究一直滞后,所以大量研究人员致力于野生型和转基因动物的砷致癌动物模型研究,本文就这一方面的研究进展做一综述.

半乳糖修饰的反义RNA真核表达质粒在乙型肝炎病毒转基因小鼠体内抗病毒疗效研究

目的:探讨半乳糖修饰的反义RNA真核表达质粒在乙型肝炎病毒转基因小鼠体内的抗病毒作用.方法:以半乳糖多聚赖氨酸(Gal-PLL)作肝靶向载体,将乙型肝炎病毒基因C区的反义RNA真核表达重组质粒(pCEP4-aC)制备为Gal-PLLpCEP4-aC.将24只血清HBV DNA、HBsAg阳性的小鼠,随机等分为Gal-PLL-pCEP4-aC治疗组、Gal-PLL pCEP4对照组和生理盐水阴性对照组,于实验第1天尾静脉分别注射Gal-PLL-pCEP4-aC、Gal-PLL-pCEP4(100μ g/只)和等体积的生理盐水.观察实验治疗前后血清HBsAg变化和21天时血清HBV DNA、肝组织HBsAg、HBcAg改变.结果:Gal-PLL-pCEP4-aC治疗组7、14、21大时血清HBsAg较治疗前明显降低;21天时血清HBV DNA转阴率62.5%(5/8),肝组织免疫组织化学HBsAg、HBcAg表达较Gal PLL-pCEP4组和阴性对照组显著降低.而Gal-PLL pCEP4对照组和生理盐水组用药后血清中HBsAg与用药前比较差异性不明显(p＞0.05),Gal-PLL-pCEP4组血清HBV DNA转阴1只(1/8)生理盐水组8只均未转阴.结论:肝靶向反义RNA能在乙肝转基因小鼠体内抑制HBV的复制和抗原表达.

以肿瘤坏死因子α转基因小鼠为类风湿关节炎模型的研究进展

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种慢性自身免疫疾病,肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor,TNF-a)过表达在本病的发病过程中起到重要的作用,并介导了多种炎症因子的表达.目前抗TNF药物已广泛应用于RA临床.过表达人TNF-a的转基因小鼠可出现类似RA的病理表现:起病缓慢、发病率高、模型稳定.因此,TNF转基因(TNF-Tg)小鼠模型在RA研究中具有重要的意义,现已广泛应用于RA的诊疗技术和病理机制研究,尤其是淋巴管功能的研究,并取得一系列成果.本文针对该模型小鼠的生理病理特征、研究进展进行综述.

降糖消脂片对KK-Ay糖尿病肥胖小鼠胰岛素受体及底物表达的影响

目的:建立糖尿病肥胖小鼠模型,观察降糖消脂片对模型小鼠胰腺胰岛素受体及底物表达的影响.方法:采用KK-Ay转基因小鼠,高脂饲料喂养造成糖尿病肥胖小鼠模型.对照组为同龄C57小鼠,成模的KK-Ay小鼠分为模型组、吡格咧酮组、降糖消脂片高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg-1)(11只/组),连续灌胃给药(ig)8周.每周称体重及摄食量,隔周测血糖.药后8周取胰腺作病理切片,并取胰腺组织检测胰岛素受体及底物表达.结果:降糖消脂片各剂量组明显减轻糖尿病肥胖小鼠体重,降低血糖.病理结果显示:降糖消脂片可减少变性及凋亡的胰岛细胞.糖尿病肥胖模型组小鼠胰腺组织胰岛素受体β(insulin receptor β,lnsRβ)和胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)的表达低于对照组.降糖消脂片可有效诱导InsRβ和IRS-1表达.结论:降糖消脂片对KK-Ay糖尿病肥胖小鼠有明显的治疗作用,并可诱导胰岛素受体及底物表达.

清利活血健脾中药复方对慢性免疫性肝损伤模型小鼠细胞免疫功能的影响

目的:观察刀豆蛋白(ConA)诱导转基因小鼠慢性免疫性肝损伤肝组织细胞免疫功能情况,探讨清利活血健脾中药复方荣肝合剂对其的影响.方法:选用转基因小鼠62只,随机分为模型组、正常组、联苯双酯(DDB)组、茵陈组、茵陈蒿汤组、荣肝合剂组,除正常组外,其余5组采用ConA尾静脉注射的方法制备慢性肝损伤模型.各组均于开始造模的同时给予相应的药物或0.9％氯化钠溶液灌胃,每天1次,连续4周.末次给药后24h,取肝组织光镜下观察其病理变化,流式细胞仪检测CD:、CD；T细胞的表达情况.结果:病理组织学变化,与正常组比较,模型组肝组织结构被破坏,肝细胞变性坏死,成纤维细胞浸润,大量纤维组织增生,部分肝组织有假小叶形成.各脏器重量指数变化,各治疗组与模型组比较,肝脏指数均有显著性差异(P＜0.05),其中荣肝合剂组、茵陈蒿汤组脾脏、胸腺指数也有明显变化(P＜0.05).细胞免疫功能变化,与正常组比较,模型组CD4+所占比例显著性下降,CDs比例显著性升高(P＜0.05,P＜0.01),药物治疗后,CD4/CD8+的比例有所上升(P＜0.05),其中荣肝合剂组优于其他治疗组(P＜0.05).结论:中药复方对慢性免疫性肝损伤的病理损害有明显减轻的作用,其作用的一个方面可能与细胞免疫功能的调节密切相关.

益智汤对APP695转基因小鼠行为学及脑组织LRP-1和RAGE表达的影响

目的:观察益智汤对淀粉样蛋白前体蛋白( APP) 695转基因小鼠行为学及脑组织低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP-1)和高糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响,探讨益智汤治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法:13月龄APP695转基因小鼠随机分为模型组、益智汤组、同月龄同背景转基因阴性小鼠正常组.益智汤组小鼠每天根据体质量以益智汤( 1mL/l00g)灌胃,模型组和正常组给予等体积蒸馏水.中药治疗3个月后,使用电迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,使用免疫组化和Western Blot技术观察各组小鼠大脑LRP-1和RAGE的表达情况.结果:电迷宫检测发现模型组小鼠学习记忆能力低于正常组(P＜0.01),益智汤组小鼠学习记忆能力较模型组小鼠明显改善(P＜0.01).免疫组化和Western Blot结果提示:与正常组相比,模型组小鼠脑组织LRP-1的表达降低,RAGE的表达增加(P＜0.01)；益智汤治疗90d后,与模型组相比,益智汤组小鼠脑组织各LRP-1的表达增强,RAGE的表达降低(P＜0.05).结论:APP695转基因小鼠脑组织LRP-1和RAGE的表达改变,益智汤通过调整LRP-1和RAGE的表达来改善其学习记忆能力.

松果菊苷对乙肝病毒复制和抗原表达的影响

以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞为体外模型,研究松果菊苷对乙肝病毒(HBV)复制和抗原表达的影响,采用ELISA法测定细胞上清乙肝表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)水平;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平.以HBV转基因小鼠为体内模型,研究松果菊苷对HBV复制的影响,首先采用荧光定量PCR法检测转基因小鼠肝组织HBV DNA水平,采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;同时检测血清转氨酶水平和肝组织病理变化;然后将HBV表达阳性的转基因小鼠随机分为5组:对照组、拉米夫定(50 mg·kg-1)组和松果菊苷高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg-1)组.每天灌胃给药1次,连续给药30 d.第31天分离小鼠血清检测HBV DNA,HBsAg和HBeAg水平;提取肝组织DNA测定其HBV DNA水平,同时作肝组织病理检查.结果表明:松果菊苷在50,100 mg·L-1作用HepG2.2.15细胞6d后能显著抑制HBsAg和HBeAg表达,其高抑制率分别为42.68％,46.29％;同时在100 mg·L-1对HBV DNA具有抑制作用.此外,松果菊苷在50mg· kg-1剂量时能显著抑制HBV转基因小鼠HBsAg与HBeAg表达,其抑制率分别为42.82％,29.12％,同时对转基因小鼠血清HBV DNA水平有显著抑制作用.提示松果菊苷对HBV复制和抗原表达具有较强抑制作用.

荣肝合剂对ConA诱导慢性免疫性肝损伤小鼠

目的 观察刀豆蛋白(ConA)诱导转基因小鼠慢性免疫性肝损伤肝组织淋巴细胞中Fasl和Bcl-2蛋白表达情况,探讨荣肝合剂对细胞凋亡的影响.方法 选用转基因小鼠74只,随机分为模型组、正常组、联苯双酯(DDB)组、菌陈组、菌陈蒿汤组、荣肝合剂组,分别灌胃给药4周.末次药后24 h,取肝组织光镜下观察其病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡数,流式细胞仪检测肝组织T淋巴细胞中Fasl和Bcl-2蛋白表达.结果 病理组织学变化:与模型组比较,荣肝合剂组及菌陈蒿汤组肝组织纤维增生及细胞坏死较轻(P<0.05);凋亡指数及相关基因蛋白的表达:与正常组比较,模型组的凋亡指数及凋亡基因Fasl蛋白表达显著增高(P<0.05),而凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达无显著变化(P>0.05);与模型组比较,荣肝合剂组及菌陈蒿汤组凋亡指数减少(P<0.01),并且两组的Fasl表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2表达水平明显升高(P<0.01);与菌陈蒿汤组比较,荣肝合剂组在凋亡指数及Fasl和Bcl-2蛋白表达方面差异无统计学意义(P>0.05),而与菌陈组和联苯双酯组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 中药复方(荣肝合剂和菌陈蒿汤)不仅可减轻肝组织的病理损害,还可能通过对Fasl和Bcl-2表达的调节,减少慢性免疫性肝损伤小鼠细胞凋亡.

反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断乙肝病毒C基因表达

目的 探讨针对乙肝病毒C基因反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断病毒基因表达的效果.方法 各实验组经尾静脉给药后,采用real-time PCR、时间分辨免疫荧光技术、免疫组织化学法等技术分别检测血清HBV DNA、HBeAg含量及肝细胞内HBcAg的表达情况.结果 注射锁核酸后,对乙肝病毒核酸的复制和乙肝病毒e抗原的合成均有较强的抑制作用,注射后1、3 和5 d,HBV DNA的平均抑制率分别19.24％、39.20％和44.47％；HBeAg的平均抑制分别为30.71％、51.14％和63.46％；小鼠肝细胞的HBcAg阳性细胞数也较对照组明显减少.结论 针对乙肝病毒C基因的反义锁核酸在转基因小鼠体内能有效抑制病毒基因的复制和表达,提示C基因可作核酸药物治疗的有效靶位.

hACE2转基因小鼠SARS-CoV感染后的病理变化及免疫学反应

目的 观察SARS-Cov感染人血管紧张素转换酶2(hACE2)转基因小鼠引起的病理变化并初步探讨其发生的免疫学机制,为SARS研究提供可靠的动物模型.方法 实时PCR测定hACE2转基因小鼠的拷贝数;用PUMC01株SARS-CoV感染hACE2转基因小鼠,光镜下观察小鼠全身组织器官的病理变化;ELISA方法检测血清特异性抗体和肺组织匀浆上清细胞因子TNF-a、IL-6、IFN-γ变化.结果 单拷贝hACE2转基因小鼠在感染SARS-CoV后肺组织出现更严重的间质性肺炎并伴有肺外多器官损伤;少数转基因小鼠血清检测到特异性IgC,抗体;转基因小鼠肺组织匀浆上清TNF-a、IL-6、IFN-γ的水平明显升高.结论 hACE2转基因小鼠感染SARS-CoV后出现与人类SARS患者相似的病理特征和免疫学反应,为研究SARS发病机制和药物评价提供了小动物模型.

EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠的制备

将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因用显微注射法导入昆明种小鼠受精卵的雄性原核以制备转基因小鼠模型.共注射受精卵450枚,存活291枚,植入假孕母鼠的输卵管使之发育,产出仔鼠12只.注射后卵的存活率和仔鼠出生率为65%和4%.用PCR法分析显示5只有BLLF1基因整合,整合率为42%.结果表明携带BLLF1基因的转基因小鼠已经制备成功.该转基因小鼠可作为研究EB病毒致病机理,特别是与自身免疫病关系的动物模型.

表达人载脂蛋白AI小鼠主动脉平滑肌细胞的培养及意义

培养表达人apoAI转基因小鼠主动脉平滑肌细胞(SMC).从具有可诱导,高效,多组织表达人apoAI转基因小鼠分离主动脉,用改良贴块法培养血管SMC.细胞经相差显微镜和免疫细胞化学证实具有SMC特征.Northern blot 表明转基因鼠主动脉平滑肌细胞中有人apoAI mRNA表达,而正常鼠则未检测出,为在体外从细胞和分子水平研究apoAI基因表达在胆固醇代谢及动脉粥样硬化发生中的作用提供了较理想的细胞模型.

转人载脂蛋白Eε4和突变淀粉前体蛋白基因小鼠的建立

将人载脂蛋白(ApoEε4) 转基因鼠和突变前体蛋白(APP)转基因小鼠交配,以建立h-ApoEε4/突变APP双转基因小鼠.共产出仔鼠23 只,经PCR初步筛选,并用Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA作进一步鉴定,得到3只双转基因小鼠.该双转基因鼠的建立为进一步阐明ApoEε4的致病作用以及对AD的研究提供了理想的研究模型.