首页 > 文献资料
-
乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状
由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.
-
脑囊尾蚴病循环抗原和外周血免疫细胞相关性研究
目的:检测不同治疗阶段脑囊尾蚴痛循环抗原和免疫细胞的变化,探讨循环抗原对机体的免疫抑制作用,评估驱虫疗效.方法:选用活虫期患者20例,分别于用药前、1个疗程后、2个疗程后、3个疗程后、停药后3个月,检测血液循环抗原及免疫细胞.结果:随着治疗疗程的增加,循环抗原阴性率逐渐增高,3个疗程治疗后CAg转阴率95%,同时外周血免疫细胞也逐渐增高,3个疗程后基本恢复正常.经相关分析具有明显的相关性.结论:循环抗原转阴率与淋巴细胞值成正相关,与循环抗原值成负相关,循环抗原可能对机体免疫细胞有抑制作用;3个疗程治疗是适宜疗程.
-
旋毛虫一步快诊试纸条试剂盒在流行病学调查中的应用
旋毛虫病是一种人畜共患的寄生虫病，对人畜危害很大。以往曾研制数种检测旋毛虫抗体和循环抗原的方法，在临床诊断和流行病学调查中广为应用，但不能收到立等可取的效果。近期我们在另文中报告一种全新的简便、快捷的检测旋毛虫抗体一步快诊试纸条试剂盒(试纸条法)［1］，该法具有敏感性高，特异性较强，无需任何仪器设备，3～5 min即可显示结果的特点。我们于1998～1999年用该法对郑州、襄樊两市部分人群(共2 445人)进行旋毛虫抗体流行情况调查，并和常用的快速ELISA［2］加以比较，结果如下。 1.材料和方法： (1)检测对象：选自郑州、襄樊两市旋毛虫病相对高发区的人群。郑州市不同职业人群随机抽样调查共1 228人，其中屠宰场工人285人，大专院校食堂炊食员430人，公共经营饭店从业人员127人，商场和副食店售货员292人作为检测标本。同时随机抽取了回族饭店的从业人员(多数为回民)94人进行检测以作比较。襄樊市郊健康体检人群随机抽样调查共1 217人。
-
抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究
本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗IgG抗体分别作为捕捉抗体,组合建立4种双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测循环抗原,分析各种方法检测SEA的灵敏度,并平行检测急性日本血吸虫病人血清6份、慢性日本血吸虫病人血清29份、华支睾阳性者血清9份、卫氏并殖吸虫阳性者血清15份、弓形虫阳性病人血清7份、正常体检者血清118份.结果显示,以IgY为捕捉抗体或检测抗体,可检测到浓度为7.5 ng/mL的SEA,灵敏度是基于IgG的夹心ELISA的4倍.4种夹心ELISA法检测急血病人血清阳性率均为100％,检测正常人血清的特异性为99.1％；与弓形虫、华支睾吸虫阳性者血清无交叉反应；而检测慢血病人血清和并殖吸虫阳性者血清时,以IgY为捕捉抗体的2种ELISA( IgY+ IgY-E、IgY+ IgG-E)阳性率均分别为79.3％、6.7％；而IgG为捕捉抗体时,以IgY为检测抗体(IgG+ IgY-E)时的阳性率分别为75.8％、6.7％,以IgG为检测抗体( IgG+ IgG-E)时的阳性率分别为72.4％、13.3％,以IgY作为捕捉抗体的检测效果优于IgG.基于IgY抗体的双抗体夹心ELISA检测循环抗原具有良好的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的免疫诊断.
关键词： IgY 日本血吸虫 循环抗原 双抗体夹心ELISA -
阿苯达唑治疗广州管圆线虫感染的免疫学效应研究
动态观察小鼠人工感染广州管圆线虫并接受阿苯达唑治疗后外周血嗜酸性粒细胞数量、循环抗原CAg、IL-5水平变化,探讨阿苯达唑治疗广州管圆线虫感染的免疫学效应.将160只BALB/c小鼠随机分组成4组:实验组、感染未给药对照Ⅰ组、未感染给药对照Ⅱ组、健康对照Ⅲ组.动态计数各组小鼠外周血嗜酸性粒细胞,采用单抗金标层析法和酶联免疫吸附法测定循环抗原CAg和血清IL-5,并用RT-PCR方法验证脾细胞IL-5 mRNA表达水平的变化.结果发现,实验组和对照Ⅰ组小鼠相比于对照Ⅱ组和对照Ⅲ组的各项指标变化有所差异,实验组的外周血嗜酸性粒细胞增加在第4周达到高峰后随即下降,至第7周已与对照Ⅱ、Ⅲ组无显著性差异.对照Ⅰ组则在第2周开始出现的嗜酸性粒细胞增加一直持续至整个实验周期.实验组的广州管圆线虫CAg阳性率和血清IL-5水平的高峰期和恢复期也均比对照Ⅰ组提前,同时IL-5 mRNA表达水平也呈现相应的变化.本研究结果提示阿苯达唑可改变感染广州管圆线虫后小鼠的外周血嗜酸性粒细胞、循环抗原、IL-5血清浓度等免疫学效应的变化趋势.
-
2株重组弓形虫P30抗原单克隆抗体的制备和鉴定
目的 制备重组P30抗原单克隆抗体,研究其生物活性.方法 重组质粒pET28b-P30经BL21 (DE3)表达,纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体.ELISA筛选阳性克隆,经亚克隆建株.体内诱生腹水法制备抗体,测定其亚类、效价,Western blot分析其特异性,双单抗夹心-ELISA测定其敏感度.双单抗夹心-ELISA法检测弓形虫感染鼠血清中的CAg.结果 筛选出2株抗重组P30的单克隆抗体9D7、2H9, 抗体重链分别为IgG2a、 IgG1, 轻链均为κ链, Western blot显示2株单抗均能识别弓形虫速殖体天然P30抗原.双单抗夹心-ELISA检测抗原量为0.5 μg/ml;同法检测鼠血清中的CAg,感染第4、6、8 d的阳性率分别为20%、60%、60%.结论 制备的P30抗原单克隆抗体具有较高的敏感性和特异性,为其应用研究打下了基础.
关键词： 重组P30抗原 杂交瘤技术 单克隆抗体 双单抗夹心-ELISA 循环抗原 -
1 246例住院儿童弓形虫感染情况调查
目的研究弓形虫感染与小儿疾病的关系. 方法以1 246例住院儿童为实验组,267名健康儿童为对照组,使用统一调查表问卷调查,同时采集静脉血,分离血清,采用双抗体夹心酶标一步法检测血清弓形虫循环抗原. 结果实验组和对照组弓形虫循环抗原阳性率分别为3.53%和1.87%,两组阳性率差异无显著性.早产儿、黄疸、新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)、肺炎、癫痫组弓形虫循环抗原均为阴性.上呼吸道感染、支气管炎、腹泻病组弓形虫循环抗原阳性率与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).喉炎(包括喉炎、急性喉-气管-支气管炎)、热性惊厥、哮喘(包括支气管哮喘、喘息性支气管炎)组弓形虫循环抗原阳性率与对照组比较差异有显著性(0.05＞P＞0.01或P≤0.01). 结论虽然住院儿童与健康儿童血清弓形虫循环抗原阳性率差异无显著性,但某些疾病患儿弓形虫循环抗原阳性率与对照组比较,差异有显著性,提示弓形虫急性感染可能是这些疾病的一种病因.
-
阴道毛滴虫小鼠模型的建立及感染动物免疫学诊断的研究
目的建立阴道毛滴虫动物模型,寻找较理想的免疫诊断方法. 方法用体外培养不同时间(10和30 d)、不同虫数(1×106和1×105)以及不同保存方法(新分离虫株和液氮保存虫株)获取的阴道毛滴虫虫株分别于背部皮下感染小鼠,并动态观察感染小鼠的脓肿形成.用ELISA方法检测感染小鼠血清中CAg、CIC和Ab. 结果用体外培养10和30 d的新分离虫株感染小鼠,脓肿出现率分别为75%和60%,大脓肿面积分别为0.94 和0.25 cm2.用新分离和经液氮保存的虫株感染小鼠,脓肿出现率分别为80%和25%,大脓肿面积分别为1.00和0.09 cm2.以1×106虫数皮下接种35只小鼠,在感染4～32 d后均可形成脓肿,其脓肿大小与脓液中活虫数有关;感染50～60 d时,脓肿内只有死虫,无活动虫体.用ELISA方法测定感染小鼠抗体,感染40～60 d的小鼠血清抗体滴度可高达1∶640;用斑点ELISA方法检测感染小鼠血清中CAg、CIC,只有用毒力较强的虫株感染小鼠,才会出现阳性反应. 结论用1×106个阴道毛滴虫皮下感染小鼠可以建立较理想的动物模型,活虫在体内维持的长时间为40 d,且虫体致病与接种虫数、虫株体外培养时间和体外保存方法有关.感染小鼠的抗体滴度与感染持续时间有关;在毒力较强的虫株感染的小鼠体内,可测出CAg和CIC.
-
抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究
为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫rSjCTPI表达蛋白，以此重组蛋白免疫小鼠，筛选出高效价的抗rSjCTPI单抗，建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统，以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的SEA-ELISA比较。结果获得了一株抗rSjCTPI的单克隆抗体,其抗体同型为IgG1。P-M-ELISA检测急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为100%、91.7%、 0、0和0。而SEA-ELTSA为100%、98.3%、6. 69%、10%和20%。P-M-ELISA法对30例同批血吸虫病人治疗前的阳性率和治愈后4个月的阴转率分别为100%和30%；而SEA-ELTSA分别为100%和10%。结果表明，应用抗rSjCTPI单抗检测血吸虫病人循环抗原的P-M-ELISA法具有较高的敏感性和特异性，并有一定的疗效考核价值。
-
双抗体夹心ELISA检测旋毛虫循环抗原实验条件的研究
目的 建立检测旋毛虫循环抗原(circulating antigens,CAg)的双抗体夹心ELISA方法.方法 以抗旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原的鸡卵黄抗体IgY作为包被抗体,以抗ES抗原的小鼠单抗IgM作为检测抗体,建立监测旋毛虫CAg的双抗体夹心ELISA方法；应用棋盘滴定法,选择包被抗体、待测血清、检测抗体及酶结合物的佳稀释度,并测定方法的敏感性.结果 双抗体夹心ELISA检测旋毛虫CAg的佳条件为:IgY包被浓度为7.5 μg/ml,血清稀释度为1∶60,单抗稀释度为1∶2000,辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgM抗体稀释度为1∶2000.该方法检测旋毛虫CAg的敏感性为1 ng/ml.结论 建立的旋毛虫CAg双抗体夹心ELISA法具有较高的敏感性,有望用于旋毛虫病的早期诊断.
-
产妇弓形虫感染对新生儿影响的研究
目的探讨孕妇弓形虫感染对胎儿的影响.方法采用酶免三联诊断法对356例母婴配对标本进行血清学检测.结果产妇弓形虫感染率平均为1 9.1%,各单项检测分别为CAg 15.2%、IgM 2.5%、IgG 3.4%;新生儿弓形虫感染率平均为17.7%,其脐血各单项检测分别为CAg 1 6.9%、IgM 0.3%、IgG 2.2%.CAg垂直传播率为35.2%(19/54),IgG垂直传播率为33.3%(4/12).在4例畸胎儿中,2例脐血弓形虫血清学阳性.结论孕妇感染弓形虫有1/3机会可通过胎盘垂直感染胎儿,影响胎儿发育,重者致畸、致死.
-
抗弓形虫McAb的建立及应用研究
应用杂交瘤技术,建立了5株分泌抗弓形虫单克隆抗体的杂交瘤细胞.其中1E9和4C10 2株分泌的McAb效价达1∶12 800.该2株单克隆抗体均属IgG1亚类,其识别的弓形虫抗原分别为P22、P28.1E9和4C10 McAb混合后与兔抗弓形虫抗体联合,进行双抗体夹心ELISA测定弓形虫的敏感性分别为12.5和25个虫体/ml.检测146份有不良孕产史妇女血清,11份弓形虫循环抗原(CAg)阳性(7.53%).检测11份自然流产物,1份CAg阳性,该流产物转种小鼠后证实确含有弓形虫.92份育龄妇女血清1份弓形虫CAg阳性(1.09%).有不良孕产史的妇女血清弓形虫CAg阳性率明显高于育龄妇女血清阳性率(P<0.05).弓形虫经1E9、4C10 McAb处理后对小鼠腹腔巨噬细胞攻击,感染率分别为7.8%和7.5%,而对照组感染率为14.5%,证明该2株单克隆抗体对弓形虫有明显的抑制作用.
-
固相金纳米棒光学免疫传感器对血吸虫病早期诊断价值的研究
目的 评价固相金纳米棒光学免疫传感器对日本血吸虫病的早期诊断价值. 方法 利用构建的固相金纳米棒光学免疫传感器检测感染日本血吸虫1、2、4、6、8周的兔血清抗原,并与IHA抗体检测结果作比较. 结果 血吸虫感染第1周的兔血清IHA特异抗体检测为阴性,固相金纳米棒光学免疫传感器检测抗原呈阳性.2种方法检测血吸虫感染第2周、第4周、第6周和第8周的兔血清均为阳性. 结论 固相金纳米棒光学免疫传感器对日本血吸虫感染兔血清抗原具有早期识别能力,感染第1周的兔血清抗原检测即呈阳性反应.该方法可用于日本血吸虫病的早期诊断,也可为其他寄生虫病的早期诊断带来新的尝试.
-
视网膜脱离及中浆患者弓形体感染的初步调查
弓形体病是由弓形体寄生于有核细胞内所引起的人兽共患寄生虫病,人群普遍易感,根据其感染途径的不同可分为先天性及获得性弓形体病.由于其临床表现复杂,许多症状无特异性,除已知与色素膜炎的关系密切外,与其他眼底病变的关系研究较少.近年来,对原发性视网膜脱离(下称网脱)及中心性浆液性视网膜脉络膜病变(下称中浆)患者进行弓形体特异性抗体(IgG、IgM)、循环抗原(CAg)及核糖核酸(DNA)检测(简称TOX-4项),结果报道如下.
-
ICT卡在丝虫病监测中的应用
传统的丝虫病纵、横向病原学检测方法为夜晚采血镜检微丝蚴,而ICT卡则是利用免疫色谱技术从血液中快速检测班氏丝虫循环抗原,方法简便、快捷[1],无需夜间采血,既可用于诊断又可判定疗效.为观察ICT卡在丝虫病监测中的作用,我们用其对周口地区原班氏丝虫病流行区防治前不同微丝蚴阳性率的村庄中800名村民进行了检测.
-
泰安地区7种疾病患者的弓形虫感染调查
弓形虫这一专性细胞内寄生原虫可经多途径感染,侵犯多种组织器官而致复杂的临床表现,因许多症状缺乏特异性,常易造成误诊或漏诊.我国人群弓形虫感染较普遍,平均感染率为4%～9%[1].有关个别地区住院病人的弓形虫感染情况已有报道[2].为了解本地区特殊病种人群弓形虫感染状况,探讨其相互关系,以便更好地协助临床诊治,于1998年12月～1999年2月收集了本地区7种疾病共261例患者的血清进行了弓形虫特异性抗体和循环抗原的检测,结果如下.
-
日本血吸虫病免疫诊断的研究进展与问题
对日本血吸虫病的实验诊断,尽管可采用病原学方法,但由于血吸虫在终宿主体内的寄生有着特殊的生物学关系,导致在慢性病人和低度感染者的粪便中难以查见病原体,而且多数病原学方法的操作繁琐.为寻找更敏感和较简便的方法来替代或补充病原学诊断方法的不足,自50年代起,国内外学者就开始进行了免疫诊断的研究,经过半个世纪的努力,取得了显著进展.已发展了皮试、尾蚴膜实验、环卵沉淀实验、间接血凝和多种酶免疫试验等方法;鉴定出10余种有较好诊断价值的抗原(包括同源和异源抗原);创立了多个检测系统(如循环抗原、循环抗体和循环复合物的检测);探索了皮内、血、尿多个测试途
-
肿瘤患者弓形虫感染调查
弓形虫属于一种机会性致病原虫,对免疫缺陷、免疫功能低下及免疫抑制患者有潜在的威胁.现已证明,不少肿瘤患者细胞免疫功能低于正常人,且在抗肿瘤治疗过程中,化疗及放射治疗,使患者免疫功能进一步降低,因而对机会性感染的病原体特别易感.本实验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对112例临床确诊恶性肿瘤患者和78例健康体检者进行了弓形虫循环抗原(CAg)、抗弓形虫抗体IgM、IgG检测,了解肿瘤患者弓形虫感染状况,探讨弓形虫感染与该人群的相关性,结果报告如下.
-
一步快诊试纸法试剂盒诊断旋毛虫病的效果
旋毛虫病为人兽共患寄生虫病.随着人民生活水平的不断提高,肉类的食用方法多样化,致使旋毛虫病有增加之势.猪是人感染旋毛虫的主要来源,因此如何更快速、简便地检测人畜旋毛虫感染是一急待解决的问题.以往研制出的数种检测旋毛虫抗体和循环抗原的方法已在临床和流行病学调查中广泛应用[1～3],但均需时较长.
-
肺结核病患者血清中弓形虫CAg、IgG、IgM的检测
弓形虫为机会性致病病原体,近几年的研究表明,在正常人群、孕妇、弱智、畸形儿童、吸毒人群及中枢神经系统疾病的患者中均有不同程度感染,在免疫机能低下时尤为严重,因此免疫功能低下的肺结核病人易导致弓形虫感染和发病.为了探讨弓形虫感染与肺结核病之间的关系,作者采用ELISA和IHA方法对54例肺结核患者进行了血清弓形虫循环抗原(CAg)和IgG、IgM抗体的检测.
