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中医药防治肝脏疾病的分子机制研究
自从分子生物技术开展以来,中医药治疗各种肝脏疾病的机理研究已经取得了不少进展,现综述如下.中医药防治肝癌的分子生物学基础1 抑制肿瘤细胞DNA合成吴万垠等(1)用莪术油进行小鼠肝癌HepA抑制实验,以病理细胞图像分析仪分析莪术油对小鼠细胞DNA含量的影响,结果其抑瘤率明显高于对照组(P<0.01),能显著降低小鼠肝癌细胞的DNA光密度值、核面积及DNA指数,同时能提高肝癌细胞中二倍体细胞的比例,降低超五倍体细胞比例,提示其抗癌活性与抑制肿瘤细胞DNA合成有关.
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抗弓形虫McAb的建立及应用研究
应用杂交瘤技术,建立了5株分泌抗弓形虫单克隆抗体的杂交瘤细胞.其中1E9和4C10 2株分泌的McAb效价达1∶12 800.该2株单克隆抗体均属IgG1亚类,其识别的弓形虫抗原分别为P22、P28.1E9和4C10 McAb混合后与兔抗弓形虫抗体联合,进行双抗体夹心ELISA测定弓形虫的敏感性分别为12.5和25个虫体/ml.检测146份有不良孕产史妇女血清,11份弓形虫循环抗原(CAg)阳性(7.53%).检测11份自然流产物,1份CAg阳性,该流产物转种小鼠后证实确含有弓形虫.92份育龄妇女血清1份弓形虫CAg阳性(1.09%).有不良孕产史的妇女血清弓形虫CAg阳性率明显高于育龄妇女血清阳性率(P<0.05).弓形虫经1E9、4C10 McAb处理后对小鼠腹腔巨噬细胞攻击,感染率分别为7.8%和7.5%,而对照组感染率为14.5%,证明该2株单克隆抗体对弓形虫有明显的抑制作用.
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乙型脑炎病毒持续感染对模型中变异株部分性状及病毒抑制实验
我们利用人肝癌细胞株KN73建立乙型脑炎(乙脑)病毒体外持续性感染模型,并探讨乙脑病毒变异株部分性状变异机理,通过病毒抑制实验和观察,提示该模型体系可为今后抗病毒药物的开发提供帮助.
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沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究
采用P1基因PCR扩增产物酶切图谱分析方法对沈阳地区分离的肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)菌株进行分型,以便了解本地区MP的流行情况,为临床诊断提供依据。 MP临床分离株的分离和鉴定:取临床诊断为肺炎支原体肺炎患儿的咽拭子标本放3ml支原体肉汤培养基置37℃培养7~10?d,分别转种于支原体肉汤培养基和支原体固体培养基,用血球吸附实验和MP生长抑制试验鉴定分离株。结果:6株临床分离株血吸附实验结果阳性。用MP感染阳性患者的血清做MP生长抑制实验,6株分离株亦均呈现阳性结果。
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肝细胞生成素核受体的确定及特性
目的:肝细胞生成素(HPO)特异性刺激肝细胞增生的信号转导存在特异性核受体信号转导途径.方法:利用125I标记的HPO,通过受体结合和特异性竞争抑制实验及Scatchard分析原代培养大鼠肝细胞和肝癌细胞核抽提物中核受体.结果:原代培养大鼠肝细胞和肝癌细胞核抽提物中存在核受体,核受体数量分别为1.7×109/g、和5.0×109/g,平衡解离常数(Kd)分别为35 pmol及1 2 pmol,且存在数量上和亲和力的差异,此结合不能被EGF、生长激素和甲状腺激素所竞争抑制.HepG2细胞放射自显影显示HPO核受体的存在.结论:HPO促肝细胞增生作用可以通过肝细胞核受体介导.
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丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29组织蛋白酶D表达水平的影响
目的:观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的组织蛋白酶D(Cath-D)表达水平的影响.方法:运用细胞增生抑制实验(MTT法),光镜观察,免疫细胞化学技术观察丁酸钠对HT-29细胞株的生长,凋亡和对Cath-D表达水平的影响.结果:丁酸钠能抑制HT-29细胞株增生,诱导凋亡,并促进Cath-D表达.结论:丁酸钠能够影响Cath-D的表达水平,这暗示了Cath-D在丁酸钠诱导的凋亡中可能伴有重要角色.
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噬菌体表面展示技术筛选HCBP6人源单链可变区抗体
目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv).方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选出48个克隆,利用酶联免疫黏附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCBP6结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对HCBP6特异性scFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了162倍.用酶联免疫黏附法测定第5轮筛选后上清液中含有的噬菌体抗体与HCBP6结合活性.其中有30株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(P8 nm 0.77,P240.714,P26 0.728,P29 0.723,P38 0.803,P39 0.762,P43 0.747等).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有7株交叉反应较弱(P80.145,P24 0.119,P26 0.17,P29 0.186,P38 0.118,P39 0.138,P43 0.178),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,后确定1株(P24)阳性克隆.提取质粒,SfiI/NotI双酶切后,将片段亚克隆到pCANTAB5E载体,进行DNA序列测定,DNA大小为771 bp,符合人源化单链可变区抗体典型的骨架区(FR)及互补决定区(CDR)的序列结构.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得HCBP6的scFv.
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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定
目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-Id scFv),为研制HCV E2的抗-Id scFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCV E2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCV E2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCV E2特异性抗-Id scFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-Id scFv与HCV E2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(E11 A450 nm 0.928,E14 A450 nm 1.152,E17 A450 nm 1.136,E28 A450 nm 1.163,E53 A450 nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11 A450nm 0.044,E14 A450 nm 0.062,E17 A450 nm 0.166,E28 A450nm 0.012,E53 A450 nm 0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,后确定1株(E28)阳性克隆提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCV E2的抗-Id scFv,本实验结果为开展用抗-Id scFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.
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体内膜肺实验研究
我们采用聚丙烯中空纤维,研制出一种体内膜肺(intracorporeal membrane oxygenator, ICMO),并进行了初步实验研究,观察体内膜肺治疗急性呼吸衰竭和肺动脉高压的效果。报告如下。 材料与方法 1.体内膜肺:将一束聚丙烯中空纤维(美国美敦力公司生产)两端粘接于两根细塑料管上作为气体出入口,并套入一根粗塑料管中,粗塑料管两端粘接于另外两根细塑料管上作为血液出入口,其中含中空纤维200根,有效长度20 cm,中空纤维直径400 μm,纤维膜表面微孔直径0.03 μm,血气交换面积0.05 m2,粗塑料管直径1 cm,细塑料管直径2 mm。 2.实验动物模型:出生2~3周的乳猪8只,体重5~8 kg,平均(6.6±1.2) kg,雌雄不限。实验猪麻醉后,全身肝素化,维持ACT>300 s,用生理盐水将体内膜肺预充排气后,经右前胸第3、4肋间切口置入胸腔,体内膜肺两端导血细塑料管分别经肺动脉瓣上方插入主肺动脉,经房间沟插入左心房,使其连接于主肺动脉和左心房之间,肺动脉血经体内膜肺转流;其两端导气细塑料管经胸壁穿出,胸部切口暂时用透明塑料薄膜封闭。 体内膜肺转流2 h后,用0.2%琥珀酰胆碱溶液0.2mg*kg-1*min-1持续静脉滴注1~3 min,抑制实验猪自主呼吸,导致急性缺氧和二氧化碳蓄积,氧分压(PaO2)<60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),二氧化碳分压PaCO2>50 mm Hg,造成急性呼吸衰竭。动物限制性通气导致平均肺动脉压明显升高,平均肺动脉压(mPAP)>20 mm Hg,造成肺动脉高压。
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血清抗补体微量溶血实验的建立及影响因素探讨
补体系统作为重要的免疫组分之一,对机体的防御机能、免疫功能的调节以及免疫病理过程起着重要作用.正常机体内具有严密的调控机制,维持补体系统的自稳状态,抗补体活性便是其中的一种.血清抗补体活性的高低通常用血清对补体所介导的溶血实验的抑制程度来表示,由于通常所采用的CH100的方法测定补体活性时[1],不能精确反应补体活性的微细变化,而CH50的操作过程又过于复杂,国外学者已进行的一些研究,由于试验方法的不灵敏或不统一造成研究结果的不一致[2,3],从而掩盖了可能存在的临床意义.因而如何建立一种快速、简便、准确且有较好重复性的微量补体抑制实验,成为人们将补体抑制因子的研究引入临床所尚待解决的问题,为此我们设计了本研究.
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超早孕妇女血中早孕因子/chaperone10预示胚胎的存活
早孕因子(EPF )/chaperone10是妊娠早期分泌的具有免疫抑制作用和生长因子作用的蛋白质,在授精12~48 h后就可利用玫瑰花结抑制实验(RIA)在妊娠血清中检测到。EPF早是由Mor‐t o n等[1]在1974年描述,产生于授精后植入前,存在于妊娠早期。已经从人、猪、牛[2]、羊、红鹿等[3]哺乳动物妊娠血清和妊娠妇女子宫颈黏液中检测出了EPF活性。我们报道了可以从滋养细胞肿瘤患者体内测出EPF 活性。
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对耐药菌用中西药联合抑菌的实验观察
近年来耐药菌株不断增多,给临床治疗带来极大困难,因此,选择高效抗菌药物,有重要临床意义。1 材料与方法1.1 材料 (1)培养基:杭州微生物试剂厂生产的酪蛋白药敏培养基,按说明书配制,灭菌后倒皿备用。(2)药敏用纸片:北京天坛药物生物开发部生产。(3)试验用菌株:耐药性鼠伤寒沙门菌(STM)由150医院提供,经筛选后选出3株有代表性的95号,J 9号和P 10号耐药菌作为试验用菌株。(4)复方中药合剂:由虎杖,黄连,苦参等七种中药组成。
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抗心律失常药物的致心律失常作用
所有抗心律失常药物均有致心律失常作用,由于其发生较为隐匿,不为临床所重视,直至1989年心律失常抑制实验(CAST)的结果发表之后,人们才提高了对抗心律失常药物所致心律失常作用的认识及重视程度.本文仅就抗心律失常药致心律失常的定义、基本机制、预防等作一总结.
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PFC联合QHS抑制试验在食管癌中的诊断价值
食管癌是指由食管鳞状上皮或腺上皮异常增生所形成的恶性病变,其发展一般经过上皮不典型增生、原位癌、浸润癌等阶段.食管鳞状上皮不典型增生是食管癌的重要癌前病变,由不典型增生到癌变一般需要几年甚至十几年.正因为如此,一些食管癌可以早期发现,并可以完全治愈[1].吞咽不畅或有异物感的患者应尽早行胃镜检查,以便发现早期食管癌或癌前病变[2].对无条件开展或是无法耐受的患者,有无其他方法可供选择?这是医患一直都关心的问题.本研究应用空斑形成抑制实验(PFC)联合体外溶血素分泌测定(QHS)对食管癌进行诊断,观察两种方法在食管癌诊断中的的价值,现报道如下.
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干扰素口含片剂的研制
作者采用乳糖和淀粉等作为赋形剂,与重组人干扰素(长春生物制品研究所生产,300万IU/m1)按适当比例混合制成口含片剂,每片约含干扰素500IU,经稳定性试验、细菌学检查、急性毒性试验、病毒抑制实验、NK细胞活性实验和小鼠口腔粘膜SlgA实验,验证干扰素在剂型改变、途径和剂量改变之后活性及稳定性是否改变.
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疡必愈止痛片对幽门螺杆菌体外抑制作用的实验研究
疡必愈止痛片是由木香、九香虫、栀子等药组成的中药复方制剂,临床表明本药对消化性溃疡具有明显疗效,实验研究表明其对大鼠实验性胃溃疡能降低溃疡指数,促进溃疡愈合.由于近年研究已表明:溃疡的发生与复发与幽门螺杆菌(HP)感染密切相关,是引起消化性溃疡的重要病因,故对疡必愈止痛片进行了对HP的体外抑制实验.
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硫酸镁在老年心律失常治疗中的应用
心律失常在老年心血管疾患中占很大的比例,临床抗心律失常的目的是为了控制临床症状,纠正血液动力学紊乱及防止心血管猝发事件的发生.由于抗心律失常药物的可能致心律失常及促心律失常作用,特别是美国心肺血管研究所的心律失常抑制实验(CAST)的结果,使临床在应用抗心律失常药物治疗时,必须考虑到药物可能得到的效益和可能引起的毒副作用之风险的程度比,而权衡其利弊.镁治疗心律失常已有50多年的历史,由于其疗效显著副作用少,越来越受到重视.本文通过对68例老年心律失常的治疗,观察硫酸镁的抗心律失常作用,现报告如下.
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流感和禽流感实验室检测技术概要
一.实验室安全要求流感实验室生物安全要求:安全Ⅱ级+(BSL-2级+)实验室:特异性H5的RT-PCR病毒核酸检测血清检测中的血凝抑制实验(HI).安全Ⅲ级+(BSL-3级+)实验室:微量中和实验;特异性H5的RT-PCR病毒核酸检测阳性的采样标本的病毒分离、尸检标本的检测.实验室必须具备生物安全柜、离心机、PCR仪、电泳仪、紫外线检测仪等[1].
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拉帕替尼对乳腺癌细胞生长及Her2通路的影响
拉帕替尼是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂,已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗蒽环类、紫杉类与曲妥株单抗耐药的Her2阳性进展期或转移性乳腺癌[1].我们以SKBR3乳腺癌细胞为研究对象,采用生长抑制实验、流式细胞术和蛋白印迹等方法观察拉帕替尼对乳腺癌细胞增殖、细胞周期分布、凋亡以及Her2通路的影响.
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乳酸环丙沙星注射液细菌内毒素检查法的研究
目的:以细菌内毒素检查方法对乳酸环丙沙星注射液进行热原检查.方法:采用抑制或增强试验,将细菌内毒素检查法与家兔法检测结果作对比.结果:该注射液经一定稀释后对测定无干扰.结论:细菌内毒素检查法适用于检测该注射液.