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2010-2011年西城区(南区)手足口病原监测结果分析
目的 对2010-2011年北京市西城区(南区)手足口病患者进行肠道病毒病原体检测,分析肠道病毒病原学特征,为手足口病防控提供科学依据.方法 采集医疗机构临床诊断为手足口病患者咽拭子和粪便标本共418份,应用Real time-PCR检测咽拭子标本病毒核酸；并对粪便标本进行病毒分离.结果 418份标本中,肠道病毒总体检出率为53.59％(224/418).2010年咽拭子标本未分型肠道病毒阳性检出率(36.26％)高于2011年(16.89％),结果差别有统计学意义(x2=13.80,P ＜0.005)；2011年咽拭子标本CoxA16型病毒阳性检出率(26.03％)高于2010年(10.99％),差别有统计学意义(x2=8.58,P＜0.005).分别比较两年采集的咽拭子标本,发病3天内和3天以上采集的标本检出率差异均有统计学意义(2010年:x2 =5.85,P＜0.05；2011年:x2=15.26,P＜0.005).结论 引起北京市西城区(南区)手足口病流行的主要肠道病原体,2010年为未分型肠道病毒,2011年为CoxA16.在发病3天内采集患者咽拭子标本,有助于提高病毒检出率.
关键词： 手足口病 肠道病毒 Real time-PCR 病毒分离 -
2012年北京市丰台区环境污水中肠道病毒监测分析
目的 监测北京市丰台区环境污水中的肠道病毒的血清型分布及流行情况,为北京市丰台区肠道病毒相关的传染病预防和控制提供实验室支持.方法 选择吴家村污水处理厂为监测点,2012年每月采集污水(共12份),用阴离子膜-碱洗脱法进行病毒浓缩,然后进行病毒分离,并对阳性分离物进行肠道病毒血清型鉴定.结果 北京市丰台区环境监测污水标本中共分离到60株肠道病毒、6株腺病毒;病毒分离以B组肠道病毒为主;夏季(5-9月)的病毒分离率较高;部分环境中分离的肠道病毒与手足口患者体内标本有同源性.结论 环境监测可以为北京市丰台区肠道病毒病例监测系统提供重要的补充信息.本研究可以为丰台区乃至北京市的EV研究提供背景信息.
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呼吸道病毒检测方法的研究进展
呼吸道病毒是一组能够通过呼吸道感染引起呼吸系统及其他系统疾病的病毒.常见的呼吸道病毒有正粘病毒科的流感病毒,副粘病毒科的副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒,以及冠状病毒科的冠状病毒,披膜病毒科的风疹病毒和腺病毒科的腺病毒等.近年来新的致病性病毒不断地被发现,如人类偏肺病毒、人博卡病毒、SARS病毒、高致病性禽流感病毒等.对于呼吸道病毒来讲,同一种病毒可引起多种临床症状,不同的病毒可引起同一种临床症状,给临床诊断和治疗造成很大的困难,所以这类病毒的检测确诊对于采取有效的预防和治疗措施极为重要.
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微量高通量细胞培养法在脑炎病毒分离中的应用
目的 建立用微量高通量、多细胞谱培养法分离未明原因脑炎患儿中病毒的方法,探讨脑炎患儿中肠道病毒的感染情况.为大量、及时分离病毒、病毒鉴定和分子流行病学研究奠定基础.方法 将8株不同的细胞接种于96孔细胞培养板中,每种细胞接种一行,细胞长成单层后孔内接种脑脊液标本,每孔5-10μl,每份标本纵向接种8孔(8种细胞系),35℃、5%CO2培养.出现细胞病变(cytopathic effect,CPE)者传代培养两次.两次均出现CPE者视为细胞培养阳性,-70℃保存用于病毒鉴定.将培养物首先用肠道病毒通用引物做逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)并测序,进行初步筛查.结果 93份标本中有56份出现明显的CPE,病毒分离率为60.22%(56/93),其中在MA104细胞出现病变者40份,阳性率为43.01%.其中6份培养物的RNA用肠道病毒通用引物得到了扩增,序列测定确定为肠道病毒.结论 微量多细胞培养法具有简便、快速等特点,适合用于病毒的初步筛查.
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脊髓灰质炎病毒三类检测方法的灵敏度比较
目的 对三种脊髓灰质炎病毒检测方法的灵敏度进行比较.方法 将Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊灰病毒标准株(TR株),从1×101倍系列稀释至1×107倍.选用三类方法对制备的脊灰病毒稀释液系列进行检测,比较不同检测方法的灵敏度,三类方法分别为:RD和L20B细胞分离脊灰病毒、肠道病毒通用引物EV1/EV2和脊灰病毒特异性引物UC11/UG1分别进行RT-PCR检测脊灰病毒核酸、三种商业性肠道病毒Realtime RT-PCR检测试剂盒检测脊灰病毒核酸.结果 RD和L20B细胞分离脊灰病毒的检测限可达脊灰病毒标准株的104倍稀释度;基于肠道病毒通用引物(EV1/EV2)和脊灰病毒通用引物(UC11/UG1)的两种普通RT-PCR检测限分别为103、102倍稀释度;达安、金豪、基因格三种商业性实时荧光RT-PCR试剂盒的检测限分别为:101、103、104倍稀释度.结论 RD和L20B两种细胞分离脊灰病毒的灵敏度并不亚于现有的核酸检测方法.目前部分商业性的肠道病毒通用型核酸检测试剂盒主要针对手足口设计,对脊灰病毒的检测灵敏度反而不够,应慎重选用.
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发现一种与严重急性呼吸综合征相关的新型冠状病毒
目前"传染性非典型性肺炎"在世界范围内爆发流行,世界卫生组织称其为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrom,SARS).美国CDC采集了SARS患者的各种标本,并使用病毒分离、电子显微镜、组织学研究、分子与血清学分析等技术对这些标本进行广谱的病原学研究.研究结果显示这次的爆发流行与一种新的冠状病毒有关,而且有证据显示这种病毒是引起SARS的病原体.
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38例病毒性脑膜炎病原学调查
目的调查病毒性脑膜炎的流行状况,进行病原学检测.方法对流行地区38例儿童病毒性脑膜炎发病情况作个案调查,并对患儿的脑脊液和粪便进行病原学检测.结果共收集的24份脑脊液标本、32份粪便标本进行病毒分离.在2份脑脊液标本中分离出埃可30病毒、柯萨奇B5;11份粪便标本中分离出埃可30病毒、柯萨奇B5、柯萨奇B3.从38例患儿脑脊液和粪便中分离出3型肠道病毒,脑脊液中病毒分离出阳性率8.3%(2/24),粪便中病毒分离阳性率34.4%(11/32).其中埃可30病毒在脑脊液分离率为4.2%(1/24);在粪便中的分离率为28.1%(9/32).结论本次流行的病原可能以埃可30病毒为主,也可能存在合并柯萨奇B5病毒等2种或以上的肠道病毒.
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麻疹病人咽拭子标本的麻疹病毒分离结果
目的收集麻疹病人的咽拭子标本进行麻疹病毒分离,为我国麻疹病毒流行毒株基因型的鉴定提供更多的分离株.方法 2005年5～8月,选择南京市第二医院收治入院的疑似麻疹病人109例采集了咽拭子标本,接种EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞).结果分离到麻疹病毒46株,分离阳性率为42.20%.结论此次南京第二医院与江苏省CDC合作分离到麻疹野病毒,标本量大,阳性率高,分析原因,与采集的时间、操作人员的技术及冷链储运和及时运输密切相关.
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2004～2005年十堰市冬春季流感监测实验室结果分析
目的分析2004～2005年十堰市冬春季流感监测实验室结果,探索十堰市流感活动规律,制定有效的防制方案.方法收集2004年8～9月份十堰市健康人群血清,检测流感抗体水平;每周至监测点医院采集流感样患者鼻咽拭子标本5～10份,以MDCK细胞进行流感病毒分离.结果健康人群流感病毒抗体水平,A3(H3N2)型阳性率高,达92.00%(GMT为76.74),A1(H1N1)型较低,为35.00%(GMT为11.10),B型低,仅18.00%(GMT为6.64);病原学监测:冬春季以B型为优势流行株,也分离到3株A3(H3N2)亚型毒株.结论十堰市人群中A3型流感抗体水平较高,但B型和A1型流感抗体水平很低,特别是人群中B型流感病毒分离率较高,应加强防范.
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2009-2015年甘肃省酒泉市流行性感冒病原学监测结果分析
目的 了解甘肃省酒泉市2009-2015年流行性感冒(流感)病原学特征和流行动态,为流感防控工作提供科学决策.方法 对2009-2015年度国家流感监测哨点医院采集流感样病例咽拭子标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应进行流感病毒核酸检测及其型别和亚型鉴定,对部分核酸检测阳性样品进行病毒培养、分离和鉴定.结果 2009-2015年共检测流感样病例标本3332例,流感病毒核酸阳性率为21.54％,其中各型流感病毒核酸阳性数及构成比分别是甲型H1N1 277例(38.58％),甲型H3N2 224例(31.20％)和乙型217例(30.22％).7年间流感病毒检出率依次为28.60％、25.63％、18.25％、21.58％、18.23％、19.44％和20.60％,各年度阳性率差异有统计学意义(x2=25.51,P=0.000);0～、1 ～、5～、15～、25～和60～岁年龄组的阳性率依次为6.90％、15.85％、29.07％、23.96％、21.43％和14.29％,5～岁年龄组阳性率高,各年龄组流感病毒核酸阳性率差异有统计学意义(x2=74.51,P=0.000).流感病毒核酸阳性病例主要集中在10月至次年3月,病毒核酸检测阳性病例占总阳性病例的91.50％;分离到流感病毒105株,其中69株甲型H1N1,14株甲型H3N2,10株乙型B/Victoria,12株乙型B/Yamagata.结论 甘肃省酒泉市流感流行每年有1个高峰期,主要发生在冬春季,5～岁儿童感染率高,流行毒株在不同时间呈现型别优势且存在年度交替流行的特点.流感防控措施的重点时间在冬春季,建议加强5～岁组儿童的流感疫苗接种.
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2008-2010年广西边境地区流感和人禽流感监测结果分析
目的 对广西壮族自治区(广西)8个边境市(县)所属的综合性医院不明原因肺炎、病原待查重症肺炎和流感样病例开展病原学监测,了解广西边境地区流感病毒优势株及其变化,探索广西边境地区流感流行规律,为科学防控边境地区流感和人禽流感提供依据.方法 在边境地区医院设置监测点,开展相关病例监测,提取监测病例咽拭子标本病毒核酸,反转录合成cDNA,多重PCR扩增目的 基因,电泳检测扩增产物;采用细胞培养法分离鉴定流感病毒;采集从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群的静脉血34份,通过血凝抑制实验进行禽流感H5亚型抗体检测.结果 2008年广西边境地区分离到6株流感病毒,其中B型5株,H1N1亚型1株;2009年分离到33株流感病毒,其中B型17株,H3N2亚型8株,H1N1亚型2株,甲型H1N16株;2010年分离到流感毒株130株,其中B型55株,H3N2亚型49株,H1N1亚型1株,甲型H1N125株;2008-2010年检测不明原因肺炎、病原待查的重症肺炎标本9份,人禽流感核酸和多重呼吸道病毒核酸检测均为阴性;采集从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群血样本34份,未检出H5N1亚型禽流感病毒抗体阳性的标本.结论 2008年和2009年广西边境地区的流感优势株为B型流感毒株,2010年为B型和H3N2亚型流感毒株;从有限的不明原因肺炎和病原待排查的重症肺炎病例标本中未检出禽流感病毒;禽流感H5亚型在职业暴露人群中未发现隐性感染.进一步加强对广西边境地区的流感和人禽流感病原学监测工作,对广西的流感和人禽流感的防控工作有重要意义.
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2004-2007年十堰市流行性感冒监测结果分析
目的 分析2004-2007年湖北省十堰市流行性感冒(流感)监测结果,初步探求本市流感病毒活动特点及其流行规律,寻求科学有效的防制对策.方法 常年开展流感流行病学和病原学监测,每年9月份开展血清学监测.结果 门诊流感样病例就诊比例每月变化趋势不太明显,儿童远高于成人比例;从1449份标本中分离流感病毒302株,分离率20.84%;月分离率在每年1-3月和7-9月分别出现冬季峰和夏季峰,冬季峰高于夏季峰;H3N2亚型、B型Victoria系流感病毒分别引起37起疑似流感暴发疫情中的9起和14起;健康人群各亚型流感病毒抗体水平每年都发生较大变化,其阳性率与该亚型流感病毒的流行强度一致.结论 十堰地区几乎全年均有流感病毒活动,呈现冬季峰高于夏季峰的双峰模式,H1N1、H3N2亚型与B型的Victoria系、Yamagata系流感病毒在本地区呈现此消彼长的流行规律;每年应在充分考虑本国流感流行特点和B型流感病毒复杂性的基础上提供疫苗组分;建议十堰市人群每年10-12月及时接种流感疫苗,增加中小学校和托幼机构学生的疫苗接种率.
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SARS实验室诊断技术研究现状
严重急性呼吸综合征(Serve Acute Respiratory Syndrome,简称SARS)是2003年主要在我国暴发流行的一种以发热和严重肺部感染为主要特征的新发急性传染病.经过国内外专家学者的病原体的分离和基因图谱的协作研究,2003年4月16日,WHO正式宣布,确认冠状病毒的一个变种是引起SARS的病原体[1].自加拿大科研人员率先成功地分离出SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)以来[2],世界上不同实验室相继成功地分离出了SARS-CoV[3-5],同时研制开发出了不少可用于SARS-CoV感染的特异性实验室检查技术.这些实验室诊断技术主要可以分为以下几类:(1)病毒分离;(2)聚合酶链反应(PCR);(3)特异性抗体检测;(4)免疫组化法检测病毒抗原;(5)电子显微镜检查.这些技术大多未经多家实验室之间的标准化,在用于SARS-CoV诊断中其特异性、敏感性、准确性等方面还存在着差异.现就这些技术的研究情况作一综述.
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应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养分离寨卡病毒研究
目的 应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养并分离鉴定寨卡病毒.方法 收集寨卡病毒病确诊病例的精液样本并在MRC-5细胞中进行培养,观察致细胞病变效应(CPE).采用实时荧光PCR (real-time PCR)方法鉴定培养,同时对培养物进行序列测定和比对分析.结果 病例精液样本经MRC-5细胞盲传3代,未观察到明显的特异性致CPE,MRC-5细胞3代培养物寨卡病毒经real-time PCR检测结果呈阳性.毒株命名为Henan/001/2016,GenBank编号为MF593625,属于亚洲基因簇系.Henan/001/2016与Natal RGN株的亲缘关系为接近,在E基因区段的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.7％和100％.结论 MRC-5细胞适用于寨卡病毒的分离、培养和鉴定.
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2006～2007年北京市流感监测结果分析
目的 分析2006～2007年北京市流感流行特征,为控制流感提供科学依据.方法 收集北京市流感样病例监测资料、病原学资料和集中发热疫情资料进行分析.结果 2006～2007年北京市流感活动平稳,流行高峰集中在2007年元旦前后,流行优势毒株为H3N2亚型,进入12月以后HIN1和B型流感病毒活动强度有所增加.集中发热疫情主要集中在中小学校(90%),疫情高发时间和病原学检测结果均与监测情况一致.结论 采用同一标准开展流感样病例监测和病原学监测工作,对于掌握该市流感流行规律有着重要意义.
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珠海登革病毒分离株的型别鉴定与序列分析研究
[目的]了解珠海市部分人群和入境船员中登革热的流行情况和珠海市流行的登革病毒株的型别和序列特征.[方法]分别采用胶体金快速法、酶联免疫吸附试验(ELISA)对登革热抗体进行检测;采用细胞培养和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行病毒鉴定,并对其结构蛋白基因序列进行克隆、测序及同源性分析.[结果]来自东南亚国家船舶的船员血清中登革病毒IgM抗体检出率为4.40%,IgG抗体为20.33%,其阳性样本经RT-PCR扩增,结果为阴性.而对本室保存的2001年珠海散发的登革热患者阳性血清,经用C6/36细胞培养分离出1株登革病毒,用登革病毒通用引物和Ⅱ型特异性引物,扩增出相应的片段,证实为登革Ⅱ型病毒;该分离株(DV2-1)的基因序列与其他9株登革Ⅱ型病毒进行系统发育关系的分析,结果显示分离株(DV2-1)与GD08/98株、FJ11/99株、16681株位于相近的分支,其中与1998年广东流行株GD08/98株系统进化关系近.[结论]2001年珠海地区登革热的散发流行为登革Ⅱ型病毒所致,推测其可能是输入性传染.
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2014-2017年百色市田林县手足口病流行病学分析
目的:探讨田林县小儿手足口病流行情况.方法:分析2014-2017年田林县手足口病患儿的临床诊治资料,总结流行病学特点及病原学.结果:患儿平均年龄(2.41±0.34)岁,重症94例(1.68％),死亡3例(0.537％).COXA16病毒55例(21.5％),EV71病毒67例(26.2％),其他肠道病毒84例(32.9％).死亡3例,全为EV71型.结论:手足口病的发病与患儿年龄、性别、季节等因素有关.重症、死亡病例与病原学相关.
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2014-2015年株洲市流感病原学监测结果分析
目的：了解株洲市2014—2015年流感流行状况及毒株的型别分布，并分析其流行趋势，为制定预防控制措施提供科学依据。方法采集流感样病例的鼻咽拭子标本，采用传代狗肾细胞( MDCK)直接进行病毒分离，分离到的毒株采用血凝抑制( HI)法进行型别鉴定。结果2014年株洲市流感实验室共收到流感样病例监测标本进行病毒分离的有1219份，分离到毒株236株，阳性率为19.36%。2015年株洲市流感实验室共收到流感样病例监测标本进行病毒分离的有1391份，分离到毒株138株，阳性率为9.92%。结论2014—2015年株洲市流感样病例中，流行均以B 型Yamagata系为主，流行季节为冬季、春季。
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深圳市福田区2009-2011年流感监测结果分析
目的 对深圳市福田区2009-2011年流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据.方法 采集2009-2011年监测点流感样病例(ILI)或流感局部暴发病人的咽拭子样本,以狗肾传代细胞(MDCK)分离流感病毒并进行型别鉴定.结果 2009-2011年监测点采集流感样病例咽拭子样本1035份,经病毒分离和鉴定确认的流感病毒330株,分离率31.88％. 2009年共分离到流感病毒202株,分离率42.00％; 2010年共分离到流感病毒89株,分离率32.48％; 2011年共分离到流感病毒3株,分离率13.93％.3年暴发疫情累计发病例数1 684例,分离培养流感病毒552株,分离率32.78％.15～岁年龄组的流感病毒分离率高达52.78％.结论 流感病毒分离阳性率逐年下降,流感活动强度逐渐降低,加强流感病毒监测,有效控制流感疫情.
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哈尔滨市流行性感冒1998～2002流行年度监测结果分析
流行性感冒(流感)病毒因结构不断发生变异,人群特异免疫状况不稳定,所以对流感进行监测十分重要.我们对哈尔滨市1998年10月至2003年3月流感监测情况总结分析如下.1.对象与方法:用灭菌的MEM液采集发病3天内、症状典型、疑似流感患者的咽含嗽液或咽拭子,标本采自哈尔滨市第一医院、哈尔滨市儿童医院.样品用抗生素处理,采用鸡胚双腔法接种培养(2002～2003年同时用MDCK细胞培养方法进行了病毒分离),收获液经血凝试验检查HA活性,病毒鉴定用红细胞凝集抑制方法.
