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商品化的登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒效果评价
目的 比较登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒四种商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,并用健康人血清对商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒进行效果评价.方法 登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒感染病例(各3例)的恢复期血清,采用ELISA方法检测四种黄病毒IgG抗体,评估商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,从此前出现过输入性寨卡病毒感染确诊病例的江门市采集健康人群血清,检测上述四种黄病毒IgG抗体,后通过蚀斑减少中和实验验证ELISA方法检测的寨卡病毒IgG抗体阳性结果.结果 通过确诊登革热、寨卡和乙脑病例恢复期血清检测发现,已有商品化试剂盒在检测登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒阳性血清时存在交叉反应.IgG抗体ELISA检测试剂盒检测发现,78例健康人血清样本中登革病毒抗体阳性样本数为0例;寨卡病毒抗体阳性样本数为8例(阳性率10.25％);日本脑炎病毒抗体阳性样本数37例(阳性率47.43％);33例健康人血清样本中西尼罗病毒抗体阳性样本数为0例.蚀斑减少中和实验结果显示,8例寨卡病毒IgG抗体阳性样本均未检测到中和抗体.结论 商品化黄病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒存在交叉反应,单纯运用ELISA试剂盒检测会出现假阳性结果,因此在进行血清学方法检测时应联合其他检测方法.
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四种人冠状病毒核衣壳蛋白的交叉反应特征
目的 了解人常见冠状病毒NL63、229E、OC43和HKU1核衣壳蛋白(N蛋白)之间的抗原交叉反应特征.方法 对人冠状病毒NL63、229E、OC43和HKU1的N蛋白用大肠杆菌进行表达和纯化,用竞争ELISA方法对已知的人阳性血清进行交叉反应分析.结果 同属内NL663和229E之间及OC43和HKU1 N蛋白之间存在抗原交叉反应.结论 人常见冠状N蛋白抗原交叉反应特征为以后基于人冠状病毒N蛋白的血清学研究和免疫学诊断试剂研发提供了重要的实验依据.
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HIV特异性CTL反应研究进展
HIV原发感染可以诱发强烈的特异性CTL反应.HIV特异性CTL可以直接裂解病毒感染的细胞、分泌IFN等细胞因子抑制病毒的复制或分泌趋化因子阻断病毒进入靶细胞,从而抑制的HIV复制.但随着疾病的进展,已建立的细胞免疫反应逐渐丧失对HIV的控制,机体免疫系统崩溃并终导致AIDS的产生.HIV感染过程中特异性CTL确切的保护机制以及慢性期CTL功能受损的具体原因还不完全清楚,对这些问题继续深入的探讨无疑对HIV疫苗和免疫治疗研究具有重要意义.
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新型冠状病毒双重荧光RT-PCR检测方法
目的 为快速检测新型冠状病毒,防控疫情的输入,建立一种快速的双重实时荧光RT-PCR检测方法.方法 对WHO公布的单重实时荧光RT-PCR检测引物和探针进行重新设计和优化,建立双重荧光RT-PCR反应体系,分别采用羧基荧光素(FAM)和绿色荧光蛋白(VIC)荧光基团标记探针,实现双基因的同时检测.结果 经优化的双重实时荧光RT-PCR方法有较好的灵敏度和特异性,对阳性对照质粒检测灵敏度为31拷贝/μl,检测健康和普通发热人员咽拭子以及流感病毒无交叉反应.结论 建立了双重实时荧光RT-PCR快速检测方法,提高检测效率和准确度的同时降低了成本,可用于新型冠状病毒的快速应急检测.
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IgY-和IgG-ELISA用于日本血吸虫病循环抗原检测的效果比较
目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中去的，且是蛋黄中惟一存在的抗体，和哺乳动物的IgG相比，IgY具有高特异、高灵敏度，保存方便及稳定，且产量高，容易生产制备等优点。本研究综合利用IgY和单克隆抗体NP28-5B的双重优点，使用两种不同的ELISA体系进行比较，寻找提高敏感度和特异度并降低交叉反应的ELISA体系，为日本血吸虫病现场大规模筛查提供可靠的依据。
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口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展
1 概述口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)属小RNA病毒科FMDV属,根据动物交叉保护和血清学试验分为O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asial 7个血清型,型间无交叉反应.每型又根据抗原亲缘关系分为不同亚型.小RNA病毒科包括鼻病毒、肠道病毒、甲肝病毒、心病毒和口蹄疫病毒5个属.
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过敏原蛋白组分sIgE检测及分析
目的 分析过敏性疾病患者血清中多种过敏原蛋白组分的sIgE,明确过敏原中的致敏蛋白组分,为临床过敏性疾病预防和治疗提供科学依据.方法 采用荧光酶联免疫法,用ImmunoCAP过敏原检测试剂检测受试者血液标本中过敏原蛋白组分及相关过敏原的特异性IgE(sIgE)水平,统计每种过敏原蛋白组分sIgE检出量和阳性率,并对主要致敏蛋白组分sIgE阳性率和相关过敏原的阳性率进行对比和分析.结果 40种过敏原蛋白组分的阳性率均小于过敏原的阳性率,致敏组分和交叉过敏组分共存于过敏原中.户尘螨、黄胡蜂毒、桃、猫毛、榛子、牛奶和鸡蛋的主要致敏蛋白组分阳性率高于过敏原阳性率的50%;百慕达草、意大利蜜蜂毒、桦树和花生的主要致敏蛋白组分阳性率介于过敏原阳性率的20%~50%之间;虾、狗毛、梯牧草和北艾草的主要致敏蛋白组分阳性率低于过敏原阳性率的20%.结论 过敏原蛋白组分检测能鉴别过敏原中真正致敏的蛋白组分,解决由于交叉反应所导致的过敏原特异性诊断难题,确保过敏性疾病特异性免疫治疗的精确性和有效性.
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血清肌钙蛋白在冠心病诊断中的临床意义
血清肌钙蛋白(Tn)对急性心肌梗死(AMI),特别是非典型AMI诊断与不稳定心绞痛预后的判断具有重要的意义.Tn作为心肌损伤的标志物,具有高度特异性,不与骨胳肌起交叉反应,且灵敏度高.本文对72例冠心病患者心肌损伤标志物Tn进行检测,进一步探讨其在冠心病发生过程中的变化,为临床的诊断、治疗提供依据.
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季节性灭活流行性感冒病毒裂解疫苗安全性和免疫原性及与甲型H1N1流行性感冒病毒的交叉免疫反应研究
目的 评价季节性灭活流行性感冒(流感)病毒裂解疫苗[Seasonal Influenza Vaccine(Split Virion),Inactivated;sInfV-Sp]的免疫原性及安全性,分析与甲型H1N1流感(甲流)病毒的交叉免疫反应.方法 于2008年10月～2009年6月,在山东省青岛市开展开放式临床试验,选择18～60岁健康成人及＞60岁健康老人接种sInfV-Sp进行安全性观察,并采集受试者免疫前及免疫后21d的血清标本,采用血凝抑制(Hemagglutination Inhibition,HI)试验检测sInfV三个型别抗体及甲流病毒抗体.结果 128名观察对象完成疫苗接种并进行安全性观察,其中120人完成采血.不良反应发生率为18.8%(24/128),以全身不良反应为主,发生率为12.5%(16/128),未见严重不良反应.接种疫苗后21d,成人组sInfV-Sp三个型别抗体阳转率为64.5%～90.3%,几何平均滴度(Geometric MeanTiter,GMT)增长5.1～26.8倍;老人组抗体阳转率为74.1%～84.5%,GMT增长5.7～28.4倍.两个年龄组免疫后甲流抗体阳转率为5.1%和8.2%,GMT增长1.4和1.7倍,明显低于sInfV-Sn(H1N1)水平.结论 sInfV-Sp免疫原性和安全性良好,与甲流病毒有一定交叉免疫反应.
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水蛭可溶性抗原诊断日本血吸虫病的初步研究
目的探讨水蛭可溶性抗原(LSA)用于诊断日本血吸虫病的可能性. 方法首先用Western blot对LSA与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性进行分析,进而对LSA-ELISA用于诊断慢性血吸虫病的效果作出评价. 结果经SDS-PAGE及Western blot技术分析的结果表明,LSA的主要蛋白组分区带为8条,其中分子质量为116～118、72、45和31 ku蛋白组分可被日本血吸虫病患者血清所识别;用LSA-ELISA检测慢性血吸虫患者血清85份,阳性检出率为90.59%(77/85)检测正常人血清87份和其它3种寄生虫病患者血清56份,假阳性率分别为4.60%(4/87)和1.79%(1/56).与SEA-ELISA法比较,两者敏感性和特异性差异无显著性(P>0.05). 结论日本血吸虫病患者血清中存在较多的抗LSA抗体;用LSA检测慢性血吸虫病显示出较好的敏感性和特异性,因而水蛭是一种值得进一步研究的血吸虫异源抗原.
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猪蛔虫与常见蠕虫共同蛋白组分及抗原性分析
目的 分析猪蛔虫可溶性抗原(Ascaris suum antigen,AsAg)与日本血吸虫可溶性抗原(Schistosoma japonicum antigen,SjAg)、囊虫可溶性抗原(Taenia solium cysticer cuscellulosae Antigen,TscAg)、旋毛虫可溶性抗原(Trichinella spiralis antigen,TsAg)和肺吸虫可溶性抗原(Paragonimus westermani antigen,PwAg)的共同蛋白组分及其抗原性. 方法 用Dot-ELISA分析5种抗原的交叉反应性,用SDS-PAGE分析AsAg、SjAg、TscAg、TsAg 和PwAg的蛋白组分;将各蛋白组分分别与猪蛔虫免疫血清进行Western blot,分析其抗原性. 结果 SDS-PAGE显示AsAg与SjAg、TscAg、TsAg 和PwAg间存在分子质量相近的蛋白组分;Western blot显示上述抗原均能被猪蛔虫免疫血清识别. 结论 AsAg与SjAg、TscAg、TsAg 和PwAg间存在着具有抗原性的共同蛋白组分.
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日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析
目的为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据. 方法制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌(雄)成虫抗原、虫卵抗原,采用Western blot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原(LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应,分析其交叉性. 结果 LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原,且所识别的抗原成分有明显差异,雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有3条和2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别,而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体. 结论在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中,LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体,而雄虫次之.
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血吸虫、绦虫抗原的研究进展
血吸虫、绦虫是重要的寄生蠕虫,呈全球性分布.此类寄生虫宿主繁多,分布广泛,且抗原成分复杂,交叉反应多,给诊断、预防带来了很大的困难.随着免疫学的发展及基因重组技术和噬菌体肽呈现技术的出现,人们期望通过血清学诊断和研制疫苗解决寄生蠕虫病的诊断和预防问题,并取得了很大的进展.蠕虫抗原按其来源或制备途径分为:天然抗原、基因重组抗原、噬菌体肽库技术模拟抗原.现对血吸虫和绦虫抗原的研究进展综述如下.
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脑囊虫病快速ELISA诊断试剂盒的应用研究
酶联免疫吸附试验(ELISA ) 诊断脑囊虫病具有高度的敏感性,除与包虫病存在交叉反应外,与其它脑部疾患均无交叉反应[1～4],尤其在鉴别诊断有癫痫发作的脑部疾病中,本法更显示出特有的优越性.为此,我们在常规ELISA的基础上,从试剂到方法重新进行了多方面的改进,并选用特制定量的滴瓶分装试剂,研制成功一种更快速、简便、敏感、特异、安全、稳定、实用的脑囊虫病诊断试剂盒,并对其临床应用进行了研究.现报告如下.
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基孔肯雅病毒荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立一种快速、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,检测基孔肯雅病毒.方法 通过序列比对挑选出基孔肯雅病毒基因组中高度保守的序列,在此序列上设计引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR反应体系.结果 经优化的荧光定量PCR方法有较好的灵敏度和特异性,对阳性对照质粒标准品的灵敏度可达21拷贝/μl,通过检测与传播媒介相似的流行性乙型脑炎病毒、黄热病毒、登革热病毒无交叉反应.结论 该方法的建立在基孔肯雅热的疾病防控方面有较好的应用前景.
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幽门螺杆菌黏附素HpaA的克隆、表达及生物学活性研究
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种慢性、感染率高的细菌,是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡的重要致病因子,并与胃癌、胃相关淋巴组织瘤密切相关.Hp感染基本的条件之一是黏附定居,N-乙酰神经氨酰乳糖结合血凝素(NLBH,HpaA)是Hp众多黏附素中的一种,可激发宿主产生相应抗体,引起黏膜和全身性免疫应答,针对它所产生的抗体不与非Hp细菌和人胃黏膜组织发生交叉反应,是Hp的保护性抗原之一.
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梅毒螺旋体基因重组抗原酶联免疫吸附实验的探讨
梅毒是由苍白螺旋体(T.pallidum)感染引起的一种严重危害人类健康的性传染性疾病.血清学非特异性试验是目前诊断梅毒的主要方法,例如快速血浆反应素实验(RPR),不加热血清反应素实验(USR);应用梅毒螺旋体抗原检测梅毒患者体内的特异性抗体,已被用于确诊梅毒感染,例如荧光螺旋体抗体吸收试验(FAT-ABS),梅毒螺旋体血凝实验(TPHA)等,但使用的均为全抗原,由于可能存在的非特异性交叉反应,使上述方法受到一定的限制.
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HPV 16型L2全长原核融合蛋白的交叉反应特性研究
目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱(Nj-NTA Agarose)纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义(H=207.292,x2=251.846,P均＜0.01),而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值(0.825和0.808)差异无统计学意义(H=0,P＞0.05).结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究.
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EB病毒感染与系统性红斑狼疮关系的研究
系统性红斑狼疮(SLE)是一种涉及多器官的自身免疫性疾病,SLE的发病机制复杂,包括遗传和环境因素[1].EB病毒(EBV)感染是与SLE发病相关的环境因素之一.EBV通过以下几个途径诱发SLE[2]:EBV感染B淋巴细胞后引起B淋巴细胞的增殖,B淋巴细胞中EBV抗原的表达在基因易感人群中诱发SLE;EBV感染的B淋巴细胞成为产生自身抗体的细胞;SLE的自身抗原与EBV的一些蛋白如EBV核抗原1(EBNA-1)、EBV核抗原2(EBNA-2)存在同源性,针对病毒抗原的抗体能与自身抗原发生交叉反应从而诱发SLE.已发现与正常人相比,SLE患者血清中抗EBV-抗体滴度及阳性率显著升高[3],但以往的抗体检测不能反映体内EBV的感染状态.本研究采用欧蒙印迹法检测针对EBV 5种抗原的抗体,该方法能明确反映体内EBV的感染状态,据此分析SLE患者EBV的感染状态以及EBV不同感染状态与疾病活动性的关系.
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EB病毒与人类肿瘤的相关性研究
EB病毒(EBV)是从非洲儿童的恶性淋巴瘤细胞培养中发现的一种嗜人B淋巴细胞的疱疹病毒.该病毒在正常人群中的感染非常普遍,绝大部分感染者为健康携带状况[1-2].但国内外大量研究表明,EBV与Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌等多种肿瘤发生有关.然而,新文献证实,初用于霍奇金淋巴瘤免疫组化检测EBV核抗原(EBNA)抗体2B4与MAGE-4存在交叉反应,因而对基于该抗体免疫组化检出的EBV与某些肿瘤相关的结论产生质疑,提出EBV不是乳腺癌病因的观点.此外,EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)治疗同种异体造血干细胞移植后发生淋巴组织增生性疾病效果明显,而在其他EBV相关肿瘤治疗方法和效果还有待研究.现对EBV的生物学特性、作用机制,EBV与各种肿瘤发生与治疗等方面的研究状况阐述如下.
