首页 > 文献资料
-
不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活剂的影响
目的 观察补益肝肾、活血化瘀方二至丸、失笑散及其合方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响.方法 采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型.造模大鼠于术后1周随机分为模型组、优思弗组、二至丸组、失笑散组及合方组:各药物干预组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,至4周末处死全部动物取材.观察各组大鼠一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBi 1)、肝组织病理,uPA蛋白表达(western blot法).结果 与假手术组比较,模型组大鼠ALT、AST、ALP、TBi 1、纤维化程度均显著升高.与模型组比较,3个复方均能降低大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P＜0.01),失笑散及合方能降低TBi 1(P＜0.01),合方改善ALP、ALT优于两个单方.3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P＜0.01),合方优于两个单方.优思弗能降低ALT、AST水平,但对肝脏纤维化无明显改善作用.与模型组比较,3个复方组uPA蛋白表达显著增加(P＜0.01),其中合方组高,失笑散组次之,再次为二至丸组,三者之间比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 二至丸、失笑散及其合方均可不同程度地干预胆汁淤积性肝纤维化形成,其机制可能与调控uPA蛋白表达有关.
-
过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响
目的研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ表达以及对HSC生物学特性的影响. 方法设立空白对照组、3 μmol/L罗格列酮组、10 μmol/L罗格列酮组;分别用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞凋亡. 结果10 μmol/L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P＜0.01),PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P＜0.01);10μmol/L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t≥5.542,P＜0.01),其α-SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P＜0.01),其凋亡发生率显著高于对照组(x2=16.682,P＜0.01). 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α-SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡.
-
缺氧预适应小鼠中一氧化氮合酶与缺氧诱导因子-1的表达
目的探讨缺氧预适应小鼠海马组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和缺氧诱导因子-1α的表达. 方法 HeLa细胞分为:不缺氧(H0组)、缺氧1 h(H1组)和缺氧4 h组(H4组);小鼠分为3组:不缺氧(M0组)、急性缺氧1次(M1组)和重复缺氧4次组(M4组),SDS-PAGE和Western印迹法检测HIF-1α和eNOS的表达. 结果 H0组HeLa细胞中未见HIF-1α,H1组出现少量HIF-1α,H4组HIF-1α有所增加.M0组小鼠海马中几乎检测不到HIF-1α,可见eNOS;M1组可检测到较少的HIF-1α,eNOS无明显变化;M4组HIF-1α和eNOS水平均增高. 结论慢性缺氧HeLa细胞中出现HIF-1α,可作为检测HIF-1α的阳性对照;随着小鼠缺氧次数的增加,HIF-1α和eNOS的水平均升高,提示它们可能参与预适应的保护作用.
-
水蛭可溶性抗原诊断日本血吸虫病的初步研究
目的探讨水蛭可溶性抗原(LSA)用于诊断日本血吸虫病的可能性. 方法首先用Western blot对LSA与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性进行分析,进而对LSA-ELISA用于诊断慢性血吸虫病的效果作出评价. 结果经SDS-PAGE及Western blot技术分析的结果表明,LSA的主要蛋白组分区带为8条,其中分子质量为116～118、72、45和31 ku蛋白组分可被日本血吸虫病患者血清所识别;用LSA-ELISA检测慢性血吸虫患者血清85份,阳性检出率为90.59%(77/85)检测正常人血清87份和其它3种寄生虫病患者血清56份,假阳性率分别为4.60%(4/87)和1.79%(1/56).与SEA-ELISA法比较,两者敏感性和特异性差异无显著性(P>0.05). 结论日本血吸虫病患者血清中存在较多的抗LSA抗体;用LSA检测慢性血吸虫病显示出较好的敏感性和特异性,因而水蛭是一种值得进一步研究的血吸虫异源抗原.
-
按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶与疟原虫卵囊黑化关系研究
目的探讨丝氨酸蛋白酶与疟原虫卵囊黑化的相互关系. 方法将斯氏按蚊分为吸糖水组、吸正常小白鼠血组、吸约氏疟原虫感染血组和吸硝喹糖水组,挤压法收集雌斯氏按蚊血淋巴,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度,继而对血淋巴进行SDS-PAGE,电转移后检测丝氨酸蛋白酶的表达差异. 结果 4 组斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶Western印迹均呈现两条带,分子质量分别约 160和150 ku,与吸糖水组比较,吸正常小白鼠血组丝氨酸蛋白酶表达稍高,而感染约氏疟原虫后斯氏按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶表达明显增强,感染第6 d达高峰,之后表达下调,而硝喹诱导黑化后丝氨酸蛋白酶表达水平呈逐日下调趋势. 结论斯氏按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶参与了疟原虫卵囊黑化包被反应.
-
β-淀粉样肽1-40致阿尔茨海默病大鼠模型N-甲基-D-天冬氨酸受体及亚型表达分析
目的:研究β-淀粉样肽1-40(Aβ1-40)致阿尔茨海默病(AD)大鼠模型前额叶N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体及亚型表达与学习记忆之间的关系.方法:SD大鼠对照组和实验组各12只,分别脑室内注射磷酸盐缓冲液(PBS)和Aβ1-40各10μl.Morris水迷宫检测其学习记忆能力,免疫荧光组织化学检测各组大脑前额叶内NMDA-NR1、NMDA-NR2B分布,Western印迹检测各组大脑前额叶内NMDA-NR1、NMDA-NR2B蛋白表达含量.结果:实验组参考记忆和工作记忆潜伏期明显低于正常组,大脑前额叶内NMDA-NR1、NMDA-NR2B免疫荧光表达量较弱,大脑前额叶内NMDA-NR1、NMDA-NR2B蛋白表达含量实验组低于正常组,其中NMDA-NR1差异明显(P<0.05).结论:Aβ1-40诱导的AD大鼠模型学习记忆功能降低,特别是工作记忆能力明显减弱,与大脑前额叶内NMDA受体表达降低有关,从而部分揭示了前额叶中NMDA受体在学习记忆功能中可能的参与作用.
-
非小细胞肺癌神经内分泌表达的检测及其临床意义
目的为研究非小细胞肺癌的神经内分泌分化状况及其对化疗疗效的影响。方法应用Western印迹法和免疫组织化学方法分别检测了42例非小细胞肺癌（鳞癌18例、腺癌17例、大细胞癌4例、肺泡细胞癌3例）组织中神经特异性烯醇化酶（NSE）、嗜铬粒素A（CgA）和突触素（SYN）的表达，并用电镜观察了上述病例的神经内分泌颗粒的超微结构。对35位患者进行了化疗反应的观察。结果 (1) Western印迹法在非小细胞肺癌（NSCLC）中检测NSE、CgA和SYN的阳性率分别为66.7%、19.0%和33.3%，均高于免疫组化的45.2%、9.5%和26.2%。(2) Western 印迹法和免疫组化的检测结果与肺癌的组织学类型和分化程度无明显关系。(3) 化疗有反应组的3种标记物在免疫组化和Western印迹检测中阳性率均高于化疗无反应组（P<0.05）。结论 NSCLC中存在较高比例的神经内分泌分化，其中NSE阳性率高，SYN次之，CgA的检出率则较低。Western印迹法和免疫组化对非小细胞肺癌中神经内分泌成分的诊断均有重要帮助，以Western印迹法更为敏感。神经内分泌分化可能是影响NSCLC对化疗反应的重要因素之一。
-
小鼠局灶性脑缺血模型中细胞间粘附分子-1表达升高
目的白细胞可以导致缺血细胞损伤,内皮细胞上表达的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)有利于白细胞迁移至组织.本研究目的是对小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)后脑内ICAM-1蛋白在组织中表达和含量进行检测.方法通过对成年雄性CD-1小鼠使用血管腔内尼龙线栓塞术,造成0、3、6、12、24、48和72 h的持续性大脑中动脉栓塞.缺血程度由激光多普勒流量仪确定,缺血脑组织ICAM-1的阳性表达由免疫组化技术检测,并用免疫沉淀和Western印迹来定量.结果在大脑中动脉栓塞后,小鼠缺血脑半球的表面脑血流量减少到基准值的9%～15%.各组间大脑中动脉栓塞过程中的脑血流量无显著差异.免疫组化技术显示,缺血中心区和末影区都见ICAM-1阳性的微血管内皮细胞,从缺血中心到缺血边缘区微血管内皮细胞表达ICAM-1出现增高的趋势.免疫沉淀和Western印迹分析结果表明,缺血区ICAM-1的表达在大脑中动脉栓塞后3 h增高,6～12 h达到高峰,并持续到72 h.结论研究表明,在持续性大脑中动脉栓塞的小鼠中检测到ICAM-1表达明显升高,因为在持续局灶性大脑中动脉缺血后ICAM-1可介导白细胞和内皮细胞粘附,加速白细胞的浸润,提示ICAM-1是造成缺血脑损伤和引起脑卒中病因中的重要因素之一.
-
副溶血弧菌VPA1405多克隆抗体制备及应用
目的 建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法.方法 将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(△opaR)中表达水平的差异.结果 成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白；Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符.结论 成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究.
-
CT抗原NY-ESO-1基因克隆、表达及纯化
目的:利用大肠杆菌表达人CT抗原NY-ESO-1,对表达产物进行Western印迹鉴定和纯化,为今后利用其进行肿瘤疫苗的研究奠定基础.方法:通过全基因拼接获得NY-ESO-1基因,构建重组表达载体NY-ESO-1-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导获得表达,利用单克隆抗体进行Western印迹鉴定,通过Ni柱亲和纯化获得纯化蛋白.结果与结论:拼接的NY-ESO-1全基因经测序证明与GenBank中人的NY-ESO-l全基因完全相符;构建的原核表达载体NY-ESO-1-pET28a(+)可稳定地可溶性表达NY-ESO-1蛋白;经Ni柱亲和纯化获得较好的纯化结果;利用鼠抗人单克隆抗体对表达的蛋白进行验证,结果显示阳性.本研究成功利用原核表达系统实现了对CT抗原NY-ESO-1的可溶性表达.
-
肿瘤相关抗原抗体联合检测在肺癌患者诊断中的意义
目的：探讨肿瘤相关抗原（TAA）抗体联合检测用于肺癌诊断的价值。方法收集98例肺癌患者的血清标本，用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行血清抗体的检测；用Western印迹对其中p62抗体阳性的血清标本进行验证；用不同组合的肿瘤相关抗原（TAA）对血清进行检测。结果肺癌和正常人血清中p62抗体的阳性率分别为15%和1%，8种抗原组合检测肺癌时大大提高了诊断的质量。结论8种TAA抗体联合检测肺癌，为肺癌高危人群的筛检和临床中肺癌的早期诊断提供了一种新方法。
-
肢带型肌营养不良和Miyoshi肌病dysferlin表达分析
目的 探讨dysferlinopathy的临床、病理及分子病理特征.方法 对45例临床病理诊断为肢带型肌营养不良(LGMD)和Miyoshi肌病(MM)患者的冰冻肌肉标本通过免疫组化染色(IHC)观察dysferlin、α-肌聚糖和肌营养不良蛋白(dystrophin)的表达,进一步用Western印迹分析法(WB)测定肌肉组织中dysferlin含量.结果 在39例LGMD和6例MM患者肌肉标本中发现5例dysferlin完全缺失,另有3例dysferlin表达量在正常对照值的15%以下,这8例患者符合dysferlinopathy的诊断,其中LGMD 3例,MM 5例.平均发病年龄为18.8岁,2例LGMD患者为同胞兄妹,1例MM患者的父母为姑表兄妹,提示本病属常染色体隐性遗传方式.血清CK585～21 280 IU/L,平均6240 IU/L,肌电图均显示肌源性损害,肌肉病理为典型肌营养不良改变,3例有炎细胞浸润.结论 dysferlinopathy临床和普通肌肉病理缺乏特异性,部分患者肌组织中伴有炎细胞浸润,容易误诊为炎症性肌病.应用免疫组化和蛋白印迹方法对dysferlin的表达进行分析是诊断本病以及与炎症性肌病鉴别的必要手段.
-
中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者病毒基因在大肠杆菌中的表达及其抗原性
目的研究不同民族慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV前S2/S(preS2/S)和C(core, C)基因在大肠杆菌Escherichia coli (E.coli)中表达的稳定性和水平,并对其抗原性进行鉴定,为创制新型疫苗提供抗原材料.方法从中国云南少数民族地区50例慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV基因组DNA,将聚合酶链反应(PCR)扩增-克隆-测序的HBV preS2/S和C基因插入到表达载体pλPR上,构建重组pλPR-S2S和pλPR-C表达质粒,并在大肠杆菌TOP10中表达.用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定表达产物非融合蛋白,并对其抗原性用Western印迹和ELISA方法进行检测.结果 SDS-PAGE检测到全部慢性乙型肝炎患者pλPR-S2S和pλPR-C重组质粒在大肠杆菌TOP10中存在稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白相对分子质量分别为31 000和21 000,非融合蛋白浓度约占16%,纯度达96%.Western印迹和ELISA分析,非融合蛋白能分别与HBV preS2/S抗原单抗、C抗原单抗及慢性乙型肝炎患者血清发生反应,而与对照的甲型肝炎(HAV)患者血清、丙型肝炎(HCV)患者血清及正常血清之间无交叉反应.结论中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者HBV preS2/S和C基因在大肠杆菌TOP10中有稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白具有抗原性.这些发现为创制新型疫苗具有潜在应用价值.
-
G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的差异
目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化.方法:用免疫印迹(Western blot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化.结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中带;而MⅡ期表现为中、下带.结论:可以用电泳迁移率的变化作为观察p34cdc2磷酸化状态的一种方法.
-
Western印迹检测人肾细胞癌中NF-KB信号通路分子蛋白的表达水平
目的 应用Western印迹方法检测人肾细胞癌组织及癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白表达,探究NF-κB信号通路与人肾细胞癌之间的可能关系.方法 手术获得3对人肾细胞癌组织标本以及相应的癌旁组织标本,利用Western印迹方法检测人肾细胞组织以及相应癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白p-IκB、NF-κB P65以及NF-κB P50表达水平.结果 与相应癌旁组织比较,人肾细胞癌组织中NF-κB信号通路蛋白IκBa表达水平明显下降,而NF-κB信号通路蛋白NF-κB P65和NF-κB P50表达水平明显升高.结论人肾细胞癌的发生可能与NF-κB信号通路存在一定的相关性.
-
CyclinD1、细胞分裂周期蛋白C25B与胃癌的相关性
目的 研究细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞分裂周期蛋白(CDC)25B与胃癌的相关性.方法 收集胃癌及对应正常胃黏膜标本各42例,应用Western印迹及RT-PCR方法检测CyclinD1,CDC25B在各组的表达情况,并结合临床资料进行分析.结果 CyclinD1,CDC25B mRNA及蛋白在正常胃黏膜组织中的相对表达量均显著低于胃癌组织(P<0.05),且其表达在淋巴结转移阳性组均显著增高(P<0.05).结论 CyclinD1,CDC25B在胃癌中高表达,可能与胃癌的发生、发展及浸润转移有关.
-
乳腺浸润性导管癌组织中p-AKT的表达
目的 探讨人乳腺浸润性导管癌组织内p-AKT的功能和作用.方法 对100例乳腺浸润性导管癌组织和30例正常乳腺组织内p-AKT蛋白及mRNA的表达情况进行Western印迹和RT-PCR检测.结果 乳腺浸润性导管癌组织和正常乳腺组织中p-AKT蛋白及mRNA的表达有显著差异(P<0.05);p-AKT蛋白及mRNA在乳腺癌不同临床分期中表达存在统计学差异(P<0.05).结论 p-AKT的表达与乳腺浸润性导管癌的发生及临床病理相关,可作为一个新的评价乳腺癌预后的指标.
-
CAV1基因在五种白血病细胞中的表达
目的 检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者原代肿瘤细胞、SUP-B15细胞、HL-60细胞、K562细胞、THP-1细胞中CAV1的表达情况.方法 收集五种肿瘤细胞及正常人白细胞(WBC),使用QRT-PCR、Western印迹法方法分别检测各组细胞中CAV1 mRNA的相对含量及CAV1蛋白表达情况.结果 与WBC相比,各肿瘤细胞中CAV1 mRNA均为低表达,表达量由低到高依次为HL-60(0.097±0.02) 、CLL(0.1 ±0.02)、THP-1(0.101±0.02)、K562(0.127±0.04) 、SUP-B15(0.311土0.07)；与WBC相比,各肿瘤细胞中CAV1蛋白表达均下调.结论 与正常人WBC相比,CLL原代肿瘤细胞、HL-60、THP-1、K562、SUP-B15细胞中CAV1 mRNA及蛋白表达均降低,CAV1表达的异常可能出现在转录之前.
-
Fas途径调控芬太尼与5－氟尿嘧啶联合诱导MCF－7乳腺癌细胞凋亡
目的：探讨芬太尼与5－氟尿嘧啶（5－FU）联合应用对人乳头癌细胞株（MCF－7）乳腺癌细胞凋亡的影响及Fas途径的调控机制。方法作用48 h后通过流式细胞技术（ FCM）检测细胞凋亡检测试剂盒／碘化丙啶（ Annexin V－EGFP／PI）染色的细胞凋亡情况，通过 Western 印迹检测Fas、半胱氨酸蛋白酶（ Caspase）－8表达情况。结果1μmol／L 及10μmol／L 浓度的芬太尼单独应用均引起凋亡率增加， Fas、Caspase－8表达增强（ P＜0．05，P＜0．01）；5－FU单独应用后凋亡率亦明显增加，Fas、Caspase－8表达增强（ P＜0．01）；三种浓度芬太尼与5－FU联合应用均具有协同作用（ P＜0．01）。 Caspase－8与Fas表达变化呈显著正相关（ r＝0．877，P＜0．01）。结论一定浓度的芬太尼、5－FU及联合应用48 h对MCF－7乳腺癌细胞有促进凋亡作用，并显著上调Fas表达和Caspase－8活性，两药联合应用启动外源性凋亡途径具有协同作用。
-
甲状腺乳头状癌中HiWi基因mRNA和蛋白表达及其相关性
目的：探讨甲状腺乳头状癌（ PTC）组织和正常组织中Hiwi基因mRNA和蛋白表达及其相关性。方法采用逆转录-多聚酶链反应（ RT-PCR）和Western印迹技术，检测50例PTC及其对应癌旁组织中Hiwi基因中mRNA及蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示Hiwi mRNA在PTC中的表达量相对值（0.92±0.02）高于正常甲状腺组织中的表达量（0.31±0.03）（P＜0.05）。 Western印迹结果显示Hiwi蛋白在 PTC中的积分光密度值（1982.00±137.63）明显高于正常组织中的积分光密度值（1982.01±125.32）（P＜0.05）。结论 Hiwi mRNA 及其蛋白在PTC 表达均高于非癌上皮组织（ NCE），Hiwi基因的表达异常在PTC的发生、发展中起着重要的作用。
