首页 > 文献资料
-
不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对卵泡刺激素/缺氧诱导因子-1信号通路的影响
目的 研究不同日龄小鼠颗粒细胞对卵泡刺激素(FSH)诱导的缺氧诱导因子-1/血管内皮细胞生长因子(HIF-1/VEGF)信号通路的影响.方法 超排卵方法取出卵母细胞和颗粒细胞,进行体外受精;荧光素酶报告基因实验检测常氧和低氧培养条件下,不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/ VEGF信号通路的应答;蛋白质免疫印迹技术检测FSH受体的表达水平.结果 雌性小鼠超排卵数和卵母细胞体外受精能力与小鼠日龄数呈负相关;FSH上调小鼠卵丘颗粒细胞HIF-1α的转录活性;免疫印迹结果显示小鼠颗粒细胞中FSH受体的表达水平随着日龄数的增加呈下降趋势.结论 小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/VEGF信号通路的应答反应随小鼠天日龄数增加而下降,与颗粒细胞表面FSH受体的表达下降相一致.雌性小鼠随着年龄增加引起的生殖能力下降可能与颗粒细胞表面FSH受体表达减少有关.
-
参麦对大鼠急性心肌缺血血管内皮生长因子表达的影响
目的：观察参麦对大鼠急性心肌缺血血管内皮生长因子表达的影响，探讨其作用机制。方法：大鼠40只，采用结扎左侧冠状动脉前降支30 min 后松解扎扣再灌注60 min，反复3次以造成心肌缺血再灌注损伤模型，并随机分为对照组、模型组、美托洛尔组及参麦小大剂量组。五组大鼠均经腹腔注射给药，于治疗前及30 d 后分别采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学检测心肌 VEGF 和缺氧诱导因子-1a（HIF-1a）HIF-la 表达情况、受体胎肝激酶1（FLK-1），籍此考察参麦对大鼠急性心肌缺血血管内皮生长因子表达的影响。结果：参麦明显增高 VEGF 蛋白质及 mRNA、HIF-1a、FLK-1的表达，缩小心肌缺血面积，与模型组比较（P ＜0．05），差异均有统计学意义，参麦小、大剂量组间差异无统计学意义。结论：参麦可减轻大鼠急性心肌缺血缺氧性损伤和血管内皮炎症反应程度，其作用机制可能是其促进大鼠缺血心肌血管内皮再生有关，对改善再灌注损伤血管内皮功能紊乱有一定的防治作用。
-
高氧暴露早产鼠视网膜HIF-1α、PEDF及VEGF的表达
目的:缺氧诱导因子1α、色素上皮衍生因子和血管内皮生长因子在高氧暴露早产鼠视网膜的表达规律.方法:标准SD大鼠的3日龄早产鼠随机分为高氧组、高氧返回组和空气组,免疫组织化学法检测各组早产鼠视网膜HIF-1和VEGF表达水平.结果:1)高氧组HIF-1α、VEGF比空气组表达增加(p＜0.05);高氧返回组HIF-1α、VEGF表达进一步增强,显著高于高氧组(p＜0.05),突破内界膜的内皮细胞核数亦明显多于高氧组(p＜0.001);空气组有PEDF阳性表达,高氧组表达明显增强,均高于空气组和高氧返回组(p＜0.05).2)HIF-1α的表达与VEGF、新生血管数的表达成正相关(r分别为0.56和0.64,P＜均0.01),PEDF的表达与VEGF的表达、新生血管数呈负相关(r分别为-0.43和-0.58,P分别＜均0.05,0.01).结论:高氧暴露后HIF-1α和VEGF的高表达是早产儿视网膜病血管异常增生的重要原因,VEGF和PEDF的表达失衡可能与早产儿视网膜病的发生密切相关.
-
缺氧诱导因子-1抑制剂细胞筛选模型的建立及抑制剂研究
目的:建立并应用2种缺氧诱导因子-1( HIF-1)抑制剂细胞筛选模型对雷公藤甲素和三白脂素-8活性进行评价,为HIF-1靶点抑制剂的研发提供基础.方法:建立基于报告基因的HIF-1抑制剂细胞筛选模型,U251 -HRE和T47D-HRE细胞模型,分别对雷公藤甲素与三白脂素-8活性进行检测,观察其对下游关键调控基因VEGF表达的影响,并用MTT法比较2类抑制剂对多种实体瘤细胞的增殖抑制活性.结果:2种细胞模型在1％ O2缺氧20 h,由HIF-1诱导的荧光素酶高表达,可用于抑制剂的活性评价.雷公藤甲素对U251 -HRE细胞模型敏感,其HIF-1抑制活性IC50(3.4±0.5)×10-8 mol· L-1,而三白脂素-8对T47D-HRE细胞模型敏感,其IC50 (2.4±0.6)×10-8 mol·L-1；雷公藤甲素和三白脂素-8在1×10-7mol·L-1都可对T47D细胞因缺氧所致的VEGF表达升高产生明显抑制作用,其抑制率分别为85.2％,62.6％；雷公藤甲素对所测肿瘤细胞株都有明显的增殖抑制活性,而三白脂素-8对乳腺癌、胰腺癌细胞株较为敏感.结论:针对不同类别的HIF-1抑制剂建立相应敏感的特异性细胞筛选模型至关重要.
-
蝎毒多肽提取物联合5-氟尿嘧啶对H22肝癌血管生成拟态形成的作用及机制研究
目的 观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对小鼠H22肝癌移植瘤血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的抑制作用并探讨其可能的作用机制.方法 60只昆明小鼠,皮下接种H22肝癌细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组)、联合组(PESV +5-Fu),每组20只,连续干预14天,隔日测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积增殖曲线,并计算抑瘤率；HE染色法观察肿瘤组织的形态学改变；免疫组织化学法和过碘酸雪夫氏染色(PAS)双标法检测各组肿瘤组织VM密度；免疫组织化学法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible fac-tor-1α,HIF-1α)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的蛋白表达水平,用LeicaQw-inV3图像分析软件进行灰度值半定量分析.结果 联合组和5-Fu组H22肝癌移植瘤的生长较荷瘤对照组均受到明显抑制(P＜0.05),且联合组和5-Fu组瘤重和肿瘤体积亦存在显著差异(P＜0.05)；免疫组织化学法和PAS双标法检测显示,联合组VM密度明显低于荷瘤对照组和5-Fu组(P＜0.01)；与荷瘤对照组比较,联合组HIF-1α和MMP-2的蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01).结论 PESV联合5-Fu可抑制小鼠H22肝癌移植瘤VM形成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中HIF-1α和MMP-2的表达有关.
-
缺氧预适应小鼠中一氧化氮合酶与缺氧诱导因子-1的表达
目的探讨缺氧预适应小鼠海马组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和缺氧诱导因子-1α的表达. 方法 HeLa细胞分为:不缺氧(H0组)、缺氧1 h(H1组)和缺氧4 h组(H4组);小鼠分为3组:不缺氧(M0组)、急性缺氧1次(M1组)和重复缺氧4次组(M4组),SDS-PAGE和Western印迹法检测HIF-1α和eNOS的表达. 结果 H0组HeLa细胞中未见HIF-1α,H1组出现少量HIF-1α,H4组HIF-1α有所增加.M0组小鼠海马中几乎检测不到HIF-1α,可见eNOS;M1组可检测到较少的HIF-1α,eNOS无明显变化;M4组HIF-1α和eNOS水平均增高. 结论慢性缺氧HeLa细胞中出现HIF-1α,可作为检测HIF-1α的阳性对照;随着小鼠缺氧次数的增加,HIF-1α和eNOS的水平均升高,提示它们可能参与预适应的保护作用.
-
细胞内低氧感受器:缺氧诱导因子-1脯氨酰羟化酶研究进展
哺乳动物细胞对低氧的适应性调节是通过改变一系列基因表达来实现的.调控这些基因表达重要的转录因子是缺氧诱导因子-1(HIF-1),而能够直接感受氧分压、作为氧感受器的一种双加氧酶--脯氨酰羟化酶(PHD)则是调节HIF-1的关键分子.常氧状况下,HIF-1α的两个关键氨基酸残基Pro402和Pro564被PHD羟基化进而被蛋白酶水解,此时细胞内无HIF-1聚集,形成一种氧分压正常的信号状态.低氧状况下,PHD羟基化HIF-1α反应受阻,HIF-1聚集并入核诱导多种靶基因表达,启动低氧应答反应.本文就PHDs家族如何调控HIF-1α及PHD的调节剂研究进展进行综述.
-
低氧预处理与高氧预处理在脊髓损伤后神经保护作用的相关研究进展
重复急性间歇性低氧能够增加运动神经元中生长因子与营养因子的表达,在突触可塑性和神经保护中改变关键分子的表达.低氧预处理能有效提高干细胞移植后的存活率,并对神经功能具有保护作用.间歇性低氧也是急性脊髓损伤后增强呼吸运动的方法之一.高压氧预处理能增强中枢神经对缺氧及缺血的耐受性,有效保护细胞、组织结构,缩短神经细胞的再生周期,促进神经纤维再生.有必要进一步探讨低氧及高氧预处理在脊髓损伤中的作用机制.
-
MRI评估脑胶质瘤血管生成的应用及相关研究
脑胶质瘤是成人常见的中枢神经系统原发性肿瘤.血管生成是脑胶质瘤生长和增殖中非常重要的过程,是肿瘤细胞、血管内皮细胞及体内微环境相互作用的结果,多种血管因子在不同的通路参与调节肿瘤血管的生成,VEGF在血管生成过程中起重要的作用.MRI可作为活体检测脑胶质瘤血管生成的重要工具,即可评估肿瘤血管发生又可监测治疗反应.因此,科研及临床治疗关注于揭示肿瘤血管生成的机制,探讨检测及抑制肿瘤血管生成及抑制肿瘤生长的有效措施.
-
HIF-1的调控及抗肿瘤相关基因治疗
缺氧诱导因子-1 (hypoxia-inducible factor,HIF-1)是细胞缺氧状态下的关键调控蛋白,作为调节肿瘤细胞缺氧适应、细胞活性、肿瘤血管形成、肿瘤侵袭性和恶性程度的中枢.控制HIF-1的活性及其下游基因的表达,有望成为抗肿瘤治疗的有效途径.本文就HIF-1的结构、表达的调控、相关基因治疗作一综述.
-
缺氧在肿瘤发病机制中的研究进展
在实体瘤中，由于肿瘤细胞增殖迅速，且肿瘤血管存在结构和功能性的异常，实体瘤内常存在缺氧区域。缺氧反应中重要的调控因子是缺氧诱导因子，其能通过转录激活多种下游靶基因，在肿瘤的发病机制中发挥重要作用。缺氧不仅促进肿瘤细胞改变代谢以增强存活能力，还能促进肿瘤生成血管、转移、扩散以及治疗抵抗等，以增强肿瘤的侵袭特性。因此，针对肿瘤缺氧的治疗是未来肿瘤治疗极具吸引力的靶点之一。
-
缺氧诱导因子-1分子组成、活化机制及肝癌靶向治疗
肝癌是世界常见恶性肿瘤之一,其发生是多中心,多病因和多基因参与的复合过程.其目前的治疗仍以手术切除为主,而肝癌确诊时大多已属中晚期,治疗效果很差.因此开发新的分子标志物早期诊断肝癌和寻找新的基因治疗靶点成为肝癌研究的热点.缺氧诱导因子-1(HIF-1)参与肝癌发生、发展、转移及术后复发的多个环节,对肝癌的早期诊断和分子靶向治疗具有潜在的应用前景.本文就HIF-1的分子组成、活化机制以及与肝癌靶向治疗相关进展作一综述.
-
缺氧诱导因子-1α表达与胰腺癌病理学特征及新生血管生成的关系
目的研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与胰腺癌病理学特征的关系,以及HIF-1α表达与血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤微血管密度(MVD)之间的相互关系.方法应用免疫组织化学方法检测47例胰腺癌和10例正常胰腺组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达.同时用CD34单克隆抗体标记胰腺癌和正常胰腺组织中的微血管.结果HIF-1α和VEGF蛋白在47例胰腺癌组织中的阳性表达率分别为55.3%(26/47)和61.7%(29/47),而在10例正常胰腺组织中均未见表达.胰腺癌组织MVD为37.61±14.3,正常胰腺组织为7.55±2.4,二者间有显著性差别(t'=13.51,P＜0.001).HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率及MVD均与胰腺癌的浸润和转移密切相关(χ2=4.32,6.01,4.75,4.62;t=2.38,3.92;P＜0.05),而与胰腺肿块大小、组织学分级和患者术后1年生存率无关(P＞0.05).HIF-1α与VEGF(r=0.329,x2=5.71;P＜0.05)、HIF-1α与MVD(r=0.594,t=4.96;P＜0.001)及VEGF与MVD(r=0.366,t=2.64;P＜0.05)间在胰腺癌组织中的表达均呈显著的正相关性.结论在缺氧状态下,胰腺癌组织中HTF-1α基因被激活,过量表达HIF-1α蛋白,并通过诱导VEGF的生成而刺激肿瘤新生血管的生成,促进癌细胞的浸润和转移.
-
肝肺综合征患者HIF-1α和MPO水平与门脉高压血流动力学的研究
目的 探讨彩色多普勒超声并对比增强超声心动图(CEE)评价肝肺综合征(HPS)肺内分流发生与血浆缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和髓过氧化物酶(MPO)以及门脉血流动力学变化的相互关系.方法 利用彩色多普勒超声检测各组门静脉内径及血流速度,用CEE检测各组肺内分流,应用ELISA法分别检测健康者及伴与不伴HPS肝硬化患者的血浆HIF-1α和MPO浓度,对比各组血浆HIF-1α和MPO水平以及门脉血流动力学的变化与肺内分流程度的关系.结果 HPS组患者血浆HIF-1α和MPO浓度高于非HPS组,且门静脉内径增宽、血流速度减慢,两组结果比较差异有统计学意义(P<0.05),并与肺内分流程度呈正相关.结论 彩色多普勒超声及CEE可以简便、敏感的反映血浆HIF-1α和MPO水平以及门静脉血流动力学异常在HPS发生中起一定作用,并可提示亚临床早期肺内血管异常.
-
慢性间歇低氧大鼠脑组织内缺氧诱导因子-1α和诱导型一氧化氮合酶的表达
目的 观察慢性间歇低氧状态下大鼠脑内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,结合HIF-1转录活性的测定,研究以HIF-1为核心的神经系统缺氧应答反应的分子机制.方法 3组雄性Wistar大鼠,每组8只,分别在常氧、慢性低氧及间歇低氧状态下30d,免疫组织化学和Westernblot检测HIF-1α和iNOS,逆转录PCR检测二者mRNA的表达,电泳迁移率分析(EMSA)测定HIF-1的DNA结合活性.结果 Westernblot检测结果显示3组iNOS灰度值分别为508±77、1118±106和1937±119,HIF-1α灰度值分别为673±82、1325±139和2088±130,间歇低氧组HIF-1α和iNOS的含量增加为明显(F=394.5,362.6,P<0.01);间歇低氧组iNOSmRNA增加为显著,但HIF-1αmRNA无明显增加;间歇低氧组HIF-1的DNA结合活性较常氧对照组明显升高.结论 间歇低氧更易诱导HIF-1α和iNOS的表达;HIF-1可能是间歇低氧状态下促进iNOS转录的主要调控因子;HIF-1通过增强的转录活性来促进iNOS的转录合成.
关键词： 低氧 缺氧诱导因子-1 诱导型一氧化氮合酶 睡眠呼吸暂停低通气综合征 -
老年原发性肺癌患者缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1的表达及临床意义
目的 探讨缺氧诱导因子-1(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在低氧培养条件下肺腺癌细胞株A549及老年人原发性肺癌组织中的表达及临床意义. 方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测氯化钴诱导缺氧下肺腺癌细胞A549的生长活性.分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)、免疫组化法测定缺氧不同时间下A549细胞及60例老年人原发性肺癌组织和26例老年人良性疾病(非癌组)组织中HIF-1α和GLUT-1的mRNA和蛋白表达,并分析HIF-1α、GLUT-1与临床病理特点之间的关系. 结果 肺腺癌细胞在缺氧下增殖能力较正常时增强.RT-PCR结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA的表达分别为0.69±0.08、0.65±0.09,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA表达分别为0.99±0.16、0.83±0.11,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.47±0.11、0.40±0.08(t值分别为3.81、4.97、6.35、7.89,P＜0.01);Western blot结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为1.57±0.29、1.66±0.28,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为2.31±0.46、2.22±0.34,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.93±0.07、1.06±0.17(t值分别为3.67、3.21、5.19、5.37,P＜0.01).肺癌组织中HIF-1α、GLUT-1的mRNA和蛋白阳性表达率明显高于非癌组(X2值分别为25.31、31.12、20.26、28.70,P＜0.01).有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者,中晚期(Ⅲ+Ⅳ期)肺癌组织中的表达高于早期(Ⅰ+Ⅱ期),差异有统计学意义(t值分别为2.56、2.19、3.46、2.15,X2值分别为5.14、4.15、7.54、5.57,P＜0.05).HIF-1α与GLUT-1的mRNA和蛋白表达呈正相关(r=0.527与r=0.408,P＜0.01). 结论 氯化钻诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1在肺腺癌细胞中的表达,加速肺癌细胞的生长,使之进一步耐受缺氧.HIF-1α、GLUT-1在老年人原发性肺癌组织中的过表达与肺癌的恶性进展有密切关系,联合两者的检测有助于老年人原发性肺癌的诊断及预后评估.
-
银杏内酯、刺五加皂甙对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺血缺氧的作用
目的:观察银杏内酯(ginkgolides,Gin)、刺五加皂甙(acanthopannx senticosus saponins,ASS)对脊髓运动神经元缺血缺氧有无保护作用,并探讨其可能的机制.方法:无菌下取出孕15d SD大鼠的胚鼠,分离胚鼠脊髓运动神经元进行原代分离培养,免疫组化鉴定后建立缺血缺氧诱导的神经元凋亡模型.取运动神经元培养在24孔板中,分为对照组(无缺氧损伤)、缺氧诱导组、Gin保护组、ASS保护组、神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)保护组,每组10孔.其中保护组分别于缺氧前24h每孔加入Gin 37.5μg/ml,ASS 50μg/ml,GDNF 0.1μg/ml(每孔800μl),缺氧后继续培养3d.倒置显微镜及电镜下观察细胞形态学变化,MTT法测定神经元细胞活性,检测细胞外液LDH释放量,提取细胞匀浆液,Western印渍法检测运动神经元HIF-1α的表达.结果:神经元的细胞活性Gin组(0.25±0.059)、ASS组(0.21±0.028)和GDNF组(0.20±0.026)均比缺氧诱导组(0.15±0.012)高(P＜0.01),且Gin组效果优于ASS组(P＜0.05),GDNF作用与ASS相仿(P＞0.05);LDH释放量Gin组(22.8±1.645)、ASS组(28.6±1.309)和GDNF组(26.5±0.885)均比缺氧诱导组(40.7±1.885)低(P＜0.01);神经元HIF-1α的相对表达量缺氧诱导组(0.72±0.027)比对照组(0.16±0.003)高(P＜0.01),Gin组(1.28±0.019)、ASS组(1.15±0.016)和GDNF组(1.12±0.016)均高于缺氧诱导组及对照组(P＜0.01).结论:Gin、ASS和GDNF均可提高体外缺血缺氧损伤的脊髓运动神经元的细胞活性,对细胞的缺血缺氧损伤有明显的保护作用,Gin的保护作用强于ASS,ASS的保护作用与GDNF相仿;其保护作用的发挥,可能与增强细胞膜的稳定性及提高细胞HIF-1α的表达有关.
-
低氧条件下缺氧诱导因子-1对胎鼠心肌细胞内钙离子转运的影响
目的 观察低氧条件下缺氧诱导因子-1(HIF-1)对胎鼠心肌细胞内钙离子(Ca2+)转运的影响,探索胎儿心肌保护新方法.方法 取胎龄14~18 d Sprague-Dawley(SD)大鼠胎鼠的心肌细胞置于含5%CO2,3%O2和92%N2的三气培养箱在37℃下培养24 h,分3组进行干预:对照组;HIF-1激动剂(DMOG)100μM(DMOG组);HIF-1抑制剂(Acriflavine)10μM(Acriflavine组).共同作用24 h后,分别进行实时荧光定量PCR(real time-PCR,RT-PCR)和免疫印迹分析(Western-blot)检测胎鼠心肌细胞HIF-1α、L型Ca2+通道(LCa)、T型Ca2+通道(TCa)、钠钙交换蛋白(NCX)、Ryanodine受体和肌质网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)mRNA表达及蛋白水平.在激光共聚焦显微镜下观察心肌细胞内Ca2+浓度的变化.结果 RT-PCR结果显示HIF-1α的mRNA表达量DMOG组较对照组显著升高,Acriflavine组较对照组和DMOG组显著降低,TCa的mRNA表达量DMOG组较Acriflavine组显著升高、NCX的mRNA表达量DMOG组较对照组显著升高,Acriflavine组较对照组和DMOG组显著降低,Rynaodine受体的mRNA表达量Acriflavine组较对照组显著降低,DMOG组较Acriflavine组显著升高,SERCA2α的mRNA表达量Acriflavine组较对照组和DMOG组显著升高(P<0.05,n=5);Western-blot结果显示HIF-1α的蛋白表达量DMOG组较对照组及Acriflavine组均显著升高,LCa的蛋白表达量DMOG组较对照组及Acriflavine组显著升高(P<0.05,n=5).激光共聚焦显微镜下测定钙荧光量,DMOG组较对照组及Acriflavine组显著增加(P<0.001,n=12).结论 在低氧条件下,DMOG过度激活HIF-1,使胎鼠心肌细胞内Ca2+超载明显,Acriflavine抑制HIF-1活性,减轻胎鼠心肌细胞Ca2+超载,增强心肌细胞调节Ca2+的能力,对未成熟心肌起保护作用.
-
缺氧诱导因子-1在急性胰腺炎发生发展中的作用
胰腺腺泡细胞死亡方式是决定急性胰腺炎(AP)病程及预后的重要因素.AP病情轻重与腺泡坏死呈正相关,与腺泡凋亡呈负相关.细胞的三磷酸腺苷(ATP)含量是调控其死亡方式的关键,在多种病理生理过程中扮演了坏死-凋亡转化开关的角色.低水平ATP可加速细胞坏死,高水平ATP则促进其凋亡.缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧条件下高表达的转录因子,可有效调节细胞能量代谢模式,在细胞死亡及炎症损伤调控中发挥了重要作用.本文对HIF-1在AP中的研究进展做一综述,以期为AP发病机制的深入理解和新的治疗靶点的提出提供参考.
-
siRNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对胰腺癌细胞TLR4表达的影响
目的 观察体外乏氧培养条件下胰腺癌细胞系Panc-1中HIF-1α和TLR4的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对胰腺癌细胞TLR4的调控作用.方法 低氧箱培养和CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,RT-PCR、免疫荧光法和流式细胞法分别检测缺氧状态下HIF-1α和TLR4在mRNA和蛋白水平的表达.采用化学合成小干扰RNA( siRNA)介导的RNA干扰技术(RNAi)用siRNA转染Panc-1细胞.观察转染后HIF-1α沉默效果.结果 低氧条件下,Panc-1细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而TLR4 mRNA和蛋白的表达均显著升高.siRNA转染Panc-1后能够显著下调HIF-1α的基因表达,同时TLR4基因的表达上调也受到明显抑制.结论 缺氧促使胰腺癌Panc-1细胞TLR4在蛋白水平表达升高,TLR4信号通路可能和HIF-1α信号通路存在相互联系,并且共同促进了胰腺癌的恶性进展.
