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慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响
本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响.构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达.采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况.采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL_60细胞的增殖活性和凋亡情况.结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中.重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90％.Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高.CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P＜0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用.
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青藤碱抗肝癌作用机制研究
目的:探讨青藤碱对HepG2人肝癌细胞株的增生和转移能力的多靶向作用机制.方法:运用噻唑蓝还原法(MTT)来检测青藤碱对HepG2人肝癌细胞株的抗增殖作用,而同时运用Transwell 法来检测药物对于细胞转移能力的作用变化;间接荧光标记法测定经过不同浓度的青藤碱作用后,细胞内活性氧水平的变化;利用酶抑制动力学方法,研究青藤碱对逆转录酶的抑制作用;再通过逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹的实验来检测HepG2细胞中凋亡蛋白水平的变化.结果:青藤碱对HepG2人肝癌细胞株具有抗侵袭及转移的治疗作用.MTT检测结果显示青藤碱对于HepG2人肝癌细胞抗增殖作用明显,半抑制浓度IC50为(15.35±2.43)μmol/L;而Transwell法的结果显示青藤碱对癌细胞有较好的抗转移能力;青藤碱是一种有效的逆转录酶抑制剂,IC50为(21.32±2.43)μmol/L;荧光标记法检测细胞内活性氧水平随青藤碱呈浓度依赖性升高;蛋白水平测定显示青藤碱上调HepG2人肝癌细胞CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达. 结论:青藤碱可能是通过上调CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达,进而抑制人肝癌细胞的增殖和转移,调节相关信号通路,终在分子水平证明青藤碱对HepG2人肝癌细胞的抑制作用.
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CAV1基因在五种白血病细胞中的表达
目的 检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者原代肿瘤细胞、SUP-B15细胞、HL-60细胞、K562细胞、THP-1细胞中CAV1的表达情况.方法 收集五种肿瘤细胞及正常人白细胞(WBC),使用QRT-PCR、Western印迹法方法分别检测各组细胞中CAV1 mRNA的相对含量及CAV1蛋白表达情况.结果 与WBC相比,各肿瘤细胞中CAV1 mRNA均为低表达,表达量由低到高依次为HL-60(0.097±0.02) 、CLL(0.1 ±0.02)、THP-1(0.101±0.02)、K562(0.127±0.04) 、SUP-B15(0.311土0.07)；与WBC相比,各肿瘤细胞中CAV1蛋白表达均下调.结论 与正常人WBC相比,CLL原代肿瘤细胞、HL-60、THP-1、K562、SUP-B15细胞中CAV1 mRNA及蛋白表达均降低,CAV1表达的异常可能出现在转录之前.
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子痫前期患者血清可通过sFlt-1-CAV1途径增加肾小球内皮细胞通透性
目的:探讨子痫前期(PE)血清中可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)对肾小球内皮细胞(HRGECs)通透性的影响机制.方法:收集20例PE与正常孕妇外周血清,ELISA法检测孕妇外周血中sFlt-1含量.利用PE血清及重组sFlt-1(rsFlt-1)蛋白处理HRGECs,细胞接种于transwell小室,体外细胞培养分组:正常孕妇血清处理组(NG组),PE血清处理组(PE组),正常孕妇血清+rsFlt-1处理组,PE+sFlt-1抑制剂处理组,PE血清+CAV1抑制剂处理组.Evens-blue检测HRGECs对大分子蛋白通透性改变;Western blot法检测caveolin-1(CAV1)蛋白表达.结果:PE血清sFlt-1含量明显高于正常对照组;PE血清、rsFlt-1可使HRGECs对大分子蛋白通透性及CAV1蛋白表达增加.sFlt-1抑制剂、CAV1抑制剂可抑制PE血清、rsFlt-1导致的HRGECs对大分子蛋白通透性增加.结论:PE患者血清可通过sFlt-1-CAV1信号通路增加肾小球内皮细胞对大分子蛋白的通透性,CAV1表达异常可能参与蛋白尿的产生.
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金钗石斛菲醌对人卵巢癌细胞增殖和转移的抑制作用
目的:观察金钗石斛菲醌对人卵巢浆液性囊腺癌细胞系HO-8910PM的增生和转移能力的影响,检测其对卵巢癌增生和转移相关基因CASP3,CASP9,CAV-1和SOX2的分子水平表达,从而研究金钗石斛菲醌在细胞和分子水平对卵巢癌的治疗作用以及其相关分子机制.方法:运用噻唑蓝还原法(MMT)方法来检测金钗石斛菲醌对人卵巢癌细胞HO-8910PM的抗增殖作用,而同时运用Transwell法来检测药物对于细胞的转移能力的作用变化.再通过逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹的实验来检测HO-8910PM细胞中凋亡与转移相关基因的表达变化以及蛋白水平的变化.结果:实验结果证明金钗石斛菲醌对人卵巢癌细胞具有抗侵袭以及转移的治疗作用.MTT检测结果显示金钗石斛菲醌在3μmol/L和10 μmol/L对于卵巢癌细胞的抑增殖作用显著,而transwell法的结果也表明了其在3μmol/L和10μmol/L对癌细胞的抗转移能力.其治疗效果与阳性顺铂10 μmol/L治疗组在统计学意义上相近.而mRNA,蛋白水平测定,表明金钗石斛菲醌在3μmol/L对人卵巢癌细胞通过上调CASP3,CASP9,CAV1和下调SOX2的表达,从而调节相关信号通路,终在分子水平证明金钗石斛菲醌对人卵巢癌细胞增殖和转移的抑制作用.结论:金钗石斛菲醌通过上调CASP3,CASP9,CAV1和下调SOX2的表达,进而抑制人卵巢癌细胞的增殖和转移.
