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T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇全抗原的合成及鉴定
目的 分别合成T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的全抗原.方法 采用琥珀酸酐法对分子结构进行修饰,产生易反应的官能团,并与载体蛋白偶联,从而具备免疫条件,用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪MALDI-TOF检测偶联物及偶联蛋白的分子量,用商品化的T-2和DON免疫试剂盒与偶联物进行棋盘滴定验证.结果 T-2和DON的全抗原及BSA的分子量分别为67641.6、66680.4、66297.7,偶联物与免疫试剂盒中T-2和DON的抗体均呈阳性反应.结论 合成的T-2、DON全抗原为相应抗体的制备和免疫学方法的建立奠定了基础.
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人巨细胞病毒UL57基因原核表达克隆的构建、表达及初步纯化
现有的IgM血清学试验对HCMV的诊断存在敏感性和特异性较差问题,其主要原因是迄今采用的抗原仍为从纯化的病毒颗粒中提取的病毒抗原性物质或粗提的病毒全抗原成分。近几年来人们致力于探讨能替代HCMV全病毒抗原的基因工程抗原,以完善IgM特异性血清学试验。本文通过构建HCMV DNA结合蛋白的一段基因的原核表达克隆,从而对表达产物的抗原性进行初步分析。 通过Oligosis软件设计UL57基因(aa540~604)两端引物,并在引物的5′端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ内切酶识别序列及保护位点。引物序列如下:P1:CTGGGATCCCCCAAAGGTGACGAC P2:GTGAATTCTCAGCGATTGAGGA。从感染的人胚肺成纤维细胞中提取和纯化HCMVAD169基因组,以纯化的核酸为模板,加入PCR反应体系进行UL57基因的扩增。
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梅毒螺旋体基因重组抗原酶联免疫吸附实验的探讨
梅毒是由苍白螺旋体(T.pallidum)感染引起的一种严重危害人类健康的性传染性疾病.血清学非特异性试验是目前诊断梅毒的主要方法,例如快速血浆反应素实验(RPR),不加热血清反应素实验(USR);应用梅毒螺旋体抗原检测梅毒患者体内的特异性抗体,已被用于确诊梅毒感染,例如荧光螺旋体抗体吸收试验(FAT-ABS),梅毒螺旋体血凝实验(TPHA)等,但使用的均为全抗原,由于可能存在的非特异性交叉反应,使上述方法受到一定的限制.
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树突状细胞介导的T细胞抗多发性骨髓瘤细胞活性的研究
多发性骨髓瘤(MM)是B细胞来源的恶性肿瘤.化疗和造血干细胞移植等综合治疗,可获得较高的缓解率,但微小残留病的存在,使骨髓瘤易复发.树突状细胞(DC)为基础的免疫治疗是近几年来治疗MM的热点之一.国外报道[1]用凋亡的骨髓瘤细胞或分泌的异常单克隆Ig,即M蛋白脉冲DC,得到DC瘤苗,再回输体内,可以观察到骨髓瘤特异的抗瘤效应.本实验体外诱导培养DC,负载骨髓瘤细胞全抗原或分泌的M蛋白,探讨负载抗原的DC对淋巴细胞的活化作用及活化的淋巴细胞对自体、异体骨髓瘤细胞的杀伤活性.
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1例注射青霉素致过敏性休克抢救成功的体会
临床上使用某些药物时,常可引起不同程度的过敏反应,甚至过敏性休克,如不及时抢救,可危及生命.过敏反应是由于抗原、抗体相互作用而引起.青霉素G是一种半抗原,进入人体后与组织蛋白质结合而成全抗原,刺激机体产生特异性抗体.
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青霉素迟发过敏反应致发热1例
青霉素过敏反应系由抗原、抗体相互作用而引起.青霉素属半抗原,进入人体后与组织蛋白相结合而成为全抗原,在刺激机体后可产生抗体,并存于体内.属过敏体质的人遇到相应的抗原,在进入机体后,即可产生过敏反应,其常见的过敏反应分为两种:一种是速发过敏反应,另一种是迟发过敏反应.速发过敏反应多在进行皮肤过敏试验注射完数秒钟或数分钟内即出现全身反应,有时甚至呈闪电式的反应;
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负载肺癌全抗原的自体树突状细胞诱导T细胞反应的体外研究
目的:在体外研究负载肺癌全抗原的自体树突状细胞( DCs)诱导的T细胞增殖及细胞毒作用。方法肺癌组织、正常肺组织和外周血新鲜标本均取自肺鳞状细胞癌并行手术治疗的7例患者,肺癌组织和正常肺组织制备为单细胞悬液。自外周血分离单核细胞并诱导DCs,尼龙毛柱法分离T细胞。冻融法制备自体肺癌细胞裂解液,并刺激DCs,制备负载自体肺癌全抗原的DCs。 MTS法检测负载肺癌全抗原的DCs对T细胞增殖的影响;流式细胞术测定DCs表型及负载肺癌全抗原的DCs对T细胞细胞毒作用的影响。结果外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导培养后,在细胞膜上出现大量的树突状突起,表面分子 CD14表达显著降低( t =20.157, P <0.01), CD1a、CD11c、CD80、CD83和HLA-DR表达明显增加( t =8.927,3.042,14.311,18.537,5.612, P <0.05, P <0.01),获得负载肺癌全抗原的成熟DCs;其能刺激自体T细胞增殖,不同患者刺激指数不同为6.98~39.15(21.56±4.38),而且DC/T比率越高,刺激指数越高,T细胞增殖反应能力越强( t =31.203,19.550, P <0.01);负载肺癌细胞全抗原的DCs能诱导自体T细胞的细胞毒作用,且T细胞对自体肿瘤细胞的杀伤率为(56.52±2.75)%;对正常细胞的杀伤率平均为(5.31±1.37)%,明显低于对自体肿瘤细胞杀伤率( t =16.429, P <0.01)。对K562细胞杀伤率为(9.71±2.46)%,明显低于对自体肿瘤细胞杀伤率( t =25.010, P <0.01)。结论负载肺癌全抗原的DCs能诱导肺癌患者自体T细胞增殖及细胞毒作用,且体外可有力的杀伤肿瘤细胞,而几乎不杀伤正常细胞。
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青霉素皮试结果判断误差成因探讨
青霉素是一种临床广泛应用的抗生素,其疗效显著毒副作用小,但因其是一种人工合成半抗原,进入人体与机体蛋白质结合成全抗原易引起过敏反应,因此使用前必须做皮肤过敏试验.
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小分子化合物多克隆抗体纯化方法优化及比较研究
目的 比较多克隆抗体的纯化方法,探讨多克隆抗体纯化的优化方案.方法 以丙烯酰胺多克隆抗体为纯化对象,进行抗体浓度、识别特征、亲和常数等对比研究,比较盐析(辛酸-饱和硫酸铵法)、蛋白G亲和纯化、载体蛋白亲和纯化、全抗原亲和纯化4种抗体纯化方法对于小分子多克隆抗体的纯化效果.结果 采用的4种方法对于多克隆抗体的纯化效果有一定差异,蛋白G亲和纯化与载体蛋白纯化联合使用的纯化效果较为理想,获得的抗体纯度高、单一识别小分子抗原,且具有佳的亲和常数.结论 通过本文研究,优化的蛋白G亲和纯化与载体蛋白纯化的组合方案提高了多克隆抗体质量,为后续免疫分析方法研究提供技术基础.
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注射青霉素迟发过敏反应的护理体会
青霉素这一传统药物以副作用小、疗效确切等特点一直受到临床的青睐.尤其是扁桃体炎、风湿病、肾功能不全等病人的首选药物.但随着药物的广泛应用,不良反应也时有发生.我院近几年来,注射青霉素发生迟缓过敏反应9例,其发生机理是由于青霉素是一种低分子化合物,溶解后不稳定,易分解成青霉烯酸,此类物质属于半抗原,进入人体与人体组织蛋白结合,形成全抗原,使人体处于致敏状态,青霉素中的一些大分子杂质也可与人体组织蛋白结合,形成全抗原,使人体处于致敏状态.免疫功能失调、变态反应等体质因素都可使人处于致敏状态引发过敏反应.
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玉米赤霉烯酮半抗原及全抗原的合成与鉴定
目的:合成玉米赤霉烯酮(ZEN)半抗原及全抗原,并鉴定其是否合成成功,为制备ZEN抗体奠定基础.方法:将ZEN与羧甲氧基胺半盐酸盐(0-( carboxymethyl)hydroxylamine hemihydrochloride)反应,合成半抗原ZEN-6-羧甲氧基胺(ZEN-oxime),采用TLC、HPLC和液相-质谱联用技术进行半抗原的纯化、鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备ZEN全抗原,采用紫外光谱法、TNBS法结合比的测定以及免疫学方法进行全抗原鉴定.结果:鉴定结果表明目标半抗原及全抗原合成成功.结论:本研究采用多种方法进行半抗原及全抗原的鉴定,结果皆表明目标半抗原及全抗原合成成功,说明本研究合成ZEN半抗原及人工抗原的技术路线是可行的,为进一步研制ZEN的抗体奠定良好基础.
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静滴黄芪注射液致药物热1例报告
患女,64岁,1998年11月26日,以咳、痰、喘10余年,胸闷3年,加重3d入院.诊断:慢性支气管炎并感染,慢性阻塞性肺气肿,慢性肺原性心脏病,心衰Ⅱ度.给予抗炎、平喘化痰、对症治疗,并黄芪(中科院地奥制药公司生产)4mi加入5%葡萄糖液250ml静点,1月后患者病情缓解,停用以上药物.1999年1月4日患者不慎受凉后病情复发、加重,咳嗽、咯白色粘痰,双肺闻及湿罗音,血常规示WBC 8.7×109/L,N 0.897L 0.103,RBC 6.35×1012/L HGB 193g/L,电解质、肾功均在正常范围,故予先锋必3.0,奥复星100ml,黄芪4ml(中科院地奥制药公司生产)均加入5%葡萄糖液中静点,次日患者静点黄芪时出现畏寒,继之高热,体温达40℃,心率120次/min,即停用黄芪并壶入地塞米松5mg约2h后,症状缓解,体温为36.8℃,后分别于1月6日、7日两次静点到黄芪时症状复发,体温上升至38.9℃~40℃,停用并壶入地塞米松后2h可缓解,1月8日停用黄芪后未再出现上述症状,起病全过程无皮疹出现,血培养无细菌生长.讨论药物热以药物过反应者常见,常为-型或Ⅳ型过敏反应,机理是:一些药物具有全抗原作用,而一些药物或其代射产物有半抗原作用,可与体内蛋白质成分结合成全抗原,两者增多可刺激机体免疫系统产生抗体并形成抗原抗体复合物,直接或在补体作用下激活吞噬细胞,释放内原性致热原;细胞免疫的机理是通过淋巴细胞释放的非致热原性可溶性因子,特异性的致敏抗原所致,药物性过敏反应一旦发生,可长时间存在,重复投药可迅速出现发热反应.本例患者曾接触过黄芪注射液,再次使用后次日出现发热,表观为单纯发热而无期他症状,符合药物过敏症所致药物热的临床特征.
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脉络宁注射液致过敏反应1例
脉络宁注射液是一种由多味中药提取物制成的复方中药制剂,成分复杂,其中的半抗原与体内血浆蛋白结合成全抗原,从而易诱发过敏反应[1].临床上主要表现为:呼吸系统损害,如呼吸困难、憋气、喉水肿等;心血管系统损害,如胸闷、紫绀、低血压、高血压等;全身性损害,如过敏样反应、寒战、发热、过敏性休克等.其中呼吸困难、过敏性休克例次居多[2].现报告1例脉络宁注射液致过敏反应病例如下.