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日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析
目的为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据. 方法制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌(雄)成虫抗原、虫卵抗原,采用Western blot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原(LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应,分析其交叉性. 结果 LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原,且所识别的抗原成分有明显差异,雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有3条和2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别,而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体. 结论在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中,LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体,而雄虫次之.
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类鼻疽伯克霍尔德菌Omp38基因的克隆表达及表达产物抗原性鉴定
目的:克隆表达类鼻疽伯克霍尔德菌外膜蛋白Omp38,并对重组Omp38(rOmp38)蛋白的抗原性进行鉴定.方法:应用PCR技术对类鼻疽伯克霍尔德菌Omp38基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-28a (+).重组表达载体经鉴定后,对重组蛋白进行诱导表达纯化,利用Western印迹对重组蛋白的抗原性进行鉴定.结果与结论:构建了pET-28a/ Omp38重组表达载体,Omp38基因得到高效表达,Western 印迹显示rOmp38蛋白具有较好的抗原性.
关键词： 类鼻疽伯克霍尔德菌 外膜蛋白 抗原性 Western 印迹 -
人心肌肌钙蛋白I的纯化及鉴定
目的提取和纯化人心肌肌钙蛋白I.方法心室肌经匀浆、离心、盐析提取,CM Sephadex C-50柱层析,DEAE Sephadex A-50柱层析制备人cTnI;经(cTnI)活性检测、SDS-PAGE、western blot鉴定.结果从65 g湿重心肌中获得4.1 mg cTnI, 分子量约为24 000,纯度约为84%.结论纯化的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异识别,本实验从人心肌中成功制备cTnI.
关键词： 心肌肌钙蛋白I Western 印迹 纯化 鉴定 -
A组轮状病毒结构蛋白基因在马铃薯细胞中的初步表达
目的在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白.方法采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因,克隆于植物表达载体pBI221,再双酶切pBI221,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法,制备农杆菌转化载体pSB111-VP4,并对pSB111-VP4作点杂交检测,筛选鉴定重组子,对马铃薯组织细胞进行转化.结果转化细胞经Western 印迹检测其免疫活性, 具有良好的抗原性.结论为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备.
关键词： 轮状病毒外壳蛋白 转化载体 点杂交检测 Western 印迹
