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杜氏盐藻叶绿体转化载体pDS16S-CAT的构建
目的:利用同源重组方法,将外源基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)转入杜氏盐藻叶绿体中.方法:以杜氏盐藻叶绿体16S rRNA序列为同源片段,构建盐藻叶绿体表达载体,并利用基因枪法转化盐藻,使CAT基因得到表达.结果:转化后的盐藻可以在含有氯霉素的培养基中生存3～4周,表明CAT基因已转入盐藻叶绿体中并表达.结论:盐藻叶绿体转化是可行的,为获得稳定转化的盐藻,需要合适的同源片段.
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A组轮状病毒结构蛋白基因在马铃薯细胞中的初步表达
目的在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白.方法采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因,克隆于植物表达载体pBI221,再双酶切pBI221,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法,制备农杆菌转化载体pSB111-VP4,并对pSB111-VP4作点杂交检测,筛选鉴定重组子,对马铃薯组织细胞进行转化.结果转化细胞经Western 印迹检测其免疫活性, 具有良好的抗原性.结论为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备.
关键词： 轮状病毒外壳蛋白 转化载体 点杂交检测 Western 印迹 -
轮状病毒抗原基因在马铃薯细胞中的表达和活性检测
目的轮状病毒引起的婴幼儿腹泻病,在发展中国家有较高的发病率和病死率,因此,研制安全有效的轮状病毒疫苗成为当务之急.方法本文采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因,克隆于殖物表达载体pBI221,再双酶切pBI221,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法,制备农杆菌转化载体pSB111-VP4,并对pSB111-VP4作点杂交检测,筛选鉴定重组子,并对马铃薯组织细胞进行转化.结果Westem印迹检测其免疫活性,且具有良好的抗原性.结论该转化系统的建立,为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备.
