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中性白细胞激活蛋白文献资料
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幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白基因napA克隆及序列分析
目的:从幽门螺杆菌(H.pylori)中克隆中性白细胞激活蛋白基因napA并构建重组载体.方法:提取H.pylori郑州分离株MEL-HP27基因组DNA作模板;根据H.pylori J99全基因组序列设计napA PCR引物,高保真酶扩增napA片断;限制性内切酶切PCR产物和pNEB193空质粒,T4 DNA酶连接酶切产物,重组质粒转化E.coli TB1工程菌,蓝白斑试验筛选阳性克隆;提取质粒经酶切鉴定后测序并利用生物学软件进行序列分析.结果:DNA限制性内切酶可从重组质粒pNEB-napA的EcoR I和Sal I位点之间切出一个435 bp的DNA片断,测序结果与J99 napA同源性为96.5%,与H.pylori其他菌株的同源性为92%～97%.结论:成功构建H.pylori中性白细胞激活蛋白基因的重组质粒pNEB-napA;序列分析表明HP-napA是一类高度保守的原核型基因,可作为H.pylori疫苗候选基因.
