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阻断病毒抗原提呈途径在免疫逃逸机制中的研究
抗原的加工和提呈在适应免疫应答过程中发挥着中枢作用,是淋巴细胞活化、增生、发挥效应的始动环节,也是启动特异性免疫的关键步骤。病毒抗原肽提呈的过程包括病毒蛋白经胞质中的蛋白酶体降解成抗原多肽,由抗原加工相关转运子( transporter associated with antigen presentation, TAP)转运至内质网( endoplasmic reticulum,ER)腔内,与糖基修饰的主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex,MHC)分子共同组成MHC-抗原肽分子复合体,经高尔基复合体(Golgi complex,GC)提呈至细胞表面,被T细胞受体(T cell receptor,TCR)识别,激活特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)等一系列反应。
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可溶性MHC-肽四聚复合物法及其进展
抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)主要是CD8+ T细胞,少数为CD4+ T细胞,CTL对抗原的识别及自身的活化受MHC分子的限制.抗原特异性CTL在抗感染免疫、移植物免疫和肿瘤免疫中发挥重要作用,定量分析抗原特异性CTL可为阐明免疫应答的自然发生过程提供重要信息,但是传统的检测分析方法均为间接的活性测定,费时费力.1996年Altman等[1]首创的可溶性MHC-肽四聚复合物法则能够直接定量检测抗原特异性CTL的比率,并通过流式分选用于其他方面的研究,操作简便,灵敏度、特异性很高,因而得到广泛应用.以下就其原理、应用及技术改进简述之.
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酶联免疫斑点试验和胞内细胞因子测定及其在人类免疫缺陷病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞研究中的应用
酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和胞内细胞因子测定是近年测定T细胞功能的新方法,在国外已逐渐用于肿瘤和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的基础和临床研究. HIV感染是人类面临的较严峻的问题,HIV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对控制HIV感染具有十分重要的作用.将这2种方法用于HIV特异性CTL研究,有助于了解机体感染HIV后的免疫机制和防治艾滋病策略.现将这2种方法和特点及其在HIV特异性CTL研究方面的应用情况介绍如下.
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人巨细胞病毒特异性T淋巴细胞检测的研究进展
人巨细胞病毒(HCMV)是疱疹病毒的一种,在不同人群中的感染率为50%~90%.初次感染后,在宿主免疫的控制下潜伏于骨髓等细胞中.当免疫功能受损时(移植、获得性免疫缺陷综合征、肿瘤等),潜伏的病毒易被激活,严重者可引起致死性肺炎、肝炎[1].大量研究表明,特异性细胞免疫对HCMV感染的控制和疾病的恢复起重要作用,尤其是CD8+T对控制HCMV感染更为重要[1,2].Cwynarski等[3]研究发现,HCMV潜伏感染期, 如特异性CD8+T在免疫正常者中为0.4~0.8×107/L;而肾移植受者为≥1×107/L时,均可阻止病毒的激活.新近,关于特异性细胞毒性T细胞(CTL)治疗HCMV病亦屡见报道[4].另外,大量的研究表明,CD4+T对于维持CTL的功能和长期控制病毒血症也起关键作用[3,5].
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EB病毒与人类肿瘤的相关性研究
EB病毒(EBV)是从非洲儿童的恶性淋巴瘤细胞培养中发现的一种嗜人B淋巴细胞的疱疹病毒.该病毒在正常人群中的感染非常普遍,绝大部分感染者为健康携带状况[1-2].但国内外大量研究表明,EBV与Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌等多种肿瘤发生有关.然而,新文献证实,初用于霍奇金淋巴瘤免疫组化检测EBV核抗原(EBNA)抗体2B4与MAGE-4存在交叉反应,因而对基于该抗体免疫组化检出的EBV与某些肿瘤相关的结论产生质疑,提出EBV不是乳腺癌病因的观点.此外,EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)治疗同种异体造血干细胞移植后发生淋巴组织增生性疾病效果明显,而在其他EBV相关肿瘤治疗方法和效果还有待研究.现对EBV的生物学特性、作用机制,EBV与各种肿瘤发生与治疗等方面的研究状况阐述如下.
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慢性乙型肝炎患者表位特异性CTL定量检测的评价
目的:评价慢性乙肝患者体内不同表位特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的功能状态.方法:采用MHC/肽四聚体复合物技术,即tetramer技术,定量外周血HLA-A2限制性表位即核心抗原core18-27、被膜抗原env 183-191、335-343、聚合酶抗原pol 575-5834种表位特异性CTL,通过多元回归分析进行综合评价.结果:慢性乙肝患者体内存在多克隆CTL反应,core 18-27为优势生表位.4种表位特异性CTL的频率与病毒载量无相关性(P>0.05);表位特异性CTL与血清转氨酶水平均无显著相关性(P>0.05).结论:体内存在的CTL数量并不能代表机体的保护性免疫状态.
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CD4+ CD25+ 调节T细胞对肝癌特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性的影响
CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)是体内主要的免疫调节细胞,研究发现多种肿瘤患者的外周血及肿瘤局部均有Treg的比例增高,提示Treg在肿瘤的发生发展过程中可能起重要的作用.
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可溶性Fas阻断Fas介导的T淋巴细胞凋亡
在用肝癌手术切除标本制备肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)过程中,应用可溶性Fas阻断激活T细胞间诱导T细胞凋亡可望短时间获得大量肿瘤特异的激活T细胞.本研究进一步观察阻断Fas介导T细胞凋亡后制备的CTL抗肿瘤免疫活性,观察肝癌细胞表面Fas被封闭后对杀伤敏感性变化,可望为肿瘤免疫治疗研究提供新策略[1].
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急性淋巴细胞白血病新治疗策略(中)
3 单克隆抗体 白血病细胞表达的家系相关性抗原正日益成为单克隆抗体治疗的靶点,单克隆抗体可以非结合方式用药,也可与抗白血病药物、免疫毒素或放射性分子结合后用药.抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的相关研究不断发展,从而大大拓展了家系相关性抗原在细胞免疫治疗中的重要性.单克隆抗体己被成功地单独及联合使用(表1).但靶抗原并不单纯由白血病幼稚细胞表达,也可由正常造血细胞表达,从而降低了单克隆抗体细胞毒性的选择性.
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Tetramer和Elispot方法在评价特异性HIV-1细胞免疫反应中的应用和临床意义
大量的研究结果证明,艾滋病病毒1型(HIV-1)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在病毒的免疫学控制方面发挥着重要作用.对病人临床病情了解的需要促进了各种检测和定量HIV-1特异性CTL方法的发展.早的检测HIV-1特异性CTL的方法,是在51Cr释放法(Chromium release assay,CRA)的基础上发展起来的.
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高效抗逆转录病毒治疗后HIV感染者CTL应答研究现状
高效抗逆转录病毒治疗(Highly active antiretroviral therapy,HAART)明显降低了艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者的发病率和死亡率,随着HIV-1被抑制于不可检测水平,CD4T细胞数明显增加,部分免疫功能重建,肺孢子虫、弓型虫、分支杆菌、真菌等并发感染明显得到控制.虽已在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染猿猴的模型以及人体实验中证实,HIV特异性细胞毒性T细胞(CTL)在控制HIV感染中起着关键作用,然而HAART治疗后CTL功能不能完全恢复,以至不能彻底清除HIV.所以HAART治疗后CTL功能重建目前是HIV治疗的研究热点.HAART治疗后CTL应答的研究,对于了解HIV感染与宿主免疫功能之间的关系,以及免疫功能重建、开发疫苗等方面均有十分重要的意义.现就近几年对HAART治疗后CTL应答规律、影响CTL应答的机制、如何提高CTL应答效应等方面做一综述.
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强效联合抗病毒治疗对HIV特异性细胞毒性T淋巴细胞的影响
艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的一种严重威胁人类生命的传染病,其临床特征是细胞免疫功能低下,易患各种机会感染和罕见肿瘤,病死率极高.目前,强效联合抗逆转录病毒治疗(HAART)可使病毒载量降到可检测阈值以下,并可使CD+4细胞计数增加,使机体免疫功能获得重建.迄今为止,HAART仍是治疗AIDS应用广、疗效好的治疗方案;而细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是一类杀伤表达特异性抗原靶细胞的T细胞亚群,是人体特异性抗病毒感染的主要效应细胞,因而HAART治疗方案对CTL的影响是目前人们研究的热点.
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DAB389(Gly4 Ser)2-αMSH重组蛋白的构建表达及特异性细胞毒性研究
目的:构建重组毒素DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,探讨其对过度表达αMSH受体的几种癌细胞的特异杀伤作用.方法:利用含有His·Tag和白喉毒素的基因序列作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2的互补序列基因作下游引物,以pET28a-DAB389(Gly4Ser)2-EGF为模板,PCR扩增得到DAB389(Gly4Ser)2-αMSH片段,插入原核表达载体pET28a的相应位点,构建重组表达载体并在大肠杆菌中表达重组融合蛋白DAB389(Gly4Ser)2-αMSH.用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白,用结晶紫法检测重组蛋白对几种癌细胞和正常细胞的毒性作用.结果:构建了含有His·Tag重组表达质粒pET28a-DAB389(Gly4Ser)2-αMSH;SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为45.32×103,其表达量占菌体蛋白总量的29.2%;Western blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗白喉抗体结合;细胞活性检测表明重组蛋白对SP2/0,HeLa,A549,A375这4种癌细胞有明显的杀伤作用,4种癌细胞的IC50值分别是3.138,2.736,7.243和4.672 μg·mL-1.结论:成功构建了具有生物学活性的重组蛋白DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,为进一步的靶向性药物研究奠定了基础.
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携带突变k-ras基因的重组腺病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫
近年来,肿瘤疫苗的研究已成为肿瘤免疫治疗的热点之一.肿瘤抗原的发现及确认为肿瘤的免疫治疗尤其是主动性免疫治疗提供了新的手段.有研究证实突变的ras蛋白质产物可被特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)所识别[1,2].由于ras基因突变发生在多种类型肿瘤的实质部分,相对应的抗原决定簇也被发现存在于多种肿瘤组织中,有较为一致的突变热点(密码子12,13,61).许多研究已经证明肺腺癌中k-ras基因12位密码子点突变是频发、常见的,且与患者的预后有关.因此以ras为靶目标,建立肿瘤生物治疗的方法有重要的临床价值.树突状细胞(dendritic cells,DC)在免疫系统中有特殊的作用,DC疫苗在恶性肿瘤的生物治疗中也具有独特的地位.为此,我们在成功构建携带编码12位密码子突变的k-ras基因的重组腺病毒载体的基础上[3],探讨其修饰的DC能否诱导机体产生特异性CTL,为以DC为基础的肿瘤主动性免疫性治疗提供实验依据.
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流感疫苗对急性髓系白血病患者骨髓细胞来源树突细胞功能的影响
树突细胞(DC)因其强大的抗原呈递功能,具有激活针对肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用,已成为白血病及肿瘤生物治疗的重要研究领域.白血病细胞来源的DC携带有自体已知或未知的多个肿瘤抗原,在HLA限制性和肿瘤特异性上具有独特的优势.
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阳离子脂质体包裹急性髓系白血病可溶性蛋白抗原诱导细胞毒性T淋巴细胞作用
我们用干燥的阳离子脂质体包裹白血病可溶性蛋白抗原,然后致敏树突细胞(DC),再诱导出特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),为治疗急性白血病微量残留病(MDR)提供一种新思路.
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α干扰素联合GM-CSF体外培养多发性骨髓瘤患者外周血树突状细胞
树突状细胞(DC)是目前公认的体内功能强的抗原提呈细胞(APC),它能显著地刺激初始T细胞(naive T cells)的增殖,启动机体免疫反应,在激发以抗原特异性细胞毒性T细胞过继性免疫治疗肿瘤中起着重要的作用.DC经典的培养方法是用GM-CSF/IL-4从外周血CD14+细胞或用GM-CSF和TNa从CD34+造血干细胞中制备生成[1-3].
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EB病毒感染与致癌
一、EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的潜伏感染与活化EBV系通过唾液传播而直接感染口-咽部B淋巴细胞.遭受感染的B淋巴细胞可有两种命运:①因溶解感染而死灭,释出病毒颗粒,繁殖出的EBV进而感染周边上皮细胞与B淋巴细胞,将感染扩大;②如同试管内B淋巴细胞感染实验,感染EBV结果使之转化为淋巴细胞并开始增殖.溶解感染淋巴细胞和转化淋巴细胞都在细胞表面表达有病毒抗原,故可由EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)将之清除.然而,部分的转化淋巴细胞可因无病毒抗原表达而移行为O型潜伏感染,作为记忆B淋巴细胞而保留下来.此种记忆B淋巴细胞可因抗原刺激等契机而被激活,于是转为诱导EBV产生.产生之EBV则能感染周边上皮细胞与B淋巴细胞,或由二次性CTL应答而被迅速清除.上皮细胞感染几乎全是溶解感染,此际生成的EBV排泄于唾液中而成为传染原.
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特异性细胞毒性T淋巴细胞体外检测方法的进展
抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞在免疫反应中起着重要作用,本文就近年来抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞反应的体外检测方法的原理及评价进行综述.
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人类免疫缺陷病毒感染与特异性细胞毒性T淋巴细胞反应
特异性细胞毒性T淋巴细胞是一种能直接杀伤病毒及抗细胞内感染的效应细胞。大多数细胞毒性T淋巴细胞为CD8细胞,其反应是控制人类免疫缺陷病毒感染的重要免疫反应,但细胞毒性T淋巴细胞不能完全清除人类免疫缺陷病毒,这与病毒在体内的高度变异及病毒攻击人体免疫系统导致免疫功能改变有关。