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沙拉沙星体外诱导鼠伤寒沙门菌耐药实验
目的 为获得体外鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)对盐酸沙拉沙星(sarafloxacin hydrochloride)的活性耐药菌株,研究诱导其产生耐药的盐酸沙拉沙星低浓度,为评价食品中沙拉沙星残留导致的微生物耐药提供依据.方法 设置盐酸沙拉沙星0.001、0.002 5、0.005、0.025、0.05、0.1μg/ml实验组和空白对照组、NaOH溶剂对照组,采用NCCLS法测试小抑菌浓度,对鼠伤寒沙门菌进行耐药诱导,耐药判断为≥8×MIC(0.25 μg/ml).对产生耐药的鼠伤寒沙门菌的gyrA基因片段进行PCR扩增,焦磷酸凝胶测序法鉴定gyrA基因常见5个位点观察突变.结果 盐酸沙拉沙星在0.005 μg/ml水平传到第10代时,MIC增大32倍,抑菌浓度增加到1 μg/ml,耐药菌增殖停止;传到第25代时,鼠伤寒沙门菌gyrA基因Ser83位点发生突变,获得多株稳定、有生物活性的耐药菌株.沙拉沙星浓度≥0.025 μg/ml时,细菌不生长;沙拉沙星浓度≤0.002 5μg/ml时细菌生长,不产生耐药.结论 沙拉沙星浓度为0.005 μg/ml时可体外诱导鼠伤寒沙门菌产生耐药,经传代后获得具生物活性的耐药菌株.
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体外精子发生条件研究进展
对体外精子发生进行研究,并构建相应的体外诱导环境,实现在体外环境中形成具有正常功能的精子,对于男科医学领域具有重大科研价值和实际应用意义,同时也为生殖科学技术的发展与进步做出贡献。然而在生物体内精子发生所需的条件十分复杂,并且至今对于精子发生的详细机制尚不明确,从而使精子发生过程在体外条件下实现的难度极大。本文主要针对近年体外精子发生条件的研究进展做一综述。
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小柴胡汤的酚类代谢物体外诱导人肺成纤维细胞和外周淋巴细胞凋亡
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细菌脂多糖体外诱导子宫内膜细胞炎症模型的建立
子宫内膜是衬于子宫腔内面的一层粘膜.它成分复杂,功能多样,每月都要经历一次增生、分泌和剥脱的特征性变化.临床上炎症因素所导致的妇产疾病尤为常见.有报告表明,异常子宫出血患者子宫内膜细菌检出率为79.5%,其中金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌比例高,被认为是异常出血的主要致病菌[1].本实验采用大肠杆菌产生的细菌脂多糖(LPS)(SIGMA公司0127:B8)诱导子宫内膜炎症模型,为进一步对子宫内膜炎症相关机理的研究和治疗药物疗效的评定奠定了基础.
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改良Chen-woan法体外诱导扩增大鼠树突细胞
树突细胞(dendritic cells,DC)参与多种自身免疫疾病、肿瘤、免疫缺陷病及某些炎症反应的病理过程,体外培养、扩增和诱导分化获得足够数量的功能DC意义重大.本实验建立了培养大鼠骨髓来源DC的简便有效方法.
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体外诱导的皮肤源性神经干细胞在大鼠受损伤脊髓内的存活和分化
为寻找新的神经干细胞来源用于治疗急性脊髓损伤的实验研究,本实验采用绿色荧光大鼠(GFP转基因鼠)有毛皮肤在体外经剪碎,胰酶消化,过滤细胞,无血清培养液培养分离细胞,用表皮生长因子和成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,去除生长因子后用含血清培养液培养细胞等过程,采用神经上皮于细胞蛋白(nestin)、微管相关蛋白(MAP2)、神经丝蛋白(NF-200)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫细胞化学染色法对培养细胞的分化状况进行鉴定.
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亚胺培南体外诱导大肠埃希菌MIC变化规律及相关耐药机制探讨
目的 探讨亚胺培南(imipenem,IMP)体外诱导大肠埃希菌(Escherichiacoli)耐药产生的变化规律及其相关的耐药机制. 方法 对2014年河南睢县某医院分离的全敏感E.coli用IMP进行体外浓度递增诱导,记录每个浓度下的诱导时间和诱导结束后的MIC值及其对应的累积时间,采用统计分析软件SPSS17.0对数据进行回归分析;采用改良Kirby-Bauer(K-B)纸片法测定诱导前后菌株对20种抗生素耐药谱的变化情况;采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增碳青霉烯酶类、β-内酰胺类等相关耐药基因并进行测序分析. 结果 体外诱导结束后菌株对IMP由敏感变为耐药.同归分析显示随着IMP诱导浓度的增加,诱导耐药时间延长,当浓度增加到一定数值时,诱导时间不再延长;回归分析显示,随着诱导浓度的增加或诱导时间的延长,MIC均逐渐增加,但两种情况下其增长率不同.诱导后的菌株对IMP耐药,对其他抗生素仍敏感,PCR扩增相关耐药基因均阴性. 结论 IMP可诱导E.coli产生耐药,且随诱导浓度的增加诱导耐药时间先增加后达到平台期,而MIC持续增加.推测E.coli IMP耐药机制与某种特异靶位突变有关.
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含RGD肽基因导入系统介导TGF-β1基因转染对兔骨髓基质干细胞增殖和体外诱导成骨的影响
目的 探讨一种新型靶向性非病毒载体-含RGD肽K16GRGDSPC(记作K16-RGD)介导外源基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)的可行性,观察转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对BMSCs的增殖和体外诱导成骨的影响.方法 固相合成法合成K16-RGD,以其为载体将转化生长因子β1质粒pcDNA3-TGF-β1导入兔BMSCs,以导入空载体pcDNA3作为对照,GA18筛选得到阳性细胞集落(分别命名为BMSCs-TGF-β1和BMSCs-pcDNA3),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1基因的表达;采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTF)和流式细胞仪(FCM)检测细胞体外增殖活性,并进行成骨诱导扩增,检测转基因细胞经成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙蛋白(OCN)含量、核心结合因子a1(Cbfa1)的表达、矿化(钙结节形成)情况.以经诱导的BMSCs-pcDNA3和未转染BMSCs作为对照.结果 RT-PCR显示转基因细胞能高表达TGF-β1,BMSCs-TGF-β1的体外增殖活性明显高于对照组(P<0.01);BMSCs-TGF-β1经成骨诱导后表达的成骨特征性表型(ALP、OCN、Cbfa1的表达和矿化)与对照组有显著的差异(P<0.01).结论 含RGD肽K16-RGD可以作为一种较理想的新型基因转移载体介导外源基因转染BMSCs;TGF-β1可以作为骨组织工程种子细胞BMSCs向成骨细胞定向分化的理想调控因子之一.
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KBM581培养基——人T细胞诱导与扩增培养基应用指南
KBM581是一种专门用于体外诱导和扩增CIK细胞的培养基.CIK细胞的诱导需要白细胞介素-2、干扰素-γ、CD3 单克隆抗体和人自体血浆.本研究中,我们将康宁 KBM581与竞争对手的同类产品进行了性能比较,以便给予用户一个客观参考.
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髓源性抑制细胞的体外诱导及其应用
近来,髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)在固有免疫和适应性免疫中发挥非常重要的作用,参与多种自身免疫疾病和移植排斥反应[1-2]。MDSCs 是来源于骨髓的一群异质性细胞,由一些髓系祖细胞及树突状细胞(dendritic cells,DCs)、巨噬细胞和粒细胞的前体细胞组成,具有显著抑制免疫细胞应答的能力[3]。小鼠 MDSCs的表面标志:粒样 MDSCs(G-MDSCs)为 CD11b+Ly6G+Ly6Clow,单核样 MDSCs(M-MDSCs)为 CD11b+Ly6G?Ly6Chigh,在癌症、自身免疫性疾病中这两类细胞有不同的功能[4-5]。
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小鼠Th17细胞体外诱导扩增的实验研究
近年来的研究发现Th17细胞在多种自身免疫性疾病、炎症及肿瘤的发生与发展中发挥重要的作用[1-2].由于此类细胞以分泌的胞内细胞因子为标记,所以目前尚没有较好的分离纯化方法.本实验探讨了体外扩增Th17细胞的实验方法及影响因素,以期为进一步研究其表型与功能奠定基础.
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几种细胞因子对人脐血CD34+干细胞在体外诱导扩增为树突状细胞的研究
多种疾病用树突状细胞(dendritic cell, DC)作免疫治疗具有一定的疗效.由于DC在人体组织中含量甚微,限制了DC的研究及临床应用.因此如何获得足够的成熟DC便成为DC广泛应用的关键技术问题.我们比较了不同细胞因子组合对脐血CD34+造血干细胞在体外诱导扩增为DC的效率及功能的影响,提供一种体外获得大量成熟DC的有效途径.
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人外周血CD123+髓系树突状细胞的体外诱导及生物学特性研究
树突状细胞(DC)是功能强大的专职抗原提呈细胞,根据其表面标记,DC分为髓系DC(myeloid-DC,mDC)和浆细胞样DC(plasmacytoid-DC,pDC)两个大的亚群,前者主要用于抗肿瘤免疫治疗,后者主要参与免疫耐受.
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脂多糖诱导树突状细胞成熟过程中Toll样受体的表达变化
本研究以体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞(DC)为模型,对脂多糖(LPS)诱导DC成熟过程中10种不同Toll样受体(TLR)的动态表达变化进行了观察分析.
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HIV-1拉米夫定(3TC)耐药毒株的体外诱导培育和鉴定
目的通过体外传代培养,将我国HIV-1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株.方法在MT4细胞-中国HIV-1B'亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008 μmol/L拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3~5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RT-PCR法扩增pol区基因,进行基因型耐药性分析.将表型和基因型耐药结果与敏感株进行比较.结果培养6代后,IC50由野生毒株的0.018 μmol/L逐渐提高到0.15 μmol/L;第7代时,IC50突然增加到大于2048 μmol/L;pol区的184位氨基酸由甲硫氨酸(M)突变为异亮氨酸(I).去除药物继续培养5代,IVC50仍维持>2048 μmol/L,pol区184位氨基酸仍为异亮氨酸,没有发生回复突变.结论在国内首次用中国HIV-1毒株诱导培育出可能稳定传代的3TC耐药株,可用于HIV-1耐药性的研究和HIV-1药物的药效学评价.该耐药株已申请国家专利.
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慢性肝炎患者树突状细胞体外负载抗原后的抗病毒作用
近来在抗肿瘤免疫研究中发现,树突状细胞(DC)在抗原的提呈及激活淋巴细胞使其成为肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)方面有重要作用,因而有广泛的应用价值.本研究对慢性肝炎外周血树突状细胞进行体外诱导扩增,DC在未成熟阶段摄取纯的HBsAg后发育为成熟的DC,再与自身T淋巴细胞共培养,观察特异性CTL对2.2.15细胞培养液中HBeAg和HBsAg的表达抑制以及产生IFN-γ和IL-12的情况.
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强的松对IFN-γ体外诱导肾病综合征患儿外周血单个核细胞HLA表达的影响
糖皮质激素作为治疗原发性肾病综合征(nephritic syndrome,NS)的首选药物,其中90%患儿对糖皮质激素治疗反应良好,但部分患儿表现激素耐药.
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pMAGE-Al/EGFP转染的人树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应的研究
树突状细胞(DC)是目前已知功能强的抗原提呈细胞,被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗[1].肿瘤特异性抗原MAGE-Al在不同来源肿瘤组织中有较高表达[2],因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视.本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-Al/EGFP,体外电转染人人外周血单核细胞来源DC,并评价其体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,以期为临床开展MAGE-Al为基础的免疫治疗提供有利的分子生物学工具.
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成人脂肪间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的实验研究
目的 体外培养并诱导成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分化为心肌样细胞,为心肌细胞的替代治疗提供新的来源.方法 采用消化法和贴壁培养法分离培养ADMSCs,对第3代细胞进行免疫化学鉴定和5-氮杂胞苷(5-aza)诱导,于诱导后第7、14、21和28天行免疫化学鉴定,并测定GATA4和Nkx2.5表达和心房利钠肽(ANP)含量.结果 人脂肪中含有梭形细胞,CD44、CD13、CD105阳性表达,而CD45、CD34、 HLA-DR、Ⅷ因子阴性表达.诱导后细胞排列方向一致,部分细胞聚集成团;结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、肌球蛋白重链和心肌肌钙蛋白T呈阳性表达.有GATA4和Nkx2.5的表达及心房利钠肽的分泌.结论 成人脂肪组织中含有间充质干细胞,且可在5-氮杂胞苷诱导21 d后分化为心肌样细胞.
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骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化及其在神经修复中的应用
近几年来,干细胞已成为生物学和医学领域的研究热点.间充质干细胞来源于中胚层,具有很强的自我更新、增殖能力以及多向分化的潜能.而骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenclaymal stem ceIls,BMSCs)因具有易于分离、培养、扩增、长期培养的过程中始终保持多向分化的潜能、免疫原性低、遗传背景稳定等特性,使之成为干细胞研究领域的焦点.近的研究表明BMSCs在体外能被诱导成神经元样细胞,且植入体内能改善神经损伤症状.因此,本文结合新研究进展就体外诱导BMSCs向神经元样细胞的分化及其在神经修复中的应用作一综述.