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  • 脂肪间充质干细胞对T细胞的免疫调节作用及其应用

    作者:李春华;江霞;许兆军

    脂肪间充质干细胞(ADSCs)是成体间充质干细胞,存在于脂肪组织中,因取材方便、不受伦理限制,并具有多向分化潜能、免疫调控和自主更新能力,而具有非常重要的研究和应用价值.ADSCs的低免疫原性使其能够调节T细胞,参与免疫反应.该文就ADSCs对T细胞的免疫调节作用及其应用作一综述.

  • 脂肪干细胞在组织工程中的研究进展

    作者:枟涛;秦书俭

    随着组织工程技术的不断发展,种子细胞的来源问题已经成为制约其发展的一个重要的因素.自脂肪间充质干细胞发现以来,人们对其的研究不断深入.近几年.越来越多的实验证实,脂肪间充质干细胞可以向成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞、肌细胞和脂肪细胞等不同胚层来源的细胞分化.而且脂肪组织来源广泛、取材容易、便于自体移植;脂肪间充质干细胞在体外长期培养的过程中始终保持其多向分化潜能、遗传背景相当稳定、体内植入后少有免疫排斥的问题,因而是一种非常理想的组织工程种子细胞.

  • 中药提取物 AFDR 对 IBRC 材料复合 ADMSCs 应用于兔腰椎横突间融合的影响

    作者:李晋玉;徐林;金合;谭荣伟;俞兴

    目的:本实验采用可注射骨修复材料( Injectable Bone Regeneration Composite ,IBRC)复合脂肪间充质干细胞( Adipose Tis-sue-Derived Mesenchymal Stromal cells ,ADMSCs)应用于兔腰椎横突间融合模型,骨碎补总黄酮( Assemble Flavone of Drynaria Rhizome,AFDR)灌胃,观察融合效果。方法:60只成年白兔,制成兔腰椎横突间融合模型,采用安全随机法随机分为5组:A组植入IBRC材料结合AFDR灌胃;B组植入IBRC材料复合自体髂骨( Autologous iliac Crest Bone ,ACB),结合去离子水﹙Deion-ized Water,DW﹚灌胃;C组植入IBRC材料+ADMSCs,DW灌胃;D组,植入ACB,DW灌胃;E组植入ACB,AFDR灌胃。以术后第8周为观察时间点,进行大体观测,手触检测,X线片,组织学观察。结果:IRBC+ADMSCs,ACB+AFDR组获得较好的融合率,显著高于单纯IRBC,ACB组( P<0.05),与ACB+DW组相比差异无统计学意义( P>0.05)。结论:自体ADMSCs结合IRBC材料可实现与ACB组相似的融合率,结合中药AFDR灌胃,能够提高兔腰椎横突间的骨性融合率。

  • 猪脂肪间充质干细胞分离、鉴定、诱导及联合扩张器重建乳房模型的研究

    作者:喻兰雅;张晨芳;寇晓梅

    目的 通过从脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞,并进行培养鉴定、定向诱导,再联合皮肤扩张器在小型猪腹部皮下塑造乳房重建模型,探讨脂肪间充质干细胞用于乳房重建的可能性.方法 取小型猪颈背部皮下脂肪组织,用胶原酶消化法获得脂肪间充质干细胞,结合免疫荧光法,将所培养细胞用流式细胞技术分析细胞表面抗原,体外诱导其向脂肪细胞、成骨细胞分化,油红O染色、茜素红染色等方法检测细胞诱导分化结果.筛选脂肪间充质干细胞,将脂肪间充质干细胞联合扩张器注射于小型猪乳房模型观察.结果 流式细胞技术检测CD34、CD45阴性表达,CD44、CD105阳性表达,油红O染色可见细胞内有脂滴形成,茜素红染色发现细胞出现钙结节.动物模型发现与对照组相比较,注入干细胞组局部细胞数目增多.结论 猪脂肪间充质干细胞可在体外培养,并可定向诱导成脂肪细胞、成骨细胞,在动物体内可向局部组织分化,引起局部细胞数目增多.

  • 磁性纳米颗粒与脂质体介导REST-siRNA转染hADSCs的比较

    作者:王瑞;庞希宁;施萍

    目的 对聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒(PEI-SPIO)与脂质体(lipofectamineTM 2000)作为基因载体转染人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的可行性及转染后细胞的增殖、转染效率及基因瞬时干扰效率进行比较分析.方法 分别将PEI-SPIO和lipofectamineTM 2000作为基因载体连接REST-siRNA体外转染hADSCs,用MTT法检测hADSCs增殖和功能;用荧光显微镜观察转染效率;分别用Real-time PCR和Western blot检测REST的表达.结果 用磁性纳米颗粒和脂质体作为基因载体转染细胞后,细胞成活率分别为99%和79% (P <0.05);磁纳米颗粒和脂质体的转染效率无差异,分别为75%和71%;磁纳米颗粒和脂质体作为基因载体时RNA表达量分别为(0.46±0.04)和(0.53±0.05),蛋白水平表达量分别为(0.501 ±0.006)和(0.523 ±0.004).结论 磁性纳米颗粒因其具有低细胞毒性可代替脂质体作为转染干细胞的基因载体.

  • 人脂肪间充质干细胞体外传代的遗传特性分析

    作者:李晓瑞;邓银;陈思翔;郑东明;马明;刘宇;高雪华;刘大成;赵令卉

    目的 研究人脂肪间充质干细胞(ADSCs)在体外传代过程中生物学特性及遗传特性的变化,为脂肪间充质干细胞的基础研究及临床应用安全性提供理论依据和新的细胞来源.方法 利用无血清培养基培养ADSCs,对1、3、5、7、10、14和15代体外培养细胞进行了形态观察,流式细胞术分析细胞周期及免疫表型,G显带法分析染色体核型,实时荧光定量分析相关基因表达量,ELISA定量分析细胞因子的表达量.结果 ADSCs传代至第7代后,细胞增殖速度开始减慢,10代后细胞增殖速度显著减慢.细胞形态为长梭形并保持稳定.处于G2期和S期细胞百分比基本保持稳定.染色体细胞核型没有明显易位和缺失等变化,相关基因表达量略有差异,培养基内分泌的细胞因子保持稳定.结论 利用无血清培养基培养的脂肪间充质干细胞在体外培养5代以内基本安全.

  • 骨髓和脂肪来源的间充质干细胞免疫调节作用的比较

    作者:孙昭;韩钦;赵春华

    目的 比较脂肪源间充质干细胞(AMSCs)和骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)的免疫调节能力的差异.方法 用流式细胞仪分析AMSCs和BMSCs的表型.通过MSCs和淋巴细胞共培养体系,检测MSCs对T细胞增殖、周期、活化、凋亡以及Th细胞分化的影响.结果 表型分析结果显示AMSCs和BMSCs的表型基本一致.AMSCs和BMSCs都能抑制T细胞的增殖和早期活化,并在调节辅助性T细胞亚群的分化上作用类似.但在MSC对活化后T细胞的凋亡影响方面,BMSCs能够抑制活化T细胞的凋亡,而AMSC没有这种作用.结论 AMSCs和BMSCs对T淋巴细胞的影响基本类似,其对活化T细胞凋亡影响的差异还有待进一步的机制研究.

  • 体外诱导脂肪来源间充质干细胞间质-上皮转换

    作者:杨倩;张丽娜;李康华;赵春华

    目的 探讨在体外诱导人脂肪来源间充质干细胞(hAD-MSCs)发生间质-上皮转换(MET)的可行性.方法 从人脂肪中分离、培养间充质干细胞,流式细胞术鉴定其细胞表面标志.在体外添加激活素A( activin A)、维甲酸(RA)和骨形态发生蛋白7(BMP7)培养后,倒置显微镜下观察hAD-MSCs诱导后的形态变化,采用RT-PCR方法检测间质和上皮细胞相关基因vimentin,E-cadherin,ZO-1和β-catenin在诱导分化过程中表达水平改变.Western blot 检测诱导前后间质标记vimentin和上皮标记β-catenin的表达.结果 诱导后细胞形态发生改变,由长梭形变为卵圆形,上皮标记基因E-cadherin,ZO-1和β-catenin的mRNA表达显著上调(P<0.05),同时间质标志基因vimentin 的mRNA表达显著下降(P<0.05).Western blot结果显示,与未诱导组相比,诱导后细胞开始表达β-catenin,而vimentin的表达明显下降(P<0.05).结论 Activin A、RA和BMP7联合使用可诱导hAD-MSCs发生MET的过程.

  • 猪脂肪源间充质干细胞诱导成脂分化及Krüppel样因子2的表达

    作者:刘京霞;李方正;朴英姬;姜忠玲;宋学雄

    目的 旨在阐明猪脂肪源间充质干细胞(AMSCs)在诱导成脂分化过程中Krtüppel样因子2(KLF2)的表达模式.方法 采用Ⅰ型胶原酶消化法处理猪脂肪组织,经原代和传代培养分离、纯化和扩增AMSCs,用流式细胞仪检测AMSCs纯度,在倒置显微镜下用形态学和油红O染色法检测AMSCs的成脂分化,用实时定量PCR检测KLF2的表达模式,并与过氧化物酶体增殖物激活受体2(PPARy2)的表达进行了比较.结果 分离、纯化的AMSCs,其间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD105表达量分别为91.7%、95.1%和95.6%,而造血干细胞表面抗原CD34表达量仅为3.39%;在诱导分化2d后,个别细胞质中出现小脂滴,且含脂滴的细胞数量和脂滴量随诱导时间的延长而增加,在诱导分化第18天成脂分化率达48.2%;在诱导分化第2天、第8天和第16天,KLF2的表达量分别为1.84±0.206、1.07±0.072和0.83±0.095,而PPARy2 mRNA的表达量分别为3.06±0.542、13.22±0.5736和15.11±1.073.结论 获得纯度较高的AMSCs,具有良好的成脂分化潜能,KLF2的表达量在成脂分化早期的前脂肪细胞阶段增加,成脂分化开始后逐步减少,KLF2作为脂肪分化负调控转录因子而发挥作用.

  • 大鼠白色和棕色脂肪来源的间充质干细胞成脂分化特性的比较

    作者:牛艳菲;赵国安;常玉巧;甘黎;殷国田;郭志坤

    目的 探讨白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)来源的间充质干细胞成脂分化特性的差异.方法 雄性SD大鼠15只,3只用于细胞分离培养,12只用于细胞移植.体外分离培养WAT和BAT两种来源的脂肪干细胞,用油红O染色检测两种干细胞的成脂分化率,用免疫荧光技术检测成脂诱导、分化后的细胞是棕色脂肪细胞还是白色脂肪细胞.4'6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记两种来源的于细胞后移植至腹股沟区,分别在第1、2、3周取材,免疫荧光技术检测植入细胞的分化趋向.结果 WAT来源的干细胞增殖速度明显快于BAT来源的干细胞,前者成脂分化率为0.205±0.069,后者为0.165 ±0.053,两种干细胞的成脂诱导率差异无统计学意义(P>0.05).两种干细胞分别植入体内后,在第1、2、3周发现,两种干细胞均表达棕色脂肪特异性蛋白解耦联蛋白1(UCP1).结论 WAT和BAT来源的干细胞在体外及体内诱导成脂后均分化为棕色脂肪细胞.

  • 姜黄素对猪脂肪间充质干细胞成脂分化及Krüppel样因子2表达的影响

    作者:刘京霞;李方正;郇延军;姜忠玲;宋学雄

    目的 探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化的影响,及姜黄素调控成脂分化的机制.方法 用不同浓度姜黄素处理猪AMSCs,用MTT比色法检测姜黄素对猪AMSCs增殖的影响,用油红O染色提取法检测对成脂分化的程度,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测对Krüppel样因子(KLF2)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)2 mRNA表达的影响.结果 当姜黄素浓度为1、5、10lμmol/L用于猪AMSCs时对,AMSCs增殖无明显影响,但高于15.μmol/L时,则具有显著的抑制作用(P<0.05);当姜黄素用于猪AMSCs的成脂诱导分化时,1 ~ 30μmol/L的浓度即能显著抑制成脂分化(P<0.05),其中25 μmol/L浓度获得68.19%的高抑制率;当25 μmol/L姜黄素用于检测KLF2和PPARy2 mRNA的表达,诱导分化2、8和16d的KLF2 mRNA的表达上调率分别达到48.37%、20.56%和9.64%,而PPARγ2 mRNA的表达下调率分别达到16.01%、35.93%和27.27%.结论 姜黄素具有抑制猪AMSCs增殖和成脂分化作用,该抑制作用与姜黄素促进KLF2 mRNA的表达和抑制PPARγ2 mRNA的表达相关.

  • 低温保存脂肪间充质干细胞的生物学特性评价

    作者:李琼;杨慈清;郭志坤;左红波;李慈霞;李和

    目的 探讨低温保存对小鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)体外培养的生物学特性和分化潜能的影响.方法 分离、培养小鼠ADMSCs,取第3代细胞置于液氮深低温(-196℃)冻存12个月后复苏.MTT法测定ADMSCs的增殖活性;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老;免疫细胞化学方法检测细胞表面分子CD73、CD90和CD105;条件培养基诱导后,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白(cTnT),茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色检测成骨、成脂诱导分化潜能,Real time-PCR检测cTnT、Gata4、Ost和Runx2.未经低温保存的第3代ADMSCs为对照.结果 低温保存的ADMSCs其增殖活性、衰老率与未冻存细胞比较差异无显著性(P>0.05).诱导后ADMSCs的cTnT阳性表达、茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色呈阳性反应,冻存组与对照组比较差异无显著性(P>0.05).结论 低温保存对ADMSCs体外生长特性和成心肌、成脂肪细胞、成骨细胞的分化潜能差异无显著性.

  • 趋化因子-8对高糖环境下脂肪间充质干细胞迁移能力的影响

    作者:张鹏;张晓东;姜杨;孙石柱;张善强;沈雷

    目的 探讨高糖环境下,趋化因子-8(CXCL-8)对人脂肪间充质干细胞(hADMSCs)迁移能力的影响和机制.方法 建立高糖环境模型;在高糖条件下,建立CXCL-8实验组、Akt抑制剂组和高糖对照组,在正常条件培养的hADMSCs为正常对照组;分别用细胞划痕实验、Transwell细胞小室实验检测CXCL-8对hADMSCs的迁移能力影响,并用Western blotting、ELISA实验检测Akt、信号转导和转录激活因子(STAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)等蛋白表达.结果 相对高糖对照组,CXCL-8实验组hADMSCs细胞划痕面积闭合率和Transwell细胞小室迁移率均增高(P<0.01);而Akt抑制剂组hADMSCs细胞划痕面积闭合率或Transwell细胞小室迁移率比CXCL-8实验组皆降低(P <0.01);CXCL-8实验组磷酸化Akt、mTOP、STAT3蛋白表达增高,CXCL-8实验组上清液的VEGF、表皮细胞生长因子(EGF)含量明显增高(P<0.01);而Akt抑制剂组hADMSCs分泌能力下降(P<0.01).结论 高糖环境下,CXCL-8通过Akt-STAT3通路促进间充质干细胞(MSCs)旁分泌VEGF等因子,促进MSCs迁移,对招募宿主细胞归巢,促进组织损伤修复具有重要意义.

  • 脂肪间充质干细胞CD73亚群心肌分化能力评价

    作者:张珉;高建辉;李琼;余霞;王晶晶;郭志坤

    目的 探讨CD73+和CD73-脂肪间充质干细胞(ADMSCs)两个亚群向心肌分化能力的差异,筛选出心肌分化优势亚群,为进一步开展细胞治疗心肌疾患提供实验参考.方法 流式细胞仪分选CD73+/CD73-ADMSCs亚群,HE染色观测其形态.体外5-氮杂胞甙(5-aza)诱导CD73 +/CD73-亚群,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT),Real-time PCR检测cTnT、Gata-4变化;4'6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记两个亚群后,移植到大鼠心肌内,免疫荧光法检测移植细胞cTnT表达.结果 CD73+ ADMSCs形态以小细胞为主呈细长形或纺锤状,CD73-细胞以宽大扁平或方形等为主.体外成心肌诱导后,CD73+ ADMSCs心肌特异性cTnT表达率为45.5%、CD73-亚群为5.75%,基因水平上CD73+亚群表达cTnT、Gata-4明显高于阴性亚群(P<0.01).体内CD73+亚群较阴性亚群高表达cTnT.结论 CD73+ ADMSCs较CD73-ADMSCs具有更高向心肌分化的潜能,CD73+ ADMSCs可能更具有心肌治疗的前景.

  • Krüppel样因子4在猪脂肪间充质干细胞成脂分化过程中的表达模式

    作者:李秀;李方正;郇延军;高霞;姜忠玲;宋学雄

    目的 探讨猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化过程中Krüppel样因子4(KLF4)的表达模式.方法 采用F3代以上猪AMSCs进行成脂诱导分化,用油红O染色提取法检测成脂分化程度,用RT-PCR和Real-time PCR检测KLF4的表达模式.结果 猪AMSCs成脂诱导分化,诱导3d开始出现脂肪滴,诱导10 d时成脂分化率达60%;RT-PCR检测,在诱导分化2、4、8、12和16d时都能检测出KLF4的表达;经Real-time PCR检测,上述各诱导分化时间点的表达量分别为对照组的1.6657±0.2269、2.6790±0.0524、2.6293±0.0280、2.3633±0.1568和2.6146±0.1575倍.这些结果表明,KLF4的表达在猪AMSCs成脂诱导分化的第2天就有显著上调,表达高峰出现在成脂分化的第4天,此后持续高表达.结论 在猪AMSCs成脂分化过程中,从早期到晚期,KLF4发挥持续性的调控作用.

  • 不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化

    作者:齐立杰;李琼;郭志坤

    目的 探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化. 方法 用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化. 结果 两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致.SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2~7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)%、(4.21±1.22)%、(9.00±0.98)%、(11.20±1.24)%、(9.50±2.19)%和(13.20±2.93)%;24月组分别为(8.67±1.05)%、(10.23±0.98)%、(12.80±0.78)%、(17.10±1.13)%、(19.80±1.59)%和(24.70±1.86)%.PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2~ 7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11,3±1.63)%;24月组4~7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%. 结论 老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化.

  • 心肌微环境与5-氮杂胞苷诱导脂肪间充质干细胞心肌分化的差异

    作者:郭志坤;常丹阳;刘玲玲;李琼

    目的 探讨体内心肌微环境及体外5-氮杂胞苷(5-aza)诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用差异.方法 取小鼠腹股沟的皮下脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs),对其进行表面标记和成骨、成脂分化能力鉴定.选取生长状态良好的第3代ADMSCs,分为5-aza体外诱导组、体内心肌移植组,体外诱导3周以及体内移植1周后,采用免疫荧光技术检测特异性心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达.结果 两种诱导方法ADMSCs均表达cTnT,5-aza诱导组3周表达率(33.33±3.79)%,移植组1周表达率(42.93 ±4.04)%,移植组1周较5-aza诱导组3周具有更高的分化效率(P<0.05).结论 体外5-aza化学诱导和体内心肌微环境均可使ADMSCs分化为心肌样细胞,但心肌微环境的诱导分化效率明显高于5-aza的作用.

  • 骨髓、脐带及脂肪来源间充质干细胞的成脂能力存在差异

    作者:池颖;韩之波;徐方运;王有为;冯晓明;陈芳;马凤霞;杜文静;韩忠朝

    间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的来源非常广泛.由于不同组织来源的影响,MSC之间都会存在一定的差异.本研究分析比较脐带、脂肪及骨髓组织来源的MSC的基本生物学特性.从脐带、脂肪和骨髓分离培养MSC,在显微镜下观察这3种来源的MSC的形态(UC-MSC,AD-MSC和BM-MSC),用流式细胞术诱导分化试验及定量荧光PCR分别检测UC-MSC,AD-MSC和BM-MSC的免疫表型、分化能力和过氧化物酶增殖激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)mRNA的表达水平.结果表明,UC-MSC、AD-MSC和BM-MSC的形态都是成纤维细胞样;经罗丹明和DAPI染色后,用共聚焦显微镜观察发现它们的细胞形态类似;这三种来源MSC的免疫表型符合MSC的鉴定标准,而且表达水平一致;这三种来源MSC的成骨分化潜能相似,而成脂分化潜能存在较明显的差异,其中AD-MSC成脂能力强,BM-MSC次之,UC-MSC差.检测脂肪形成早期起重要作用的过氧化物酶增殖激活受体-γ(PPAR-γ) mRNA表达水平在三种来源MSC中的基础表达水平,发现PPAR-γmRNA在AD-MSC中高,在BM-MSC次之,而在UC-MSC中低,与成脂能力的表现相一致.这表明三种来源MSC成脂能力存在差异可能与它们PPAR-γ的基础表达水平有关.结论:UC-MSC,AD-MSC和BM-MSC的形态类似;免疫表型符合MSC鉴定标准,表达水平一致;成骨分化能力相似,而成脂分化能力不同;PPAR-γmRNA表达水平不一.关于差异的相关机制有待进一步研究.

  • 血管周围干细胞在大鼠脂肪组织中的含量及其体外扩增后比例的变化

    作者:徐峰;刘舒云;彭江;卢世璧;孙逊;尹合勇;孙振;余晓明;肖波;张金鑫;袁玫;许文静;郭全义

    目的探索大鼠脂肪组织中血管周围干细胞(PSCs)在脂肪组织细胞中所占的比例,以及体外培养扩增后的大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)中 PSCs 比例的变化,为组织工程自体细胞移植修复骨和软骨损伤的实验研究提供可能的新型种子细胞。
      方法取大鼠的脂肪组织用 II 型胶原酶消化得到血管基质成分(SVF)并且体外培养扩增大鼠 ADSCs 至 P3代,用细胞计数仪及流式细胞仪检测 SVF 细胞密度、活细胞比例、PSCs 含量,检测 ADSCs 中 PSCs 的含量并与CD45–SVF 细胞中 PSCs 含量进行比较。
      结果经细胞计数仪分析,每只大鼠约3 ml 脂肪组织消化所得 SVF 中活细胞比例为(69.31±6.57)%,可收获活细胞(40.69±6.81)×106个。经流式细胞仪检测,每只 SD 大鼠3 ml 脂肪组织中平均可以得到 PSCs 活细胞为(1.60±0.59)×106个,血管外周细胞为(0.18±0.04)×106个,血管外膜细胞为(1.42±0.57)×106个。而体外平面培养扩增的 P3代 ADSCs 中,PSCs 及各细胞亚群的比例并没有随着细胞的扩增而改变(P>0.05)。
      结论大鼠脂肪组织中含有 PSCs,可以直接通过流式分选获取大量 PSCs,不进行体外扩增即可望满足骨和软骨组织工程种子细胞的需要。

  • 成人脂肪间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的实验研究

    作者:夏菁;陈光辉;刘宏斌;王莉

    目的 体外培养并诱导成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分化为心肌样细胞,为心肌细胞的替代治疗提供新的来源.方法 采用消化法和贴壁培养法分离培养ADMSCs,对第3代细胞进行免疫化学鉴定和5-氮杂胞苷(5-aza)诱导,于诱导后第7、14、21和28天行免疫化学鉴定,并测定GATA4和Nkx2.5表达和心房利钠肽(ANP)含量.结果 人脂肪中含有梭形细胞,CD44、CD13、CD105阳性表达,而CD45、CD34、 HLA-DR、Ⅷ因子阴性表达.诱导后细胞排列方向一致,部分细胞聚集成团;结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、肌球蛋白重链和心肌肌钙蛋白T呈阳性表达.有GATA4和Nkx2.5的表达及心房利钠肽的分泌.结论 成人脂肪组织中含有间充质干细胞,且可在5-氮杂胞苷诱导21 d后分化为心肌样细胞.

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