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警惕药源性不孕不育
据统计,约有4％ ～6％的不孕是由药物引起的.据临床观察发现,可导致不孕不育的药物主要有以下几种:抗生素类药物抗生素类药物中多含有激素成分,可导致内分泌失调,尤其是对于男性来说,可导致睾丸细胞代谢下降及供养不足,使生精细胞中的精子浓度下降,引起精子减少,导致不育.大环内酯药物,如红霉素、螺旋霉素、麦迪霉素等,会造成精子发育停顿和有丝分裂减少,使精子被杀伤或被杀死,存活的精子活动力也明显下降.氨基甙类药能阻断初期精母细胞的减数分裂,故对精子发生有负面影响.
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027雌激素和精子发生
迄今为止,人们认为外源性雌激素能引起雄性动物生殖系统发育异常,但作用机制不清楚.近来研究发现,内源性雌激素在精子发生中起重要作用,但如何作用不明确.因此,要全面地认识和评价外源性雌激素和内源性雌激素对精子发生的影响,就有必要对它们影响精子发生的机制进行深入的研究.基于此,本文对近年来这方面的研究进行了综述.本文主要阐述了正常的精子发生过程;从下丘脑-垂体-睾丸轴、睾丸功能、输精管和附睾等几个方面,在细胞和分子水平上阐述了外源性雌激素对雄性生殖系统的影响和可能机制;在细胞和分子水平上,通过雌激素受体基因剔除实验研究和芳香化酶基因剔除实验研究来说明内源性雌激素对雄性生殖系统的影响和可能机制,并比较了剔除雌激素受体α基因、雌激素受体β基因、雌激素αβ基因和芳香化酶基因对雄性生殖系统的影响;后对雌激素研究的进一步发展提出了展望.
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定量聚合酶链反应法对不育患者精子中DAZ基因缺失的诊断
目的:建立测定人精子DAZ基因相对含量的定量聚合酶链反应(PCR)法并应用于检测不育男性精子中DAZ基因的相对含量,以分析其病因.方法:应用定量聚合酶链反应(PCR)法测定了90例精子发生正常男性和50例少、弱、畸精子患者精子中DAZ基因的相对含量.结果:以ZFX/ZFY基因为外部参照,精子发生正常男性精子中DAZ基因的相对含量正常值为1.47±0.293.重复性试验结果表明定量PCR法批内、批间变异系数分别为5.8 %～6.5%、9.5%～10.8%.对不育男性的检测结果发现其中1例少精子症患者DAZ基因相对含量为0.5,明显低于正常值下限,其他不育患者未见明显异常.结论:定量PCR法测定人精子中DAZ基因的相对含量是一种切实可行的检测方法,部分精子中DAZ基因的缺失可能为男性不育的病因.
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精子发生相关CG14片段的组织特异性表达及其与杂交不育的关系
目的:确定精子发生相关CG14片段的组织特异性表达及其与杂交不育的初步关系.方法:采用CG14片段的放射性同位素标记探针对心、肝、肾、脑、睾丸及附睾组织的mRNA进行Northern杂交.将CG14片段转录为RNA作探针,对成年雄性SD大鼠、牦牛、犏牛一代(杂交不育)、犏牛三代(回交生育功能恢复)睾丸组织进行原位杂交.结果:在睾丸组织有一条约1 258 bp的mRNA特异杂交带;在附睾组织有一条约1 351 bp的mRNA特异杂交带,而在心、肝、肾及脑无杂交带.在SD大鼠、牦牛及犏牛三代的睾丸组织冰冻切片存在明显的CG14正义探针阳性杂交信号;在犏牛一代睾丸组织未见特异性阳性杂交信号;在各个组织切片中反义探针均未出现阳性杂交信号.结论:精子发生相关CG14片段在睾丸及附睾组织中特异性表达.在SD大鼠、具有生育能力的牦牛以及生育机能恢复的犏牛三代初级精母细胞中表达CG14片段的mRNA,而在杂种不育的犏牛一代初级精母细胞中未见CG14片段的mRNA.
关键词： 精子发生 Northern杂交 原位杂交 杂交不育 -
核辐射对雄性哺乳动物生育和精子发生损伤效应的研究
本文报道布放于核爆现场和下风向不同距离地区的狗(221只)、恒河猴(90只)、大白鼠(760只)等动物,在核爆炸时受到不同剂量γ-射线、中子、β-射线等外照射、内照射、内外复合照射,核爆炸后进行生育能力和精子发生过程损伤效应的研究结果.从核爆后第1天至动物死亡,开展交配生殖实验,精液参数检测,精子、睾丸的光学显微镜和电子显微镜观察测试.发现核辐射后生育能力分为可生育期、不育期、“恢复”期、永久不育期;精子数量、活率等出现马鞍形变化曲线,睾丸不同生精细胞敏感性有较大差异,初级精母细胞对辐射敏感,成熟精子不敏感.
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生殖激素受体与精子发生关系的研究进展
精子发生是一个非常复杂的过程,尤其受生殖激素调控.生殖激素与其受体结合在精子的发生、分化、成熟中起着至关重要的作用.因此了解精子发生过程中生殖激素受体的变化对精子发生障碍研究有着重要的价值.本文对生殖激素受体的基因突变及多态性与精子发生的关系进行综述,以期为男性不育的诊治提供帮助.
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谷胱甘肽硫转移酶基因多态性与精子形成的研究进展
精子发生受到诸多有序基因的表达与调控,这些特异基因的遗传多态性可能影响精子的发生.谷胱甘肽硫转移酶是一组多功能同工酶,属于Ⅱ相反应代谢的超家族酶系,其通过催化还原型谷胱甘肽与亲电物质发生轭合反应,降低该亲电物质的活性、加速其排泄,达到解毒的效果.研究发现,谷胱甘肽硫转移酶基因多态性与精子发生可能存在密切关系.
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精子发生减数分裂过程中相关基因的研究进展
精子发生是一个复杂的细胞分化过程,其中减数分裂又是为特殊和关键的一步.在这一过程中一些基因的存在与否、表达水平以及与其他因子间的相互作用,对形成具有生育能力的成熟精子有着至关重要的作用.本文依据减数分裂过程中减数分裂启动、同源染色体联会、基因重组、同源染色体解联、染色体分离的顺序,对Stra8、Sycp3、Dmcl、Hspalb、Rec8等相关基因的研究进展进行综述.
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睾丸特异性含溴结构域的蛋白作为潜在男性抗生育药物靶标的研究进展
哺乳动物的四种含溴结构域蛋白(BET)基因在精子发生不同阶段均有表达,其中睾丸特异表达的bromo-domain-containing protein(BRDT)对精子发生必不可少.BRDT在核染色质重组中起关键作用,也参与基因转录和共转录调节.BRDT的第一个溴结构域缺失导致圆形精子细胞错误伸长、精子形态严重缺陷,而圆形精子细胞的错误伸长与减数分裂之后染色质结构异常相关.另外,BRDT是形成圆形精子细胞染色质核仁所必需的;精母细胞和精子细胞缺乏全长的BRDT将会导致转录和可变剪接过程发生改变.动物实验证实一种小分子的BRDT抑制剂(JQ1),具有良好的抗生育作用,这为进一步开发可逆的男性抗生育药物开辟了新思路.
关键词： 睾丸特异性含溴结构域的蛋白 精子发生 男性抗生育 核染色质重组 -
环磷酸腺苷应答元件调节器与精子发生
环磷酸腺苷应答元件调节器(CREM)是cAMP信号途径中的一个主要成分,CREM基因敲除导致小鼠不育,精子发生停止在减数分裂后的精子变态(spermiogenesis)的第一步,减数分裂后的生殖细胞特异的基因表达显著减少,凋亡细胞增多.而CREM突变雌鼠能育,说明CREM对于小鼠精子发生是必须的;同样在精子发生停止在圆形精子阶段的患者中发现CREM基因表达减少或不表达或剪接错误导致产生不正确的产物.本综述主要讨论CREM在精子发生中的作用.
关键词： 环磷酸腺苷应答无件调节器 精子发生 精子变态 -
小鼠精原干细胞的组织形态学及免疫组织化学鉴定
生精干细胞是精子生成的核心因素之一,对生精干细胞发生、发育及其诱导分化等作用机制的研究具有重要意义.小鼠是进行生精干细胞研究较好的实验动物.本文从组织形态学、免疫组织化学和分子生物学三方面对小鼠生精干细胞的鉴定进行介绍.
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卵泡刺激素介导睾酮诱导的精子发生抑制的差异
睾酮(T)诱导的精子发生抑制是男性激素避孕的理论基础,但该方法不能使所有受试者达到无精子,部分受试者维持低水平的精子发生.睾内T水平在无精子组与少精子组之间没有差异,5α还原酶和双氢睾酮(DHT)的作用至今未得到证实.大量的实验和部分临床研究表明,卵泡刺激素(FSH)可能是低促性腺激素和低睾内T状态下维持一定水平精子发生的重要因素,其机制可能是刺激亮A型精原细胞(Ap)增加和Ap→B型精原细胞的转化,以及介导精子排放.但也有完全不同的研究结果,人与动物和人种之间也存在差异.
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精子发生的调节机制及其进展
精子发生是一个复杂的过程，受多种因素的精细调节以确保把正确的基因和表观遗传信息传给子代，包括激素(如FSH、LH、T和E2等)、局部调节因子(如FGF9、SHP-2以及VEGF等)以及miRNAs的调节。本文将从精子发生的激素调节、睾丸内的调节因子、miRNAs与精子发生关系等方面的研究进展进行综述。
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兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用
目的 制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体, 对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用. 方法 利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列.应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274～291个氨基酸多肽(接近C端), 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体.用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价.通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位. 结果 化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274～291个氨基酸多肽, 纯化后两条多肽纯度都达到90%以上, 符合免疫用抗原标准.将多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1∶64 000 和 1∶128 000.应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核. Western blot 研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白. 结论 所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究.LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持.
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大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究
目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究.方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞.分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳.对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质.对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白.进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究.结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高,在A型精原细胞则表达量极少.HSP70-2在粗线期精母细胞中表达量大.用HSP70-2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应.HSP70-2主要表达于细胞质. 结论HSP70-2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用.
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Mahoganoid基因在小鼠精子发生中的动态表达及对雄鼠生殖力影响
目的 探讨Mahoganoid(Md)基因在小鼠精子第一发生波中的动态表达以及其基因缺失对雄性小鼠生殖力的影响. 方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)相对定量法检测Mahoganoid mRNA 在7、14、21、28、35、60 d龄C3H /HeJ雄鼠睾丸中的表达;对Md基因缺失纯合子(Mdnc)及 C3H /HeJ雄鼠精子密度,精子活力,异常精子形态百分率分析,并通过交配实验观察其使正常雌鼠受孕分娩情况. 结果 Mahoganoid mRNA在7d龄C3H /HeJ雄鼠睾丸有低表达,14 d表达开始上调,21 d上升趋势明显,35 d时表达水平为60 d 91%;Mdnc可以与雌鼠交配,但无幼鼠出生;Mdnc雄鼠精子快速前向运动百分比明显低于C3H /HeJ雄鼠精子(P< 0.01). 结论 Mahoganoid基因与精子发生相关,Mahoganoid基因缺失会导致雄性小鼠精子活力下降,影响其生殖能力.
关键词： Mahoganoid基因 精子发生 精子 生育 -
可控性Speedy A基因表达转基因小鼠模型的建立鉴定和表型分析
目的 建立基于Tet-On系统诱导表达的Speedy A基因RNA干扰转基因小鼠模型,探讨Tet-On系统在研究精子发生相关基因中的应用,研究SpeedyA基因下调对精子发生的影响. 方法 体外实验筛选下调SpeedyA基因表达的有效干扰片段,Gateway技术构建包含有效干扰片段和四环素反应元件(TRE)的质粒(pRP.EX2d-TRE＞ shSpdya),受精卵显微注射该质粒建立转基因小鼠并筛选到纯合子,然后与四环素调控的反式激活子(rtTA)转基因小鼠杂交,筛选TRE和rtTA双阳性的小鼠为四环素诱导的SpeedyA-RNA干扰转基因小鼠模型,喂食强力霉素(Dox)诱导RNA干扰片段的表达下调SpeedyA基因的表达;实时荧光定量PCR法检测模型组小鼠与喂食强力霉素的正常小鼠(对照组)SpeedyA的表达差异;HE染色观察睾丸组织形态学变化,TUNEL法检测小鼠睾丸组织的细胞凋亡情况. 结果 模型组小鼠Speedy A基因的表达量与对照组小鼠的表达量相比下降26％;模型组小鼠睾丸组织发生异常的生精细胞凋亡. 结论 成功建立了基于Tet-On系统诱导表达的可控性SpeedyA-RNA干扰转基因小鼠模型,说明可以基于Tet-On系统在体研究精子发生相关基因的功能;SpeedyA基因表达下调可使生精细胞发生异常凋亡.
关键词： TET-ON系统 Speedy A基因 RNA干扰 精子发生 -
SET蛋白对精原细胞株GC-1spg增殖和凋亡的影响
目的 探讨SET蛋白对精原细胞株GC-1 spg增殖和凋亡的影响.方法 使用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃、5％ CO2条件下培养GC-1 spg细胞,分对照组(转染无关序列腺病毒)和实验组[转染SET干涉腺病毒(AdH1-siRNA/SET)];GC-1 spg接种于96孔板或者6孔板,转染腺病毒48 h、72 h后收集细胞,免疫荧光和共聚焦激光扫描显微镜检测SET蛋白在GC-1 spg细胞中的表达与定位;提取细胞总蛋白,Western Blot检测转染前后SET蛋白的表达;细胞计数试剂盒-8 (CCK8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞的数目和增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果 SET蛋白表达于GC-1 spg细胞的胞核和胞浆中,且胞浆分布多于胞核;转染SET干涉腺病毒后,干涉组GC-1 spg细胞中的SET蛋白相对表达量为(0.217±0.044)显著低于对照组的(0.629±0.170) (P＜0.05),同时GC-1 spg细胞的数目减少,增殖减慢,且细胞凋亡率显著增加[干涉组(21.663±1.287)％,对照组(8.813±0.671)％](P均＜0.01).结论 SET蛋白在精原细胞GC-1 spg胞核和胞浆中均有表达,且胞浆分布多于胞核;GC-1 spg细胞中SET蛋白表达降低,能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,提示SET蛋白可能参与调节精子发生的过程.
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睾丸组织高表达基因PRKACG对细胞增殖的影响
目的 研究睾丸组织高表达cAMP依赖蛋白激酶催化亚基γ(protein kinase,cAMP-dependent,catalytic,gamma,PRKACG)基因的功能,观察其对NF-κB信号通路的激活作用和促细胞增殖作用. 方法 采用双荧光素酶报告基因系统,利用体外培养的293T细胞,分析PRKACG对NF-κB信号通路的激活作用,并观察293T细胞的形态学,通过细胞计数和CCK8观察其对细胞生长和细胞增殖的影响. 结果 转染PRKACG的293T细胞相对于对照组转染PCMV-Sport 6的细胞体积变大、饱满、触角伸长；CCK8和细胞计数的结果显示,过表达PRKACG的293T的生长速度明显高于对照组Sport 6.结论 PRKACG能够激活293T细胞的NF-κB信号通路,并可促进细胞增殖,提示PRKACG可能是睾丸发育和精子发生过程中的一个功能基因.
关键词： cAMP依赖蛋白激酶催化亚基γ 男性不育 睾丸发育 精子发生 细胞增殖 -
雄激素的代谢作用
睾丸分泌的雄激素中重要的是睾酮,睾酮对胚胎时期生殖导管和尿生殖窦的分化、精子发生、第二性征的发育和维持、青春期身体的直线生长、性功能以及对下丘脑-垂体的反馈调节等均起着关键性作用.近年来对睾酮在非性器官的生理性和病理性作用产生了兴趣,随着科学技术的进步、经济状况的改善和人均寿命的提高,心血管疾病和糖尿病等代谢性疾病已成为人类的主要杀手,因此,对雄激素代谢作用的关注也在情理之中,现将近几年关于雄激素代谢作用的研究成果介绍如下.
