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精子发生相关CG14片段的组织特异性表达及其与杂交不育的关系
目的:确定精子发生相关CG14片段的组织特异性表达及其与杂交不育的初步关系.方法:采用CG14片段的放射性同位素标记探针对心、肝、肾、脑、睾丸及附睾组织的mRNA进行Northern杂交.将CG14片段转录为RNA作探针,对成年雄性SD大鼠、牦牛、犏牛一代(杂交不育)、犏牛三代(回交生育功能恢复)睾丸组织进行原位杂交.结果:在睾丸组织有一条约1 258 bp的mRNA特异杂交带;在附睾组织有一条约1 351 bp的mRNA特异杂交带,而在心、肝、肾及脑无杂交带.在SD大鼠、牦牛及犏牛三代的睾丸组织冰冻切片存在明显的CG14正义探针阳性杂交信号;在犏牛一代睾丸组织未见特异性阳性杂交信号;在各个组织切片中反义探针均未出现阳性杂交信号.结论:精子发生相关CG14片段在睾丸及附睾组织中特异性表达.在SD大鼠、具有生育能力的牦牛以及生育机能恢复的犏牛三代初级精母细胞中表达CG14片段的mRNA,而在杂种不育的犏牛一代初级精母细胞中未见CG14片段的mRNA.
关键词： 精子发生 Northern杂交 原位杂交 杂交不育 -
藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究
目的: 探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)的作用及机理,为进一步开发该药提供理论依据.方法:采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞,以50%组织细胞感染量(TCID50),细胞病变效应(CPE), MTT法和核酸分子杂交作为评价指标.结果: MTT法测得紫金标的50%抑制浓度(IC50)为29.46 mg·L-1, 50%中毒浓度(TC50) 为1 077 mg·L-1,治疗指数(TI)为36.56,结果表明紫金标有明显抑制HSV-1的作用,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比.紫金标无直接灭活HSV-1的作用,也不能影响病毒的释放;但可干扰HSV-1对宿主细胞的吸附.不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-1gD基因复制和Mrna表达.结论:紫金标具有显著的抗HSV-1的作用,能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV-1gD基因复制与转录.
关键词： 紫金标 单纯疱疹病毒I型 MTT法 斑点杂交 Northern杂交 -
胃癌及其癌前病变相关新基因GP1的克隆
目的 比较胃癌、癌前病变和正常胃黏膜之间基因表达的差异,寻找与胃癌发生、发展相关的基因.方法 用荧光mRNA差异显示技术(FDD)分离差异表达的基因片段,进行PCR再扩增.将扩增的cDNA片段克隆后进行测序,测序结果提交GenBank,经BLAST检索进行同源性分析.差异条带经Northem杂交验证.应用SMART-RACE技术扩增GP1的全长cDNA,并应用生物信息学技术预测该基因的生物学功能.结果 发现1个在胃癌及癌前病变组织中低表达的而且在GenBank数据库中未找到同源序列的cDNA片段,为新的基因片段,GenBank号CD454989.GP1的全长cDNA序列为1362 bp,编码生物学功能未明的具有267氨基酸的蛋白质BAA91562.1.结论 发现了一个在胃癌、癌前病变及正常胃黏膜组织中差异表达的新基因,它可能与胃癌相关.
关键词： 胃癌 癌前病变 mRNA差异显示 Northern杂交 RACE -
食管癌组织中HSP70的基因表达及其多肽复合物的分离
目的 研究食管癌组织中HSP70的表达情况,探索HSP70-多肽复合物分离的可行性途径.方法 采用人HSP70基因探针P17与人食管癌组织中提取的RNA进行Northern杂交;用亲和柱层析法分离HSP70-多肽复合物.结果 癌组织提取物出现了比正常组织较强的杂交信号,从食管癌组织中提取蛋白质,经一系列层析柱(Con-Asepharose、ADP-agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱),分离到HSP70-多肽复合物.结论 HSP70基因在食管癌组织中的高表达,为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了可行性方法.
关键词： HSP70表达 Northern杂交 HSP70-多肽复合物 食管癌 -
X射线照射诱导小鼠junB基因的表达
目的探讨整体照射和不同剂量X射线离体照射后小鼠脾细胞和白血病细胞junB基因的表达.方法3Gy X射线小鼠全身照射及不同剂量X射线照射离体脾细胞和白血病细胞,提取RNA,Northern杂交,定量分析junB mRNA.结果3 Gy X射线全身照射后,小鼠脾细胞junB基因增强明显并迅速,C3H/He小鼠30 min达高峰,BALB/c小鼠60min达高峰;不同剂量X射线照射离体脾细胞和白血病细胞后,junB基因也迅速被诱导,30～60min达峰值,240 min逐渐降回假照组水平.结论iunB基因是一个辐射敏感基因,照射后立即表达,有可能在信号传递中起重要作用.
关键词： junB基因 整体照射 Northern杂交 信号传递 -
RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子表达
目的:应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达.方法:将VEGF基因作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上,构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2,通过RT-PCR、Northern杂交和免疫荧光观察VEGF表达受抑的程度.结果:成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体,RT-PCR发现其在HEK293和HT29细胞系中,能明显抑制VEGF基因的表达,抑制率分别为72%和42%,但在Hela和HepG2细胞中的抑制率仅为28%和13%;Norrhern杂交显示,在HEK293细胞和HT29细胞中,VEGF mRNA明显受抑,抑制率达88%和89%;免疫荧光显示,在HT29细胞中,VEGF蛋白表达的受抑制率为73%.结论:针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制VEGF基因的表达,但在不同细胞系中的作用强度存在差别.
关键词： RNA干扰 血管内皮生长因子 肿瘤细胞 Northern杂交 -
内皮素的mRNA在实验性牙髓炎组织中的表达
目的通过检测内皮素-1(ET-1)在牙髓组织中的表达,探讨ET -1与正常及炎性牙髓组织的关系.方法以改良的单纯穿髓开放法建立Wistar大鼠实验性牙髓炎的动物模型,病理观察分析该型的牙髓组织情况;Northern杂交分析牙髓组织内ET-1的m RNA表达水平.结果 ET-1mRNA在正常组及牙髓炎组均有表达,且在炎症时增长明显,以牙髓炎3天组表达量多.结论 ET-1参与了牙髓炎症的发生与发展过程.
关键词： 内皮素 牙髓组织 牙髓炎 Northern杂交 -
Aggrecan Northern探针的构建及其在组织工程研究中的应用
目的构建猪aggrecan探针,用于对组织工程化软骨及软骨细胞中aggrecan mRNA表达水平的Northern检测.方法取猪软骨细胞,RT-PCR扩增aggrecan球间区域(IGD)片段.将纯化的RT-PCR产物克隆入pUCm-T载体,酶切、测序鉴定.32P标记aggrecan探针,Northern杂交法检测组织工程化软骨和软骨细胞中aggrecan mRNA的表达状况.结果构建产物经鉴定,证实其包含了猪aggrecan IGD的基因序列.Northern结果显示,该探针可用于对组织和细胞中aggrecan mRNA表达水平的检测.结论在组织工程化软骨的研究中,利用Northern杂交法对样品中aggrecan mRNA的水平进行检测,具有良好的灵敏度、可信度和特异性.
关键词： Aggrecan Northern杂交 探针 组织工程化软骨 -
葡萄糖调节蛋白75的表达特性
目的研究不同条件下葡萄糖调节蛋白75基因的表达情况.方法用多组织尼龙膜(multiple tissuenylon,MTN)Northern杂交显示grp75在组织中的表达情况,用Northern杂交方法研究其在缺糖、氧化磷酸化阻滞剂叠氮钠、Ca2+增强剂A23187处理后的表达情况.结果grp75在多组织中都有表达,且表达量大致相同,在缺糖培养的情况下,细胞的grp75基因明显呈上调表达.高浓度的叠氮钠能够使grp75基因表达大幅度上调,A23187使grp75的表达量增加.结论grp75基因在细胞中有构成性表达,能够在多种组织的细胞中发挥作用,grp75基因的表达量和细胞自身的能量代谢有关,为grp75基因对细胞缺糖保护提供了证据;在grp75表达与调控过程中,Ca2+发挥着很重要的作用.
关键词： 葡萄糖调节蛋白75 Northern杂交 钙离子 -
半定量RT-PCR方法检测肝癌相关cDNA克隆的表达
肝癌是我国常见的恶性肿瘤，研究其分子水平发病机制对预防及治疗该肿瘤有着重大现实意义。人类基因组17p13.3在肝癌组织中存在高频率的杂合性缺失(LOH)[1]，提示该区段含有与肝癌发生发展相关的抑癌基因。采用该染色体区段内的人工酵母染色体(YAC)、人工细菌染色体(BAC)筛选人正常肝cDNA文库及外显子捕获(exon trapping)方法，本实验室已找到若干该区域内的cDNA克隆[2]，但这些表达序列与肝癌发生的关系尚未阐明，检测这些表达序列在肝癌和癌旁中的表达差异性无疑是寻找这种相关性的一种有效方法。材料和方法组织标本取 自肝癌手术患者，癌和癌周正常组织均得到病理确证，手术切除后锡纸包裹，立即放置液氮速冻，长期保存于-70℃冰箱。
关键词： 半定量RT-PCR 肝癌相关cDNA Northern杂交 -
卵巢上皮性癌中新基因NM23-H1B的表达
目的研究人类新基因NM23-H1B与卵巢癌的关系.方法收集2003年4月～2004年2月经病理证实的卵巢癌手术切除标本20例及卵巢交界性肿瘤4例(卵巢瘤组),正常卵巢组织4例(对照组).采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交测定NM23-H1B mRNA的表达.结果采用RT-PCR在所有的标本中均检测到NM23-H1B基因mRNA的表达,其在正常卵巢组织中表达较低,而所有的卵巢肿瘤中其表达均出现明显上调,早期卵巢癌中的表达高于晚期.Northern杂交显示,NM23-H1B基因在正常卵巢组织的表达量较低,交界性肿瘤中的表达则与正常组织中相似,而在卵巢癌组织中表达明显增高,早期卵巢癌中的mRNA表达量高于晚期卵巢癌,早期卵巢癌中似乎在分化好(I级)的表达量明显高于分化较差(Ⅱ、Ⅲ级)者.结论NM23-H1B基因与卵巢癌有明显的相关性.
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模拟失重大鼠心肌与血管组织的热应激诱导HSP70表达
为研究模拟失重是否可引起大鼠心肌与血管组织HSP70的诱导表达发生改变, 用尾部悬吊大鼠模型模拟失重, 以研究失重对生理的影响。用Northern杂交与Western 印迹分析检测4周模拟失重大鼠热应激后并在室温下恢复1 h (SUS-H1)或2 h (SUS-H2)心肌、血管组织HSP70表达的变化。结果表明, 热应激后, 各组大鼠心肌组织的HSP72 mRNA表达均显著增加, 但SUS-H2大鼠心肌组织的表达显著低于CON-H2组; 各组大鼠心肌组织HSP72表达也均显著增加, 但SUS-H1与SUS-H2大鼠的表达与相应对照组相比, 则仅呈降低趋势。基底动脉血管组织的HSP72 mRNA与HSP72诱导表达均显著增高; 而在股动脉则两者仅呈降低趋势。上述结果提示: 模拟失重可导致大鼠心肌发生类似衰老的心肌改变; 身体前、后部血管组织HSP70的诱导表达变化可能与血管的分化性适应方向一致。
关键词： 模拟失重 热休克蛋白 Northern杂交 Western印迹分析 心肌 动脉 -
Northern杂交检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在不同肿瘤细胞中的表达水平
目的:从mRNA水平检测五种不同肿瘤细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的表达情况.方法:采用Northern杂交方法.结果:Northern杂交结果显示了两条区带,并且pp-GalNAc-T2在不同肿瘤细胞中存在表达差异.结论:pp-GalNAc-T2基因在不同细胞存在差异表达并可能存在着剪切现象.
关键词： N-乙酰氨基半乳糖转移酶2 Northern杂交 表达差异 -
人类Cyr61基因的组织表达谱分析
目的预测HumCyr61基因的变异剪接转录本,并通过分析其在不同组织中的表达谱进行验证,以便初步探讨HumCyr61基因的功能.方法应用计算机辅助的电子杂交步移策略,通过对比查询数据库返回的ESTs序列和先前克隆的HumCyr61 cDNA序列,预测了HumCyr61基因的变异剪接转录本.将HumCyr61基因片段制备探针后与含有人体8个组织mRNA的MTNI膜杂交,进行表达谱分析.结果计算机预测HumCyr61基因存在3个潜在的变异剪接位点,暗示该基因可能具有3种不同的转录本. Northern杂交结果显示,此基因在所检测的8种组织中除脑组织不表达外,其他7种组织中均存在一种大小基本一致的转录本,约2.4kb,该转录本在肾脏和骨骼肌中高度表达,在胎盘、心脏、肺脏中中度表达,在胰腺、肝脏中低度表达.杂交结果还显示,此基因在胰腺和胎盘组织中存在一种约3.5kb的条带,在骨骼肌中存在另一种约5.0kb的条带.结论电子杂交步移预测及Northern杂交结果证实了HumCyr61基因变异剪接位点的存在.
关键词： HumCyr61基因 变异剪接 Northern杂交 组织表达谱 -
CK13基因与EB病毒DNA在鼻咽癌中的表达及临床意义
目的 探讨细胞角蛋白基因13(CK13)和EB病毒DNA在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及其意义。方法 应用Northern杂交对32例NPC和8例慢性鼻咽炎(CINE)组织进行CK13 mRNA水平检测，同时应用PCR方法进行EB病毒DNA检测。结果 CK13基因在鼻咽炎组织中高表达，在NPC组织中的表达显著下调，下调的频率达65.63%(21/32)。结论 NPC组织的分化可能与CK13基因的表达下调有关。
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Northern印迹方法的改良及其应用
目的:简化Northern印迹的操作步骤,建立安全无毒的RNA凝胶电泳方法.方法:RNA经变性处理后在不含任何化学物质的中性琼脂糖凝胶上电泳,然后用0.05mol/L NaOH溶液转印3h至转印膜上,相继与特异核酸探针杂交,检测不同表达丰度的基因,放射自显影成像.结果:凝胶电泳图显示清晰的28S和18S rRNA条带;Nothern杂交检测出低丰度表达基因.结论:改良的Northern印迹法能够达到传统方法有效变性、分离、检测特异基因表达的效果,垂直凝胶电泳可检测低至5ng的RNA.
关键词： Northern杂交 RNA琼脂糖凝胶电泳 RNA -
低氧诱导因子-1β在低氧性肺动脉高压大鼠肺内表达的研究
目的观察低氧诱导因子-1β(HIF-1β)在低氧性肺动脉高压大鼠肺内的表达,探讨HIF-1在低氧性肺动脉高压发病机制中的作用.方法建立低氧性肺动脉高压大鼠模型,采用地高辛标记的HIF-1β cRNA探针进行大鼠肺组织的Northern杂交和原位杂交.结果低氧4周后大鼠肺动脉压增高,肺血管壁增厚,右心室重量增加.Northern杂交和原位杂交显示:对照组肺组织偶见微弱HIF-β mRNA表达,低氧组HIF-β mRNA强阳性,其主要部位为支气管上皮细胞(强阳性)、支气管周围增生淋巴组织(弱阳性)和肺泡壁细胞(弱阳性),肺动脉上皮细胞和平滑肌细胞未见阳性反应.结论慢性低氧可导致肺动脉高压和肺血管重建;HIF-1β在低氧性肺动脉高压大鼠肺内高水平表达,可能参与了低氧所致肺动脉的病理生理改变和肺动脉高压的形成.
关键词： 低氧诱导因子-1β 低氧性肺动脉高压 原位杂交 Northern杂交 -
ARG1基因的生物信息学和基因表达谱分析
目的:对ARG1进行生物信息学和基因表达谱分析,并对其可能的抗砷机理进行探讨.方法:对砷相关基因ARG1作进一步的生物信息学分析,用不同浓度砷染毒L-02细胞两周以上,抽RNA转膜作Northern杂交,以及人类多组织膜的Northern杂交.结果:Northern杂交结果显示该基因在未染毒L-02细胞中几乎不表达,在砷染毒细胞中该基因的表达量明显增加,在2.3Kb处有一个单一的条带,且随剂量增加表达量亦增加.生物信息学分析显示ARG1具有一个液泡-ATP酶(Vacuolar-ATPase,V-ATPase)样的功能域.结论:ARG1是一条新的全长抗砷相关基因,其抗砷机理可能是通过液泡-ATP酶介导的.
关键词： 砷 基因 生物信息学分析 Northern杂交 -
核糖体蛋白S24基因在胃癌及其癌前病变中差异表达的研究
背景与目的:将胃癌组织、正常胃黏膜及胃癌前病变的基因表达进行比较,找出与人胃癌密切相关的基因片段,为进一步探讨胃癌的发生机制、胃癌的早期诊断和治疗方案提供重要的理论根据.材料与方法:应用荧光mRNA差异显示技术(Fluorescent mRNA differential display,FDD)分析3例胃癌、3例正常胃粘膜、3例胃癌前病变组织,分析基因差异表达情况.分离差异表达基因片段,进行PCR扩增.将cDNA片段测序,测序结果提交Genbank,经BLAST软件检索与同源性分析.选取其中差异表达的核糖体蛋白S24(Ribosomal protein S24,RPS24)基因,应用Northern杂交进行验证,并进一步对RPS24基因进行基因表达系列分析和组织表达谱分析.结果:mRNA差异显示发现RPS24基因在胃癌组织中的表达明显高于癌前病变和正常胃黏膜组织,并且Northern印迹验证阳性.基因表达系列分析和组织表达谱分析发现RPS24基因在多种肿瘤组织中表达增高以及分布广泛.结论:与非癌组织相比,RPS24基因在胃癌中表达明显增高,RPS24的高表达可能与胃癌的发生、恶性进展有关.
关键词： 胃癌 mRNA差异显示 RPS24基因 Northern杂交 -
HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究
背景与目的:对人的胃癌、食道癌及宫颈癌的癌组织中HSP70基因的表达进行研究,以了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供依据.材料与方法:由医院手术室提供癌组织(胃癌、食道癌、宫颈癌)样本,分离出癌组织、癌旁组织和正常组织,分别按异硫氰酸胍法提取RNA,并进行1%琼脂糖电泳,再将RNA从凝胶中转移到(Northem blot)滤膜中,之后采用人的HSP70基因探针P17与人的胃癌、食道癌及宫颈癌的癌组织中提取的RNA进行Northern杂交.结果:从胃癌、食道癌、宫颈癌样本分离的癌组织均出现了较相应正常组织强的杂交信号.结论:HSP70基因癌组织中高表达,表明该基因在组织癌变过程中起着重要的作用.从而为了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供了有价值的证据.
关键词： HSP70表达 Northern杂交 胃癌 食道癌 宫颈癌
