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独活寄生汤对膝骨性关节炎退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA表达的影响
目的:观察独活寄生汤血清对膝骨性关节炎退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA表达的影响.方法:选择6例患者标本均来源于云南省中医医院骨科膝骨性关节炎住院患者,行手术截取的新鲜退变软骨组织,采用组织块法培养原代细胞;MTT法检测传代第一代细胞生长情况,并绘制生长曲线;制备独活寄生汤大鼠含药血清;均取传代第一代的退变软骨细胞,配制5％、10％、20％独活寄生汤含药血清及相应体积比浓度的生理盐水血清作为对照;MTT法检测不同浓度的独活寄生汤血清对退变软骨细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR检测不同给药时间点各组退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA的表达.结果:退变软骨细胞传代第一代生长曲线见传代第8天时细胞增殖达到顶峰,故选择细胞传代第8天为给药干预时间点;与含同体积比的生理盐水血清组比较,不同浓度的独活寄生汤血清可对退变软骨细胞增殖产生促进作用(P＜0.01),尤以10％独活寄生汤血清更为明显(P＜0.05);与含同体积比生理盐水血清组比较,不同时间点的5％、10％、20％独活寄生汤血清干预后的退变软骨细胞Aggrecan mRNA的表达均上调(P＜0.01),Collagen Ⅹ mRNA的表达均下调(P＜0.01),且以10％独活寄生汤血清组的作用为明显(P＜0.05).结论:独活寄生汤可能通过调节退变软骨组织的胶原及其蛋白多糖的表达而产生延缓膝骨性关节炎退变软骨组织的部分作用.
关键词： 膝骨性关节炎 退变软骨细胞 独活寄生汤 Aggrecan Collagen Ⅹ -
猪软骨细胞老化过程中Aggrecan的表达及其糖链分子结构的改变
本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系.取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞,RT-PCR检测aggrecan球间区域(interglobular domain, IGD)mRNA的表达状况;阿利新兰(Alcian Blue)法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAG)的含量和糖链的分子结构.结果显示aggrecan IGD mRNA的表达在P4、P5细胞内明显降低(P＜0.05);GAG的合成也在P4、P5时显著减少(P＜0.05),但这2项指标的变化趋势之间无显著相关性.而长链/高度硫酸化的GAG由P4软骨细胞开始,绝对含量和相对含量均显著减少(P＜0.01),其与aggrecan IGD mRNA的变化趋势有显著相关性(P＜0.01) .由此可见,体外培养软骨细胞中aggrecan的表达合成和细胞老化有密切关系.aggrecan IGD mRNA的表达降低与aggrecan中长链/高度硫酸化GAG的合成代谢过程受阻可能是影响老化细胞成软骨能力的重要因素之一.
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骨关节病时关节软骨细胞基质基因表达的改变
关节软骨的研究对于探索骨关节病(OA)的发病机制和治疗方案具有重要意义.Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体(aggrecan)是软骨细胞启动修复机制的主要产物.在骨关节病时,其合成和降解也将发生特异性变化.本文综述了有关文献,指出关节软骨Ⅱ型胶原和aggrecan比例失衡是OA的病因之一.在OA进程中.Ⅱ型胶原和aggrecan特殊的合成和降解方式也将加剧OA病变.结合TMJOA的特点,提出软骨化生是决定TMD转归的关键.
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蛋白聚糖-Aggrecan G1区诱导小鼠脊柱炎和骶髂关节炎模型的建立
目的 建立强直性脊柱炎BALB/c小鼠实验动物模型,探讨人Aggrecan G1区纯化蛋白在脊柱炎和骶髂关节炎发病中的作用.方法 人Aggrecan G1纯化蛋白和弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,诱导产生脊柱炎和骶髂关节炎,建立强直性脊柱炎实验动物模型.采用Micro-CT对小鼠骨骼进行3D重建和组织病理学方法鉴定脊柱炎小鼠的发病程度和病理学特征.结果 用人Aggrecan G1区纯化蛋白和弗氏完全佐剂免疫后,实验小鼠脊柱炎和骶髂关节炎的发生率分别为46％和9％.组织病理学显示,椎间盘间隙变窄,局部大量软骨细胞聚集,骨赘形成.micro-CT 3D重建显示,椎间盘间隙变窄,骶髂关节面骨侵蚀.结论 成功建立和鉴定了人Aggrecan G1区纯化蛋白诱导的小鼠脊柱炎实验动物模型,为深入研究强直性脊柱炎的发病机制奠定实验基础.
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ADAMTS4在心肌梗死大鼠心脏中的表达
目的 检测ADAMTS4、Versican、Aggrecan在心肌梗死大鼠心脏中的表达.方法 选择雄性Wistar大鼠构建心梗模型,随机分配15只人心梗组,5只入假手术组.手术后3d处死大鼠,取左心室制作冰冻切片,再采用免疫组织化学法检测ADAMTS4、Versican及Aggrecan蛋白表达.结果 ADAMTS4在梗死边缘区域心肌细胞中有表达;在梗死周围区域毛细血管内皮细胞中ADAMTS4有弱表达,Versican呈强表达;Aggrecan在心梗组及假手术组的心肌组织及血管内膜均未见表达.结论 ADAMTS4参与心梗后的炎症反应,且心梗后的血管中存在着ADAMTS4对Versican的降解;Aggrecan则未参与心梗的病理生理过程.
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督脉电针联合神经干细胞移植治疗脊髓全横断损伤后aggrecan的表达变化
目的:观察督脉电针联合神经干细胞( NSCs)移植治疗脊髓损伤对硫酸软骨素蛋白多糖aggrecan的表达影响.方法:成年SD大鼠随机分为脊髓损伤对照组、督脉电针组、NSCs移植组以及督脉电针联合NSCs移植组.建立成年大鼠第9～10胸椎段脊髓全横断模型.其中电针组和电针联合NSCs组于术后当天进行电针治疗.用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内aggrecan的表达.结果:脊髓损伤对照组aggrecan的表达较正常组增加；术后14 d,督脉电针组、NSCs移植组和电针联合NSCs移植组的aggrecan表达较损伤对照组均有减少；术后28 d,这3组的aggrecan表达仍保持较低水平；aggrecan的表达变化以督脉电针组和电针联合NSCs移植组为明显.结论:督脉电针与NSCs移植联合应用能降低脊髓损伤后aggrecan的表达,从而减弱aggrecan对轴突再生的抑制作用,这可能是两者联合治疗促进脊髓损伤修复的可能机制之一.
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CRELD1基因过表达对心脏瓣膜相关基质蛋白的影响
目的 探讨CRELD1基因过表达对心脏瓣膜相关基质蛋白的影响.方法 采用PCR技术获得CRELD1基因,利用质粒pcDNA3.1(一)构建目的基因的真核表达载体,酶切及DNA测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染人胚肺成纤维细胞株(HFL-I)(重组质粒组),以空载体转染细胞和未转染细胞分别作为转染对照组和空白对照组.采用Real-TimePCR技术和Western blotting方法检测细胞中心脏瓣膜基质蛋白Tenascin-C和Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量.结果 重组质粒测序鉴定结果与GenBank数据库比对序列一致.重组质粒组HFL-I中Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量均显著低于转染对照组和空白对照组(P＜0.05);各组HFL-I中Tenascin-C的mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CRELD1基因过表达时可以下调人胚肺成纤维细胞中心脏瓣膜基质蛋白Aggrecan的表达量,为阐明CRELD1基因在房室间隔缺损中的作用提供了一定的理论基础.
关键词： CRELD1基因 过表达 Tenascin-C Aggrecan 房室间隔缺损 -
Aggrecan Northern探针的构建及其在组织工程研究中的应用
目的构建猪aggrecan探针,用于对组织工程化软骨及软骨细胞中aggrecan mRNA表达水平的Northern检测.方法取猪软骨细胞,RT-PCR扩增aggrecan球间区域(IGD)片段.将纯化的RT-PCR产物克隆入pUCm-T载体,酶切、测序鉴定.32P标记aggrecan探针,Northern杂交法检测组织工程化软骨和软骨细胞中aggrecan mRNA的表达状况.结果构建产物经鉴定,证实其包含了猪aggrecan IGD的基因序列.Northern结果显示,该探针可用于对组织和细胞中aggrecan mRNA表达水平的检测.结论在组织工程化软骨的研究中,利用Northern杂交法对样品中aggrecan mRNA的水平进行检测,具有良好的灵敏度、可信度和特异性.
关键词： Aggrecan Northern杂交 探针 组织工程化软骨 -
益气活血方对非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞ColⅡ、Aggrecan及TIMP-1 mRNA的影响
目的 探讨益气活血方对人体非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)及金属基质蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的表达的影响.方法 选择非破裂型腰椎间盘突出症(LDH)的住院患者经手术摘除的腰椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清.将传代第1代的退变髓核细胞分为3组,实验组分别予体积比为5％、10％的益气活血方血清DMEM培养液;对照组加入生理盐水血清DMEM培养液.通过Realtime PCR检测ColⅡ、Aggrecan、TIMP-1 mRNA的表达.结果 与生理盐水组比较,益气活血方血清可上调非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达(P＜0.05),未检测出TIMP-1 mRNA的变化.结论 益气活血方可能通过影响非破裂型腰椎间盘突出髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan含量,进而发挥防治非破裂型腰椎间盘突出髓核细胞的退变作用.
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益气逐瘀利水方对破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞ColⅡ及Aggrecan mRNA的影响
目的:探讨益气逐瘀利水方对人体破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA的表达的影响.方法:选择破裂型LDH的住院患者经手术摘除的腰椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清.将传代第1代的退变髓核细胞分为3组,实验组分别予体积比为5％、10％的益气逐瘀利水方血清DMEM培养液;对照组加入生理盐水血清DMEM培养液.通过Realtime PCR检测ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达.结果:与生理盐水组比较,体积比为10％的益气逐瘀利水方血清可上调破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达.(P＜0.05)结论:益气逐瘀利水方可能通过影响破裂型腰椎间盘突出髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan含量,进而发挥防治破裂型腰椎间盘突出髓核细胞的退变作用.
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低频脉冲电磁场影响超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记BMSCs的增殖和成软骨分化
目的：探讨外加低频脉冲电磁场（low frequency pulsed electromagnetic fields，LFPEMFs）对超顺磁性氧化铁纳米颗粒（superparamagnetic iron oxide nanoparticle，SPIO）标记的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）增殖和成软骨分化的影响。方法体外培养BMSCs并进行SPIO标记。将SPIO标记的细胞分为4组并给予不同干预：LFPEMFs组,成软骨诱导组,LFPEMFs+成软骨诱导组,对照组。采用CCK8检测各组细胞的增殖情况，PCR及免疫荧光染色检测BMSCs成软骨分化水平。结果 CCK8检测表明，LFPEMFs刺激促进细胞增殖；分化培养21 d时，LFPEMFs+成软骨诱导组细胞的Aggrecan和CollagenⅡ表达量明显高于对照组（P<0.05）。结论 LFPEMFs刺激可以促进SPIO标记的BMSCs的增殖和成软骨分化。
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人和猪软骨细胞aggrecan球间区域基因的克隆和同源性分析
目的分析人和猪软骨细胞 aggrecan球间区域( interglobular domain, IGD)蛋白酶水解位点的同源性,在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义.方法通过 RT-PCR扩增人和猪软骨细胞 aggrecan IGD片段,将纯化的 RT-PCR产物克隆入 T 载体,通过测序、软件分析及 Northern杂交,比较二者基因和氨基酸序列的同源性.结果人和猪 aggrecan IGD cDNA有 84%的同源性.经 PSI-BLAST(Position Specific Iterated BLAST)分析,相关的氨基酸序列的同源性也达到 84%,表明其在进化过程中高度保守. Northern杂交可见,人和猪的 aggrecan IGD探针对猪总 RNA均有明显的分子量大小相同的放射自显影条带. 结论猪软骨细胞可以作为组织工程化软骨研究的模型,对软骨细胞老化和体内构建软骨的降解等过程中蛋白酶参与的 aggrecan水解反应进行深入的探讨,为完善组织工程化软骨的构建提供分子水平的依据.
