首页 > 文献资料
-
原位明胶酶谱法检测胶质瘤18例基质金属蛋白酶活性
胶质瘤是常见脑肿瘤之一,具有肿瘤早期就能侵袭周边正常脑组织的特性,尤其是胶质母细胞瘤,恶性度高.基质金属蛋白酶(MMPs)是一组锌依赖性内肽酶,与肿瘤细胞侵袭、转移相关的细胞外基质(ECM)降解过程密切相关[1],目前已知有26 种,其中对MMP-2 和MMP-9 的研究比较深入.MMPs 的活性会受到基因转录水平、无活性酶前体经蛋白水解作用而激活,以及特异性抑制因子(TIMP)等的影响.本研究的目的是了解胶质瘤有无表达MMPs活性、活性具体表达的部位,以及与恶性度的关系.
-
CD26/DPPIV结构和功能研究进展
CD26是一种高度保守、分布于多种细胞的Ⅱ型跨膜糖蛋白.目前其三级结构已清楚.初因发现它具有蛋白水解作用,故又称二肽肽酶IV(DPPIV).DPPIV的天然底物多种多样,在体内执行多种重要功能.它还是细胞膜受体和共刺激分子,从而参与机体的免疫调节、细胞移行、细胞黏附和细胞调亡过程,故与多种疾病的发病有关.各种CD26抑制剂对自身免疫性疾病及细胞增殖性疾病的治疗具有重要意义.
-
雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶向降解的实验研究
目的:研究合成的嵌合分子DHT-PROTAC通过泛索蛋白酶体途径对雄激素非依赖性前列腺癌C4-2B细胞表达雄激素受体(AR)的靶向降解作用,以及AR降解后该细胞分泌、增殖和凋亡的变化. 方法:实验细胞分3组:空白对照组(RPM1 1640培养液)、溶剂对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]及实验组(100 μmol/L DHT-PRO-TAC);制备细胞爬片,免疫组化和Western印迹检测CA-2B细胞中AR蛋白和Caspase-3表达情况的改变;ELISA法测定细胞培养液上清中PSA的浓度改变.噻唑兰(MTT)比色法检测细胞增殖抑制,细胞计数并绘制生长曲线观察细胞增殖能力. 结果:与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后,CA-2B细胞中表达的AR蛋白明显减少,Western印迹检测结果表现为信号减弱(P<0.06);免疫组化见AR阳性细胞明显减少,阳性率降低达40%;与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后细胞培养上清液中PSA浓度降低约60%(P<0.05).MIT试验显示随着DHT-PROTAC处理时间延长,对CA-2B细胞的抑制率逐渐增大,细胞生长呈时间依赖性抑制(P<0.05). 结论:嵌合分子DHT-PROTAC能靶向降解CA-2B细胞表达的AR,抑制细胞分泌PSA,并抑制该细胞的体外生长和增殖.
关键词： 雄激素受体 雄激素非依赖性前列腺癌 蛋白水解作用 嵌合分子 -
嵌合分子靶向降解前列腺癌LNCaP细胞表达的雄激素受体
目的 观察嵌合分子双氢睾酮-蛋白靶向降解嵌合分子(DHT-PROTAC)通过泛素蛋白酶体途径易化降解前列腺癌LNCaP细胞表达的雄激素受体以及雄激素受体降解后该细胞增殖和活力的变化.方法 细胞爬片免疫组织化学和Western blot技术检测DHT-PROTAC处理后LN-CaP细胞中雄激素受体蛋白的改变.DHT-PROTAC分别处理前列腺癌LNCaP细胞、PC-3细胞、肾癌786-O细胞,嚷唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,细胞计数并绘制生长曲线观察细胞增殖能力.结果 随着DHT-PROTAC浓度升高,LNCaP细胞表达雄激素受体减少,并呈剂量依赖性,Westernblot检测结果 表现为信号减弱,细胞免疫组织化学见阳性细胞明显减少,随着处理浓度升高,细胞阳性率分别为93.22%、85.65%、61.94%、1.71%.DHT、ALAPYIP-(Arg)8肽段能拮抗DHT-PRO-TAC作用,蛋白酶体抑制剂抑制雄激素受体降解;噻唑蓝(MTT)细胞活力试验及细胞计数显示LNCaP细胞活力和增殖受抑制.结论 嵌合分子DHT-PROTAC能易化降解LNCaP细胞表达的雄激素受体,并抑制该细胞的生长和增殖.
-
人和猪软骨细胞aggrecan球间区域基因的克隆和同源性分析
目的分析人和猪软骨细胞 aggrecan球间区域( interglobular domain, IGD)蛋白酶水解位点的同源性,在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义.方法通过 RT-PCR扩增人和猪软骨细胞 aggrecan IGD片段,将纯化的 RT-PCR产物克隆入 T 载体,通过测序、软件分析及 Northern杂交,比较二者基因和氨基酸序列的同源性.结果人和猪 aggrecan IGD cDNA有 84%的同源性.经 PSI-BLAST(Position Specific Iterated BLAST)分析,相关的氨基酸序列的同源性也达到 84%,表明其在进化过程中高度保守. Northern杂交可见,人和猪的 aggrecan IGD探针对猪总 RNA均有明显的分子量大小相同的放射自显影条带. 结论猪软骨细胞可以作为组织工程化软骨研究的模型,对软骨细胞老化和体内构建软骨的降解等过程中蛋白酶参与的 aggrecan水解反应进行深入的探讨,为完善组织工程化软骨的构建提供分子水平的依据.
