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029环境抗雄激素检测方法
环境抗雄激素是内分泌干扰物中的一大类,可与雄激素受体(AR)竞争性结合,阻止体内雄激素与AR的结合,从而抑制雄激素活性,发挥抗雄激素作用.其对人类生殖健康的影响已引起人们广泛的关注,因此建立一套快速有效的筛检测试环境抗雄激素的方法已成为当务之急.为了综合评价环境抗雄激素,需使用成套的体内和体外方法.体内试验主要包括Hershberger试验、青春期雄鼠试验等,体外试验主要包括雄激素受体结合试验、雄激素依赖细胞增埴筛选试验、雄激素依赖基因转录试验等.
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028环境抗雄激素影响及机制
环境内分泌干扰物及其对人类生殖健康的影响和作用机制是当前人们关注的一个焦点.抗雄激素是内分泌干扰物中的一大类,目前已鉴定出多种环境抗雄激素,如烯菌酮、p,p'-DDE等,这些化学物质多为雄激素受体拮抗剂,能抑制雄激素反应基因的转录,导致一系列生殖功能的紊乱.
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大肠癌雄激素受体表达的临床病理研究
目的探讨大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AR)的含量与大肠癌发生发展的关系.方法应用放射配体结合分析法(RBA)测定38例行手术切除的大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体的含量;同时用放射免疫法(RIA)测定大肠癌患者及正常人血浆雄激素(睾酮T)的水平,结合临床病理资料进行统计分析.结果癌组织与癌周粘膜组织相比,AR含量明显升高,结肠癌组织蛋白AR:56±10pmol/g-1;直肠癌组织AR蛋白:57±12pmol/g-1;结肠癌和直肠癌周粘膜组织AR蛋白分别为34±10pmol/g-1和27±12pmol/g-1)(P＜0.01);高分化的癌组织蛋白AR含量(63±8pmol/g-1)明显高于低分化者(38±4pmol/g-1(P＜0.01);大肠癌患者血浆睾酮水平轻度增加;但白细胞AR表达:男(1186±127)位点·细胞-1;女(894±109)位点·细胞-1明显高于正常对照组男(785±112)位点·细胞-1;女(697±105)位点·细胞-1(P＜0.01).结论大肠癌的发生可能与癌组织AR含量升高有关,AR含量与肿瘤的分化程度存在相关性.
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雄激素及其受体对雄性动物颌下腺影响的研究进展
颌下腺与男性生殖功能的关系是近年来研究热点.大量实验证明颌下腺分泌的表皮生长因子、神经生长因子等生物活性多肽对雄性生殖系统的发育和生理功能有重要的调节作用.反之,雄激素对颌下腺的发育、形态和功能也有很大影响,二者之间存在相互反馈机制.综述雄激素受体在雄性动物颌下腺各类细胞中的定位、分布差异性以及雄激素对雄性动物颌下腺形态和发育的影响,重点介绍雄激素对颌下腺分泌活动的影响及其机制.
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男性生殖内分泌系统调节的研究进展
男性的主要生殖器官为睾丸和附属性器官.睾丸由曲细精管和间质细胞构成,其主要功能是产生精子、分泌以睾酮为主的雄性激素.睾酮通过和靶细胞内的雄激素受体结合对机体产生一系列的生理调控作用.
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17β-雌二醇通过HPGA和ERα干扰睾酮合成调控精子发生
目的 观察17β-雌二醇(E2)暴露对雄性大鼠的生殖内分泌毒性,探讨其调控精子发生的机制.方法 E2经口灌胃染毒Wistar大鼠8周,剂量为1.00、0.50、0.10和0.01mg·kg-1·d-1,对照组为玉米油.观察一般状况,检测精子参数,利用放免方法检测血清激素T、E2、LH和FSH的水平,原子吸收法检测金属Zn和Ca水平,荧光定量PCR检测睾丸中类固醇急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)转录水平,免疫印迹检测雌激素受体(ERα和ERβ)和雄激素受体(AR)的蛋白水平.结果 染毒8周后睾丸重量及系数显著减轻(P＜0.01)；血清T在各剂量组出现剂量相关的下降,E2出现剂量相关的增加,各剂量组差别均具有统计学意义(P＜0.01).LH和FSH也有不同程度降低.血清中Zn的水平降低,在0.50和1.00mg/kg剂量组差别具有统计学意义(P＜0.01).附睾尾精子计数明显减少,精子存活度下降.RT-PCR结果表明睾丸内StAR、P450scc mRNA水平下降.ERα蛋白表达显著增加,AR蛋白表达显著减少,差别均具有统计学意义(P＜0.01).结论 青春期E2暴露可影响睾丸发育,包括睾酮合成和精子发生,其机制可能是循环雌激素的增加干扰下丘脑-垂体-性腺轴(HPGA)间接作用于睾丸间质细胞,还可能通过ERα途径直接抑制了睾酮合成酶.金属Zn可能参与了生殖毒性作用.
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雄激素受体在食管鳞中的表达及其临床意义
目的:研究雄激素受体(AR)在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法对67例食管鳞癌组织及30例正常食管黏膜中AR进行检测,结合临床病理特征进行分析.结果:AR表达于细胞核,阳性表达率为80.6%,AR在食管鳞癌中的表达水平明显高于正常食管黏膜组织(P<0.01).AR在食管鳞癌的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结反应增生、淋巴结转移及患者性别有关(P<0.05),而与病灶大小、部位、年龄无关(P＞0.05).结论:AR与食管癌生物学行为关系密切,可望成为食管癌治疗的新靶点,食管癌患者预后评价的新指标.
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食管鳞癌中雄激素受体与缺氧诱导因子-1α的表达关系及其临床意义
目的:探讨雄激素受体(AR)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌患者中的表达及其相互关系.方法:采用免疫组织化学SP法对67例食管鳞癌及30例正常食管组织中AR与HIF-1α进行检测,结合临床病理特征进行分析.结果:AR与HIF-1α在食管鳞癌中的表达水平明显高于正常食管黏膜组织(P＜0.01).AR与HIF-1α的表达与食管鳞癌的分化程度、浸润深度、淋巴结反应增生、淋巴结转移、临床分期有关,且AR与性别有关(P＜0.05).AR与HIF-1α之间明显相关性(r=0.277,P＜0.05).结论:AR、HIF-1α与食管癌生物学行为关系密切,二者的过度表达可能共同参与了食管癌的发生、发展过程.
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电针不同穴位对多囊卵巢综合征大鼠高雄激素血症及卵巢雄激素受体表达的影响
目的:观察电针不同穴位对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠高雄激素血症和卵巢雄激素受体(AR)表达影响的作用差异,探讨电针治疗PCOS的可能机制.方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、足三里组、关元组、三阴交组、综合组,每组10只.采用来曲唑灌胃诱导PCOS模型.足三里组、关元组、三阴交组电针干预相应穴位,综合组同时电针所有穴位,每次20 min,每日1次,连续14 d.治疗后测量大鼠体质量、卵巢质量,HE染色观察卵巢形态结构,酶联免疫吸附法检测血清性激素水平和性激素结合球蛋白(SHBG),计算游离雄激素指数(FAI),免疫组化法检测卵巢卵泡AR的表达.结果:与对照组相比,模型组大鼠体质量和卵巢质量明显增加(P<0.01),血清睾酮(T)和FAI水平明显升高(P<0.01),雌二醇(E2)和SHBG水平明显降低(P<0.01),卵巢晚期卵泡AR蛋白表达增加(P<0.05).各电针组与模型组比较,体质量均明显减轻(P<0.05),卵巢形态改善,T和FAI显著降低(P<0.01),足三里组、关元组和综合组E2、SHBG明显升高(P<0.01,P<0.05),关元组卵巢质量明显降低(P<0.01).关元组和三阴交组晚期卵泡AR蛋白表达较模型组降低(P<0.05,P<0.01).结论:电针不同穴位对PCOS大鼠高雄激素血症和卵巢多囊形态均有改善作用,不同穴位对PCOS大鼠的干预特点不同,临床可根据PCOS患者不同的临床表现选穴.
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菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠生殖损伤
目的:研究不同剂量菟丝子黄酮干预雷公藤多苷(GTW)所致雄性幼鼠生殖损伤的影响.方法:雄性SD幼鼠80只,分2批喂养,每批40只.每批随机分为5组,空白组[ig羧甲基纤维素钠(CMC-Na)],多苷组(ig GTW,9 mg·kg-1 ·d-1),黄酮高、中、低剂量组(ig菟丝子+ GTW,0.2 g·kg-1 +9 mg·kg-1,0.1 g·kg-1 +9 mg·kg-1,0.05 g·kg-1 +9 mg·kg-1),持续给药4,12周,分别在停药时麻醉处死留取睾丸组织,称重检测脏器指数,苏木素伊红(HE)染色观察睾丸组织病理变化,实时荧光定量PCR (Real-time PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测雄激素受体(AR)mRNA及蛋白表达.结果:给药4,12周时多苷组大鼠体重、睾丸质量较空白组显著降低(P＜0.01);黄酮组大鼠体重、睾丸质量较多苷组显著提高(P＜0.01);黄酮中剂量组大鼠体重、睾丸质量较黄酮高、低剂组明显增高(P＜0.05).给药4周时,多苷组大鼠睾丸曲细精管间距变宽、曲细精管扭曲、水肿,严重者曲细精管破裂,间质细胞散乱,精原细胞、精母细胞明显减少,12周时损伤程度更重;黄酮组中剂量上述病理损伤较轻.给药4,12周后,多苷组大鼠睾丸组织AR mRNA及蛋白表达明显下调(P ＜0.05,P＜0.01),黄酮中剂量可以明显提高大鼠睾丸组织AR mRNA及蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:GTW可以明显降低大鼠体重、睾丸质量;下调睾丸组织AR mRNA及蛋白水平表达;GTW对雄性大鼠睾丸组织有明显的损伤作用,且随剂量的增加和时间延长损伤程度越重;菟丝子黄酮中剂量组保护这种损伤作用更加显著.
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滋阴清热方对金黄地鼠血清性激素及雄激素受体mRNA表达的影响
目的:探讨滋阴清热方对金黄地鼠血清性激素及雄激素受体表达的影响.方法:选用成年雄性金黄地鼠侧腹皮脂腺斑作为动物模型,随机分为4组,分别予生理盐水、滋阴清热方高剂量(18 g·kg-1)、滋阴清热方低剂量(9 g·kg-1)、安体舒通(10 mg·kg-1)灌胃给药,每天1次.4周后,采用ELISA法检测各组血清睾酮(T)、雌二醇(T2)的水平,实时荧光定量PCR法检测各组皮脂腺斑处雄激素受体(AR)mRNA的表达水平.结果:滋阴清热方高、低剂量组与空白组比较,能降低血清T水平,但无显著性差异;高剂量组血清E2水平升高,与空白组比较有显著性差异(P＜0.05).4组皮脂腺斑处AR mRNA的表达水平有显著性差异(P＜0.05),清热滋阴方高剂量组与空白组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:滋阴清热方可能是通过改善金黄地鼠血清雌二醇水平,并抑制局部雄激素受体mRNA的表达,而影响皮脂腺的增生.
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补肾中药天癸方对雄激素致不孕大鼠胰腺及卵巢雄激素受体的影响
目的:探讨补肾中药天癸方对雄激素致不孕大鼠(ASR)促排卵的作用机制.方法:新生SD雌性大鼠随机分为3组,ASR模型组:9d龄SD雌性大鼠皮下注射丙酸睾丸酮;中药组:ASR模型在81d龄起每日灌服天癸方;对照组:9d龄SD雌性大鼠皮下注射中性茶油.在106d龄左右(动情前期),放免法测定血△4-雄烯二酮(△4-A)、总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)、雌二醇(E2)、胰岛素(Ins)和C-肽(C-P),RT-PCR方法检测胰腺及卵巢雄激素受体(AR)mRNA表达水平,并观察中药治疗前后上述指标的变化.结果:ASR模型血△4-A、TT、FT、E2、Ins、C-P均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),胰腺、卵巢的AR mRNA表达水平明显升高(P<0.01);中药天癸方治疗后,排卵率为58%.各项血激素及胰腺AR mRNA表达水平明显下降,与模型组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01),卵巢AR mRNA水平与治疗前相比无明显改变.结论:ASR模型血雄激素水平升高,上调胰腺、卵巢的AR mRNA表达,引起高胰岛素血症和无排卵.天癸方可降低血雄激素和胰岛素,使胰腺AR mRNA表达水平下降,纠正ASR模型的内分泌-代谢失调状态,虽然卵巢的AR mRNA表达水平仍较高,但在正常的激素环境下仍出现了排卵.
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白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞雄激素受体表达的影响
目的:研究白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞雄激素受体信使RNA(mRNA)和胞质蛋白表达的影响,探讨中药治疗痤疮的作用机制.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测正常组,低、中、高剂量白地祛脂合剂组作用皮脂腺细胞24h后雄激素受体mRNA的表达情况;采用免疫印迹法(Western Blot)方法检测人皮脂腺细胞胞质蛋白中雄激素受体的表达情况.结果:PCR显示:低、中、高剂量白地祛脂合剂组均使皮脂腺细胞雄激素受体(AR)mRNA表达降低,分别为正常组人皮脂腺细胞的0.592、0.438、0.223倍(P＜0.05),呈现一定的量效关系,而高剂量白地祛脂合剂组皮脂腺细胞AR mRNA表达降低为明显;Western Blot显示:低、中、高剂量白地祛脂合剂组均使皮脂腺细胞雄激素受体胞质蛋白表达降低,分别为正常组人皮脂腺细胞的0.805、0.652、0.550倍(P＜0.05),呈现一定的量效关系,而高剂量白地祛脂合剂组皮脂腺细胞AR蛋白降低为明显.结论:白地祛脂合剂可能通过抑制人皮脂腺细胞AR的表达而具有拮抗雄激素受体对皮脂腺细胞的活性作用,这将为中医药治疗痤疮提供新的治疗途径,有助于从分子层次了解其作用机制.
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痤疮患者局部皮肤雄激素受体及性激素与中医相关证型的关系
目的:探讨痤疮患者局部皮肤雄激素受体(AR)及性激素与中医相关证型的关系,从激素受体的角度揭示痤疮发生的机制.方法:选择70例典型面部痤疮患者作为观察对象,15例健康者作为对照组,采用皮肤雄激素受体、血清性激素、中医辨证为指标.结果:男、女性患者的睾酮(T)值均高于对照组(P＜0.01、P＜0.05);患病部位的局部AR阳性百分率显著高于非患病部位(P＜0.01),局部皮肤的AR与血清雄激素水平无相关性(P＞0.05);不同证型组AR阳性率以肾虚火旺型高,但统计无显著差异(P＞0.05).结论:痤疮发病不仅与血清T升高有关,同时与局部毛囊上皮细胞AR有关.T与AR是痤疮异证同病的物质基础.
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脊髓延髓肌萎缩症案
患者,男,43岁,浙江人,于2010年11月8日就诊.主诉:四肢无力5年余.现病史:5年前无明显诱因出现四肢近端无力,伴有肌跳,未影响正常生活,未治疗.后因四肢无力症状缓慢发展,出现上肢抬举及上楼费力,于2008年5月19日就诊于华山医院,查多部位CT未见异常,肌电图示"广泛性神经源性损害",肌肉活检示"神经源性损伤",雄激素受体(AR)基因检测分析结果"提示Kennedy病",性激素测试示"雌二醇及睾酮升高",诊断为"肯尼迪病",给予营养神经类药物治疗.
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"肺肾相关"的物质基础
目的:通过观察雄激素受体(AR)在健康雄性大鼠气管和肺中的表达,探讨中医学"肺肾相关"的物质基础.方法:选用成年健康雄性大鼠,气管和肺冰冻切片,采用免疫组织化学LAB-SA法染色,光镜下观察AR的表达.结果:在雄性健康大鼠的气管、支气管的假复层柱状纤毛上皮、软骨细胞均有AR的阳性表达,AR特异性免疫组化染色多见于胞浆,也见于胞核.结论:肾可通过雄性激素及其受体对肺进行调节,雄激素及其受体可能是"肺肾相关"的物质基础.
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马鬃蛇对去势大鼠垂体雄激素受体水平的影响
目的:研究马鬃蛇石油醚提取物(CVPE)对去势大鼠垂体雄激素受体水平的影响.方法:大鼠麻醉,无菌下摘除双侧睾丸及附睾.术后第14天随机分为4组.1组为模型组,灌胃(ig)生理盐水,2组为CVPE低剂量组2 g·kg-1,3组为高剂量组4 g·kg-1,4组为阳性药、组皮下注射(ih)丙酸睾丸素20 mg·kg-1.连续每天1次灌胃CVPE,21 d后采用免疫组化法测定垂体雄激素受体(AR)水平,用放射免疫法测定血清睾酮水平.结果:给药组(高、低剂量组)和阳性药组的雄激素受体阳性细胞数均明显多于模型组,并显著升高血清睾酮水平,与模型组比较有显著性差异(P低＜0.05,P高＜0.01).结论:CVPE可提高成年去势大鼠的垂体雄激素受体及血清睾酮水平,提示其可能通过垂体发挥作用.
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中药复方PC-SPES Ⅱ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖及其对AR,PSA表达的影响
基于雄激素受体(AR)信号通路探讨中药复方PC-SPESⅡ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖的作用.采用MTT法检测PC-SPESⅡ对LNCaP细胞增殖的影响,显示PC-SPESⅡ质量浓度为180～1 440 mg·L-1时能显著抑制LNCaP细胞增殖,PC-SPESⅡ作用24,48 h的IC50分别为311.48,199.01 mg.L-1;流式细胞仪检测细胞周期分布的变化发现240 mg·L-1 PC-SPESⅡ能阻滞细胞于G2/M期,在G0/G1峰前出现明显的凋亡峰,随作用时间的增加而升高;同时采用Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡细胞比例,PC-SPESⅡ质量浓度为480 mg·L-1时凋亡细胞比率增加,作用效果均呈一定剂量依赖性;通过ELISA法检测LNCaP细胞分泌PSA的水平,以25mg.L-1Bic作为阳性对照药,发现480 mg· L-1PC-SPESⅡ能显著降低细胞分泌PSA;采用qRT-PCR和Western blot方法检测AR,PSA mRNA和蛋白表达的变化,结果显示以人工合成雄激素25 μg· L-1R1881诱导LNCaP细胞后,240～480 mg· L-1 PC-SPESⅡ能显著下调AR,PSAmRNA和蛋白表达,抑制AR由细胞质转移入细胞核.以上结果表明,PC-SPESⅡ对LNCaP细胞体外增殖有抑制作用,阻滞细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调AR,PSA的表达,抑制AR核转位有关.
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益肾填精中药对环境内分泌干扰物染毒大鼠睾酮合成关键酶及雄激素受体表达的影响
目的 观察益肾填精中药对邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)及氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)染毒大鼠睾酮合成关键酶和雄激素受体(androgen receptor,AR)基因及蛋白表达水平的影响,探讨所用中药拮抗环境内分泌干扰物(environmental endocrine disruptors,EEDs)抗雄激素活性的可能作用机制.方法 70只21日龄雄性SD大鼠随机分为7组,每组10只.对照组(喂饲玉米油)、染毒A组(DEHP 500 mg/kg)、染毒B组(CYP 80 mg/kg)、染毒C组(DEHP 500 mg/kg+CYP 80 mg/kg)及治疗A组、治疗B组、治疗C组,治疗A、B、C组同时喂饲益肾填精中药合剂(40 mL/kg).每日空腹灌胃给药,疗程为30天.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,real time-PCR)及免疫印迹方法(Western blot),分别检测StAR、CYP11 A1、CYP17A1、3β-HSD、17β-HSD、AR mRNA及蛋白表达水平.结果 与对照组比较,染毒A、B、C组StAR、CYP1 1 A1、CYP17A1、3β-HSD、17 β-HSD、AR mRNA表达水平显著下调(P ＜0.05,P＜0.01).中药治疗干预可使上述基因表达水平明显上调(P ＜0.05,P＜0.01).DEHP、CYP单独及联合染毒可导致CYP11 A1、CYP17A1、AR蛋白表达水平显著下调(P ＜0.05,P＜0.01),而中药治疗干预可使上述蛋白表达水平显著上调(P ＜0.05,P＜0.01).结论 益肾填精中药可通过使睾丸的AR以及睾酮合成关键酶的表达上调,促进染毒大鼠自身睾酮的生物合成,多水平、多靶点地发挥其对EEDs抗雄激素活性及生殖毒性的拮抗作用.
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密蒙花提取物滴眼剂对实验性干眼症大鼠泪腺组织雄激素受体数量的影响
目的 观察密蒙花提取物滴眼剂对去势所致干眼症雄鼠基础泪液分泌量、泪膜稳定性及泪腺中雄激素受体(AR)表达的影响,探讨密蒙花提取物滴眼剂抗雄激素水平下降所致干眼症的作用机制.方法 将45只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、密蒙花提取物滴眼剂治疗组(治疗组),每组又分为饲养1、2、3个月的3个亚组,共9组,每组5只,模型组及治疗组行去势术建立动物模型,治疗组以密蒙花提取物滴眼剂连续滴眼治疗1个月,对大鼠行Schirmer Ⅰ试验(SIT)、测量泪膜破裂时间(BUT),采用流式细胞仪检测泪腺中AR的表达.结果 模型组1、2、3个月亚组SIT值、BUT及AR表达低于同期空白组(P＜0.01)；治疗组与模型组间比较以3个月的亚组为例,给药后,治疗组SIT值(12.667±5.221)mm,明显高于模型组(2.676±1.987) mm；治疗组BUT( 11.758±4.415)s,明显长于模型组(4.667±2.108)s；治疗组AR阳性表达率(49.33±3.44)％,明显高于模型组(33.32±7.12)％ (P ＜0.01).结论 密蒙花提取物滴眼剂中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制雄激素水平降低后大鼠干眼症的发生,其作用机制可能与黄酮类物质结构与雄激素类似相关.
