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早期自然流产胎盘绒毛基质金属蛋白酶-2表达增强
早期自然流产(early spontaneous abortion)是指妊娠12周内胚胎或胎儿在宫内停止发育而排出的病理性妊娠,发生率占全部自然流产的62%以上.胎盘形成过程中,滋养层细胞对子宫蜕膜的侵入及对子宫螺旋小动脉的"血管重铸"是胎盘建成的关键步骤.基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein-ases,MMPs)是一组含有Zn2+能降解绝大多数细胞外基质(extracellular,ECM)的肽链内切酶.研究证实,MMP-2和9是恒河猴滋养层细胞侵入子宫内膜和胎盘形成的关键因子[1],但对人早期自然流产过程中的表达情况尚未见报道.本研究首次采用明胶酶谱法研究早期自然流产胎盘绒毛中MMP-2和9的活性变化,以探讨其与早期自然流产的关系.
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不同种属来源明胶及其他因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶的影响
金属蛋白酶-2(MMP-2,明胶酶A)与金属蛋白酶-9(MMP-9,明胶酶B)在多种生理过程中起作用,病理状态下如肿瘤、心血管疾病和呼吸系统疾病,则这些酶的表达和活性增加[1-2].明胶酶谱法多用于检测血浆、细胞培养上清及组织中的金属蛋白酶-2和9的活性[3],我们先前的实验发现不同来源的明胶直接影响明胶酶谱法结果,不同方式处理样本对酶的活性检测有影响,本研究就明胶的来源(自猪、牛皮肤提取)是否影响金属蛋白酶活性的检测,以及不同样本量、样本储存温度、反复冻融等因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶活性的影响进行探讨.
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干扰素-α对人肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用
目的:研究人干扰素-α对人肝癌细胞系BEL-7402细胞增殖及侵袭的抑制作用.方法:常规培养的BEL-7402细胞加入人干扰素-α(1×106U/L)共同孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化;明胶酶谱法检测肝癌细胞基质金属蛋白酶的变化.免疫组化法检测肿瘤细胞增殖核抗原的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡.结果:人干扰素-α可以明显抑制体外BEL-7402细胞的增殖(抑制率为20.2%);干扰素-α作用后在Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显减少(抑制率为23.9%);肝癌细胞基质金属蛋白酶的分泌没有明显变化.干扰素-α组肿瘤细胞增殖核抗原的表达明显下降,凋亡细胞数明显增加.结论:低剂量的干扰素-α可以直接抑制肝癌细胞株BEL-7402的增殖,对BEL-7402细胞的侵袭有明显的抑制作用;可以抑制肿瘤细胞增殖核抗原的表达并诱导细胞凋亡.
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恶性腹水基质金属蛋白酶活性分析
目的:初步探讨基质金属蛋白酶与恶性腹水的关系.方法:收集腹水患者67例,男38例,女29例.肝硬化腹水36例,结核性腹水8例,恶性腹水23例.用明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶活性.结果:肝硬化腹水、结核性腹水不能检出基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)活性,而恶性腹水MMP-2检出率为87.0%,MMP-9检出率为78.3%,且MMP-2活性高于MMP-9活性(0.01<P=0.022<0.05).结论:基质金属蛋白酶活性检测对于良、恶性腹水的鉴别诊断有重要价值,他可能与恶性腹水形成有关.
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HAb18G/CD147拮抗肽抗肝癌转移作用的体外实验
目的:筛选获得HAbl8G/CDl47高亲和性拮抗肽中具有体外抗肝癌细胞转移作用的拮抗肽.方法:对于采用HAbl8G/CDl47纯抗原筛选噬菌体随机12肽库所获得的9条高亲和性的12肽(AP-l-AP-9).分别采用:MTT法测定AP-l-Ap-9的对肝癌细胞(HHCC)的直接毒性;明胶酶谱法分析APl-AP-9对基质金属蛋白酶(MMP s)产生及其激活过程的影响;重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭抑制实验测定AP-l-9对肝癌细胞(HHCC)侵袭力的的影响;观察AP-1-AP-9对HHCC与细胞外基质蛋白(Matrigel,FN,LN,CollogenⅣ)、HHCC与间质细胞(成纤维细胞fb)黏附能力;以及APl-9对HHCC运动能力的影响.结果:拮抗肽AP-1-AP-9对HHCC无明显细胞毒性作用;Ap-1,6,9对HHCC刺激fb细胞产生MMP-2其激活过程具有明显的抑制作用;AP-1,3,6,7,8,9对HHCC侵袭力有明显的抑制作用(P<0.05),抑制率分别为78.22%,90.1%,62.83%,56.44%,68.32%和81.19%;9条拮抗肽对HHCC与细胞外基质蛋白Matrigel,FN无明显的抑制作用,但AP-3,9对HHCC与CollogenⅣ,LN的黏附有抑制作用;AP-1,6,9对HHCC与fb细胞之间的黏附有抑制作用;AP-6可抑制HHCC的运动能力,抑制率54%,但统计学上差异无显著性(P>0.05).结论:HAbl8G/CDl47拮抗肽(AP-l-AP-9)对肝癌的侵袭转移相关的多个环节有明显的抑制作用,为研究开发新的抗肿瘤转移多肽药物开辟了新途径.
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Ⅳ型胶原酶活性检测在良、恶性腹水鉴别诊断中的价值
近年的研究表明,基质金属蛋白酶类(MMPs)、尤其是Ⅳ型胶原酶(包括MMP-2和MMP-9)与多种肿瘤的生长、浸润、转移密切相关.而恶性腹水是恶性肿瘤腹膜侵袭和转移的结果,故可推测恶性腹水中有望检测到Ⅳ型胶原酶.我们通过明胶酶谱法测定各种类型腹水中Ⅳ型胶原酶活性,以期为临床上腹水的鉴别诊断提供重要参考.
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肝癌中基质金属蛋白酶-9表达的临床意义
已有资料表明,肿瘤细胞能分泌大量基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP),且具有高转移倾向的肿瘤细胞分泌的金属蛋白酶的含量亦高,对肿瘤的侵袭和转移起着极为重要的作用〔1〕。基质金属蛋白酶-9(MMP-9,E.C.)是金属蛋白酶类的主要成员之一。我们应用逆转录聚合酶链反应和明胶酶谱法检测肝细胞癌(HCC)组织、癌栓组织和癌旁组织中MMP-9 mRNA的表达水平和酶活性表达,以探讨其在HCC侵袭和转移过程中的意义。 1.资料与方法:7例正常肝组织,47例手术切除并病理证实的癌及癌旁组织,其中8例有门静脉主干癌栓。有包膜者25例,无包膜者22例。大肝癌24例(>5 cm),小肝癌23例(≤5 cm)。所有病例均无肝外转移征象。方法:(1)RT-PCR:使用Trizol溶液一步提取mRNA,条件为94℃ 1 min,65℃ 1 min,循环30次。扩增条带特异性经酶切分析证实。PCR产物经2%琼脂糖电泳,VDS扫描。以MMP-9和内标β-actin扫描值的比值作为MMP-9 mRNA的表达相对值,半定量分析MMP-9 mRNA表达水平。(2)明胶酶谱法:制备蛋白抽提液,行SDS-PAGE电泳后,将凝胶分别置于洗脱液、漂洗液、孵育液、染色液、脱色液中处理,后拍照。(3)统计学处理:MMP-9 mRNA表达相对值以±S,两组间均数采用t检验,两组间率采用χ2检验。
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DENA诱导大鼠肝细胞癌过程中明胶酶A表达的动态变化
近年来国外学者通过多种方法证实明胶酶A与多种肿瘤发生发展有密切关系[1,2],但关于其在肝癌形成过程中的作用,国内外鲜有探讨.我们建立了大鼠原发性肝细胞癌模型,应用明胶酶谱法和RT-PCR法观察肝癌形成过程中明胶酶A酶原、活性形式及mRNA的动态改变,探讨肝癌形成过程中明胶酶A的生物学变化.
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TGF-β1在后发性白内障形成中的作用--TGF-β1对牛晶状体上皮细胞明胶酶表达的影响
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对牛晶状体上皮细胞明胶酶活性的影响及其在后发性白内障形成中的作用.方法对牛晶状体上皮细胞进行体外原代及传代培养.分别收集原代、1代、2代、3代体外培养牛晶状体上皮细胞培养液;对1代细胞加入TGF-β1(终浓度10 ng/mL),收集12 h、24h、36 h、48 h和72 h细胞培养液,酶谱法检测明胶酶活性.结果不加TGF-β1的原代、1代、2代、3代细胞培养液中未检测到明胶酶活性;加入TGF-β1后各个时间点均能检测到明胶酶活性,且条代密度随时间呈上升趋势.结论TGF-β1能够诱导牛晶状体上皮细胞明胶酶的表达.TGF-β1和明胶酶共同作用,可能加速后发性白内障的形成.
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原位明胶酶谱法检测胶质瘤18例基质金属蛋白酶活性
胶质瘤是常见脑肿瘤之一,具有肿瘤早期就能侵袭周边正常脑组织的特性,尤其是胶质母细胞瘤,恶性度高.基质金属蛋白酶(MMPs)是一组锌依赖性内肽酶,与肿瘤细胞侵袭、转移相关的细胞外基质(ECM)降解过程密切相关[1],目前已知有26 种,其中对MMP-2 和MMP-9 的研究比较深入.MMPs 的活性会受到基因转录水平、无活性酶前体经蛋白水解作用而激活,以及特异性抑制因子(TIMP)等的影响.本研究的目的是了解胶质瘤有无表达MMPs活性、活性具体表达的部位,以及与恶性度的关系.
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梅花鹿基质金属蛋白酶-13催化域的原核表达和活性分析
目的 利用基因工程技术体外表达梅花鹿基质金属蛋白酶-13(MMP-13)催化域并初步探讨其活性,为进一步研究鹿茸再生和快速增长机制奠定基础.方法 从梅花鹿鹿茸转录组数据中获得cdMMP-13基因序列,通过运用PCR方法获得了编码催化域(cdMMP-13)的cDNA序列,构建重组质粒pET28a-cdMMP-13后,转化大肠杆菌,利用IPTG诱导蛋白表达并纯化蛋白,表达产物经复性后鉴定酶活性.结果 表达产物为21 KDa的融合蛋白且具有明显明胶酶活性.结论 体外表达的具有催化活性的融合蛋白可为研究鹿茸快速生长和再生机制提供材料和基础.
关键词: 梅花鹿 基质金属蛋白酶-13 催化域 明胶酶谱法 -
格尔德霉素对HGF诱导的人胶质瘤细胞MMP-2及MMP-9活性的影响
目的 研究格尔德霉素(geldanamycin,GDM)对肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导的人胶质瘤细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2及MMP-9活性的影响.方法 应用细胞培养技术培养人恶性胶质瘤细胞系U251-MG和U87-MG,用酶谱法测定MMP-2及MMP-9活性.结果 HGF作用24 h后,U251-MG细胞中MMP-2及MMP-9活性较正常组明显增强(P<0.05);而GDM组则能够显著抑制其活性(P<0.05),并且1000 nmol/L的GDM对HGF诱导的肿瘤细胞MMP-2及MMP-9活性增强有明显抑制作用(P<0.05).结论 GDM能够抑制胶质瘤细胞MMP-2及MMP-9的表达,而且对HGF诱导的人胶质瘤细胞MMP-2及MMP-9的活性增强具有明显抑制作用.
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左-甲状腺素诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶的变化及新内皮素受体拮抗剂CPU-0213的作用
目的:通过新内皮素受体拮抗剂CPU-0213对左-甲状腺素(L-thy)诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶(MMPs)的改变,探讨内皮素参与诱导心肌肥大和细胞外基质改变的机制.方法:雄性SD大鼠随机分成3组,除对照组外,大鼠每日给予L-thy(sc,0.4 mg/kg)共10 d,药物干预组在第7天时给新型内皮素受体拮抗剂CPU-0213(po,100mg/kg),连续3 d.动物处死后取大鼠心脏测定心肌组织中总胶原含量、MDA的含量及SOD活性.大鼠左心室的MMPs的活性由明胶酶谱法测定,Ⅰ型胶原基因(proa2(Ⅰ)coⅡagen)的基因表达由半定量RT-PCR方法确定.结果:L-thy心肌病组大鼠心肌中的总胶原含量减少,SOD活性下降,MDA含量增多,MMPs的活性被抑制.RT-PCR结果显示L-thy组的大鼠左心室proa2(Ⅰ)collagen的基因表达下调.给予CPU-0213干预后大鼠心肌总胶原含量及SOD活性上升,MDA含量减少,大鼠左心室中MMPs活性被抑制,左心室中proa2(Ⅰ)collagen的基因表达上调.结论:L-thy诱导的大鼠心肌肥大是一种缺少纤维化的肥大,肥大心肌中自由基增多且脂质膜受损.内皮素-1(ET-1)参与介导心肌MMPs活性的调节,新内皮素受体拮抗剂CPU-0213能明显上调proa2(Ⅰ)collagen的基因表达及改善心肌病理性重构.
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紫癜性肾炎患儿血清、尿液明胶酶活性变化的意义
目的研究紫癜性肾炎患儿血清与尿液明胶酶A(MMP-2)与B(MMP-9)活性变化及意义.方法将过敏性紫癜患儿分为紫癜性肾炎组23例与单纯紫癜组12例,以健康16例儿童作对照组,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)明胶酶谱法检测其血清与尿液明胶酶活性.结果与健康对照组比较,紫癜性肾炎组与单纯紫癜组血清除检测到非活化态明胶酶A与B活性外,还检测到活化态明胶酶B活性;与正常组与单纯紫癜组比较,紫癜性肾炎组尿液活化态明胶酶A与B表达明显增多,24 h蛋白尿>1 g组活性分别是<1 g组的2.9与2.5倍.结论紫癜性肾炎患儿尿液明胶酶A、B活性明显增加,其活性变化与尿蛋白程度密切相关.
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缝线诱导大鼠角膜新生血管模型MMP-2活性检测
目的 探讨在角膜新生血管形成过程中基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)酶活性的改变.方法 30只大鼠任选一眼采用角膜基质层间断缝线诱导角膜新生血管模型,另眼作为对照.对缝线后8 d角膜新生血管模型和正常对照角膜的MMP-2酶活性分别进行明胶酶谱法检测.结果 剔除5眼失败模型,另外25眼角膜基质缝线诱导的新生血管生长稳定,8 d生长到达或超过缝线位置;新生血管角膜模型的酶谱中可区分出72 kDa的MMP-2酶原和62 kDa的活性酶,而在正常角膜MMP-2主要以72 kDa酶原形式存在,检测不到62 kDa MMP-2活性酶条带;MMP-2酶原在新生血管角膜的含量(积分光密度IOD值)明显高于正常角膜(6.93±0.75和4.99±0.53,t=7.728,P<0.01),新生血管角膜MMP-2活性酶表达的IOD值为0.47±0.13,正常角膜为0.结论 角膜新生血管形成过程中MMP-2以活性酶形式参与其调控机制,同时酶原合成也明显增加.
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难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层金属基质蛋白酶-9的表达
目的 研究成人难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在难治性癫痫发病中的作用机制.方法 收集新桥医院神经外科手术切除的成人难治性颞叶癫痫颞叶皮层标本24例,与15例正常对照皮层比较,运用RT-PCR、明胶酶谱法和免疫组织化学方法检测MMP-9在致痫灶中的表达分布.结果 在难治性颞叶癫痫患者颞叶皮层中,MMP-9在mRNA、酶活性较对照组明显升高(P<0.05).免疫组化结果显示,在正常皮层中MMP-9弱至中等强度表达于神经元上,偶见胶质细胞表达,而在致痫灶中强表达于锥体神经元和星形胶质细胞上,免疫染色强度明显高于正常皮层[染色强度值:(2.13±0.56)vs(1.52±0.69);相对光密度值:(55.60±7.20)vs(37.10±8.70);P<0.05].结论 难治性颞叶癫痫患者颞叶致病皮层中MMP-9表达增高可能与癫痫发病密切相关,有可能成为新的难治性癫痫的药物靶点.