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用含底物SDS-PAGE检测明胶酶活性
将明胶加入SDS-聚丙烯酰胺凝胶中,电泳后样品中所含明胶酶按分子量大小不同停留于凝胶中的特定位置.用TritonX-100除去SDS使酶复性后,明胶酶便可分解凝胶中的底物.底物被分解处考马斯亮蓝染色时不着色,因此在蓝色背景下可见酶所在位置呈白色条带,根据白色条带的深浅和宽窄可判断酶活性的高低.用此方法检查了大鼠不同组织中的明胶酶活性及传代培养对血管平滑肌细胞分泌明胶酶的影响.结果显示,大鼠不同组织及不同龄大鼠同种组织明胶酶活性存在差异.另外,传代培养的平滑肌细胞与组织间分泌明胶酶的种类亦不同.
关键词: SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 明胶酶 -
RAB5A反义RNA对人肺腺癌细胞系侵袭转移影响的体外研究
目的已知RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌恶性表型形成相关,本研究在此基础上进一步探讨该基因过表达在人肺腺癌恶性演进中的作用.方法将RAB5A反义表达载体稳定转染入高浸润人肺腺癌细胞系L18和高转移人肺腺癌细胞系95D中,采用重组基底膜侵袭、与基底膜成分黏附能力测定、趋化运动能力测定、明胶酶分泌与活性检测等体外实验方法观察转染前后细胞生物学特性的改变.结果RAB5A反义RNA稳定转染后L18细胞趋化运动和侵袭基底膜能力显著降低(P<0.05),明胶酶活性检测发现转染后细胞MMP-2的分泌能力明显减弱;稳定转染后95D细胞趋化运动和侵袭基膜能力显著降低(P<0.05). 结论体外实验显示,RAB5A基因过表达对肿瘤细胞的趋化运动能力和侵袭重组基底膜能力起重要作用,进一步提示RAB5A基因过表达在人肺腺癌的侵袭转移过程中发挥一定作用.
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金属蛋白酶-9及抑制剂与急性呼吸窘迫综合征的关系
1 金属蛋白酶-9MMPs按其结构和底物可分为5类:胶原酶、明胶酶、基质溶解酶、弹性蛋白酶、膜型酶.明胶酶只有两种:MMP-2(明胶酶A)和MMP-9(明胶酶B).
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亚低温对脑缺血再灌注后血脑屏障损伤及明胶酶活性的影响
目的:应用MRI动态监测亚低温对脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的影响,并探讨其保护机制.方法:雄性Wistar大鼠42只,随机分为常温缺血组、亚低温缺血组和假手术组.线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别于再灌注3.5h、24h和5d行T1WI增强扫描,再灌注24h和5d进行大鼠神经功能缺损评分,脑组织明胶酶活性测定,以及明胶酶活性与磁共振表现的相关分析.结果:亚低温治疗明显减小了各时间点T1WI信号强化的范围和强度,显著降低缺血再灌注早期及晚期神经功能缺损评分和脑组织明胶酶活性.常温缺血组再灌注24h后MMP-9活性与T1WI信号强化范围正相关.结论:亚低温能明显减轻缺血再灌注后血脑屏障损伤的范围和程度,促进神经功能恢复,其保护机制可能与亚低温降低MMP-9、MMP-2的活性有关.
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非霍奇金淋巴瘤患者血清中MMP-9和MMP-2蛋白的检测及临床意义
肿瘤细胞及其基质细胞分泌的明胶酶B(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和明胶酶A(matrix metalloprotein-ase-2, MMP-2)在促血管生成、肿瘤细胞侵袭和转移灶形成中的作用已日益引起人们的关注[1,2].
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不同组织微环境中人胃癌异种移植瘤生物学行为及明胶酶的表达差异
目的: 探讨不同组织微环境中明胶酶在异种移植瘤中的表达差异及其对移植瘤生物学行为的影响.方法: 应用原位杂交方法分别检测皮下移植瘤及腹腔移植瘤中MMP-2 mRNA,MMP-9 mRNA的表达情况,并应用常规HE染色观察不同移植瘤的生物学行为表现.结果: 人胃癌裸小鼠皮下异种移植瘤呈膨胀性生长,侵袭性不明显;腹腔内移植瘤呈侵袭性生长;MMP-2及MMP-9 mRNA在皮下移植瘤细胞及间质表达阴性,在腹腔移植瘤为阳性表达,且表达呈部位特异性,即癌巢边缘部位的癌细胞胞质和/或包膜阳性表达.结论: 相同来源的瘤组织在不同的微环境中,生长方式明显不同,组织环境对肿瘤侵袭表型有很大影响;明胶酶的表达与肿瘤生长方式及侵袭性有密切联系.
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大鼠肝细胞癌形成过程中MMP-2mRNA的表达及应用BB-94的影响
目的:观察肝癌形成过程中MMP-2mRNA表达的动态变化,探索明胶酶在肝癌生长浸润中的作用.应用明胶酶抑制剂Batimastat(BB-94)进行治疗,观察其对明胶酶mRNA表达的影响.方法:应用RT-PCR法对大鼠肝癌形成过程中各期MMP-2mRNA表达情况进行观察,并与Batimastat治疗组和正常对照组进行统计分析.结果:诱癌过程中早期肝硬化期MMP-2mRNA表达成缓慢增高趋势,至癌变期表达明显较增高,并呈-平台.诱癌不同时期应用BB-94对MMP-2mRNA相对表达值无影响.结论:诱癌过程中MMP-2mRNA表达持续升高.BB-94治疗对MMP-2mRNA的表达没有影响.
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冠状动脉内支架术后即刻明胶酶变化的研究
目的:探讨在急性心肌梗塞患者冠状动脉支架术后(PTCA)明胶酶的变化;方法:15例确诊为单支血管病变的急性心肌梗塞患者,在PTCA术前及术后5分钟内冠状动脉窦内取抗凝血2ml,利用Gelatin-PAGE法测冠状动脉内明胶酶的活性表达;结果:在术后明胶酶A比术前高(P<0.05),明胶酶B与术前无明显变化(P>0.05).结论:明胶酶可能参与支架术后再狭窄过程.
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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白早期预测心力衰竭患者并发急性肾损伤的研究进展
心力衰竭(心衰)的发病率逐年升高,已成为全球的公共卫生问题,严重威胁人类健康。有文献报道[1],根据美国和欧洲的统计数据,心衰发病率约在1%~12%。病程中易出现急性肾损伤(AKI),其发病率高,早期症状不典型,缺乏早期诊断指标,使诊治延迟,影响预后。近期相关研究[2]显示,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)可作为早期预测AKI新型的特异性指标。NGAL能否早期预测心衰患者并发AKI的观点尚不统一,本文对此做一综述。
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非小细胞肺癌患者体内中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和核因子-κB的表达及其与化疗患者预后的相关性
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutro-philgelatinase-associated lipocalin,NGAL)是载脂蛋白家族成员,定位于染色体9q34上,与小鼠癌基因产物24p3高度同源[1],可能是人类的一种新的癌基因,近年来受到人们的重视.研究结果显示,NGAL基因在肿瘤组织和细胞系中表达增高,猜测其与肿瘤的发生、发展及预后存在着一定的关系,但其作用机制尚不清楚.
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P38MAPK信号通路、p-P42/P44MAPK、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在肾脏纤维化过程中的作用
肾脏纤维化是所有慢性肾脏疾病进展至终末期肾衰竭的共同通路.近年的研究显示,肾小管间质病变在慢性肾衰竭进展中与肾小球疾病发挥着同样重要作用.
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基质金属蛋白酶及其抑制因子在脑外伤大鼠脑水肿区表达的研究
1目的脑外伤后继发脑水肿是血管源性脑水肿,血管基底膜损坏可能在血管源性脑水肿中起重要作用.明胶酶A(gelatinase A,又称MMP-2)和明胶酶B(celatinase B,又称MMP-9)可降解血管基底膜的主要成分--Ⅳ型胶原.我们用逆转录定量PCR方法研究大鼠脑外伤后水肿区脑组织基质金属蛋白酶(tissue matrix metalloproteinases,MMPs)及其抑制因子(tissue inhibiter of matrix metalloproteinases,TIMPs)基因表达情况,探讨其与脑水肿发生机制的关系.
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明胶酶与脑血管疾病的血管损伤及保护
细胞外基质(extracellular matrix,ECM)是细胞之间的物质,由多种蛋白质和非蛋白成分组成,构成细胞生活的微环境,具有支持、连结、营养和防御的作用.他们处在不断代谢、更新、降解、重塑的动态平衡中,这种平衡的失调与体内多种病理过程密切相关[1].基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是降解ECM的重要的蛋白酶[2],其中,明胶酶A和明胶酶B与脑血管疾病发生、发展的病理生理机制密切相关.
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早期食管癌患者明胶酶A基因的表达
近来的研究表明,基质金属蛋白酶(MMPs)在恶性肿瘤的浸润、转移中发挥了重要作用.明胶酶A是MMP的一种,它在晚期食管癌浸润、转移中作用的研究已有报道[1,2].恶性肿瘤是否到晚期才有向外侵及的能力?早期食管癌患者MMPs有无变化?我们用定量RT-PCR方法研究了早期食管癌患者明胶酶A基因表达的情况,现报道如下.
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中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白临床应用研究进展
中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL) 1993年于中性粒细胞内的过氧化物酶颗粒中被发现[1].生理条件下少量合成于骨髓中性粒细胞的中幼及晚幼阶段,炎症反应和恶性肿瘤可诱使其在多组织(如子宫、前列腺、唾液腺、肺、肾、气道及消化道上皮等)中大量生成.
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胃癌患者明胶酶A基因表达的研究
向周围组织浸润是恶性肿瘤的典型特征;对细胞外基质的溶解是肿瘤细胞向外扩散的基础。近来的研究表明基质金属蛋白酶(MMPs)在肿瘤溶解细胞外基质向外侵袭中发挥了重要作用。明胶酶A(MMP2)是基质金属蛋白酶的一种,它在乳腺癌、前列腺癌及结肠癌中的研究已有报道,本研究旨在了解明胶酶A在胃癌浸润、转移中的作用。
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胃癌组织中明胶酶B的表达及其意义
近来的研究表明基质金属蛋白酶在肿瘤溶解细胞外基质向外侵袭中发挥了重要的作用.明胶酶B(gelatinase B MMP9)是基质金属蛋白酶的一种,本研究旨在了解MMP9在胃癌浸润、转移中的作用.
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腹腔镜手术CO2气腹对患者血NGAL和Cystatin C水平及NGAL基因表达的影响
急性肾损伤(acute kidney injury;AKI)是临床常见的急危重症.本研究通过检测腹腔镜手术患者血中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin;NGAL)和胱抑素C(cystatin C;Cys C)的变化,及NGAL蛋白及mRNA表达水平的变化,评估腹腔镜手术CO2气腹对肾功能的影响.
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直肠癌组织中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白mRNA的表达及其临床意义
中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)是Lipocalin家族的新成员,在乳腺癌等恶性肿瘤中异常表达,并与肿瘤的浸润、转移、预后密切相关[1],成为近年来肿瘤研究领域的一个新热点,本研究旨在探讨NGAL在直肠癌中的表达特点及其临床意义.
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光老化皮肤中基质金属蛋白酶增高的信号转导机制及防治策略
紫外线(ultraviolet,UV)是导致皮肤老化的重要的外源性因素,由UV引起的皮肤老化称之为皮肤光老化[1,2].皮肤光老化重要的变化主要是由于以细胞外基质为底物的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)增高所致的纤维结缔组织降解.MMPs包括胶原酶、明胶酶和基质溶解素等,是由MMP基因编码的一组金属依赖性蛋白酶家族[3,4].随着对UV引起的MMPs增高的信息转导通路了解的增多,不仅加深了人们对皮肤光老化的认识,同时也为其防治研究提供了新的思路.